益活清胰汤与葡激酶在大鼠重症急性胰腺炎治疗中的协同作用

[目的]研究葡激酶(r-Sak)和益活清胰汤对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)的治疗作用及2药合用的协同作用.[方法]162只SD大鼠随机分为假手术(A)组(n=18)、造模(B)组、益活清胰汤治疗(C)组、r-Sak治疗(D)组及益活清胰汤合用r-Sak治疗(E)组(均n=36).每组随机选9只用于测定18 h存活情况,SAP造模术后6、12、18h各取9只测定胰腺血流量,计算腹水量,测定血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LPO),并在光镜下观察胰腺病理变化.[结果]A、B、C、D和E组大鼠18 h存活数分别为9、2、6、7、8只.A、C、D、E 4组SAP术后6、12、18 h AMY、LPO、腹水均较B组明显降低,C组较D组低,E组较C、D组低(均P＜0.05).术后各时点B组胰组织血流量呈逐渐下降趋势,B、C、D、E组较A组显著下降(P＜0.05).C、D、E 3组各时点胰组织血流量降低值＜B组,D组＜C组,E组＜C、D组(均P＜0.05).C、D、E组胰腺的病理损伤程度较B组减轻.[结论]r-Sak及益活清胰汤均对大鼠SAP具有治疗作用,且2药具有协同作用.     

重组葡激酶对重症急性胰腺炎大鼠心肌损伤的治疗作用

[目的]研究重组葡激酶(r-Sak)对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)的发展及心肌损伤的干预作用,探讨其作用机制.[方法]63只SD大鼠随机分为假手术(A)组(n=9),模型对照(B)组(n=27),r-Sak治疗(C)组(n=27).SAP模型采用5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射方法建立.ELISA法测定6、12、18 h各时点血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)及心肌肌钙蛋白(CTn1)水平,免疫组化法检测术后6、12、18 h各时点心肌核转录因子-κB(NF-κB)的活化情况,光镜及电镜下观察胰腺及心肌组织的病理变化.[结果]大鼠从术后6 h开始出现CTn1、CK-MB升高,治疗组各时点较对照组明显下降(P＜0.05).IL-6、TNF-α水平亦从术后6 h开始升高,其变化在时点上与CTn1、CK-MB的变化具有一致性,治疗组各时点与对照组相比明显下降(P＜0.05).治疗组胰腺及心肌组织的出血坏死减轻,微血管血栓的形成减少.[结论]r-Sak能减轻SAP的病变程度和心肌损伤,可能具有治疗SAP及预防心肌损伤等并发症的作用,特异性溶栓剂的应用可能成为治疗SAP的新途径.     

重组葡激酶不同给药途径治疗幼猪急性脑栓塞的比较研究

目的 :比较重组葡激酶 (r Sa K)不同给药途径治疗幼猪急性脑栓塞的疗效。方法 :采用颈内动脉注入体外血栓法建立幼猪急性脑栓塞动物模型 ,4小时后自颈部动脉导管或腹壁静脉应用 r Sa K(剂量分别为0 .8× 10 4 、1.6× 10 4 、3.2× 10 4 U / kg) ;对照组用安慰剂。治疗结束后 30、6 0和 90分钟行脑血管造影 ,同时检测凝血指标。结果 :动脉给药组和静脉给药组的血管再通率均高于对照组 (P均 <0 .0 5 ) ,但 2组之间无显著性差异 ;2组对凝血功能的影响均较小。结论 :颈内动脉或周围静脉应用 r Sa K均能安全、有效地溶化猪脑血栓。     

Staphylokinase reduces plasmin formation by endogenous plasminogen activators

Hyperfibrinolysis is a consequence of imbalance between fibrinolytic activators and their inhibitors. Increased levels of circulating plasminogen (Plg) activators such as tissue- or urokinase-type plasminogen activators (tPA or uPA respectively) are the most common causes of hyperfibrinolysis, occasionally causing major hemorrhages. We found that staphylokinase (SAK), a well-known Plg activator of bacterial origin, inhibits Plg activation mediated by endogenous tPA and uPA. Furthermore, mixture of SAK with tPA led to a significantly reduced Plg-dependent fibrinolysis. This inhibitory effect was exerted through direct action of SAK on Plg rather than indirectly on tPA or uPA. Inhibition of Plg activation by SAK is readily abrogated by interaction of SAK with human neutrophil peptides (HNPs). Finally, we show that NH2-terminal residues of SAK are important for the inhibitory effect of SAK on tPA- and uPA-mediated Plg activation. In conclusion, SAK reduces tPA/uPA-mediated Plg activation by means of SAK.Plg complex formation, consequently downregulating tPA/uPA-induced fibrinolysis.     

重组葡激酶动静脉途径溶栓治疗犬急性脑梗死对照研究

目的 研究重组葡激酶(r-Sak)经不同途径溶栓治疗犬急性脑栓塞的疗效、并发症及对凝血纤溶系统的影响.方法 成年毕格犬24条,随机分为对照组、r-Sak动脉组、r-Sak静脉组.用介入技术建立犬急性脑栓塞模型,栓塞后5 h(静脉3 h)行脑血管造影观察被栓塞的左颈内动脉通畅情况,继而经成功栓塞的左颈内动脉或股静脉于30 min内注入r-Sak行溶栓治疗(r-Sak组:r-Sak 10 000 u/kg;对照组:生理盐水10 ml).治疗后30、60和120 min分别测定凝血指标并再行脑血管造影观察栓塞血管的再通情况,24 h内对犬作行为学观察,24 h后处死动物行病理检查.结果 溶栓后2 h对照组、r-Sak动脉组和r-Sak静脉组的血管再通率分别为0.0%、93.3%和37.5%,两治疗组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);3组完全再通的比率分别为0%、60%和6.7%;血管再通率和完全再通率于动脉组明显高出静脉组(P＜0.05).r-Sak两组对凝血纤溶系统影响的比较无明显差异.24 h内无严重并发症.结论 重组葡激酶具有较强的血栓溶解作用,动脉途径给药比静脉法更能有效溶解脑内血栓.     

葡萄球菌激酶对家兔颈动脉血栓的溶栓作用

目的；研究葡萄球菌激酶的溶栓作用及其特点，方法：家兔颈动脉挂线方法形成颈动脉血栓模型，并于给药前后取血测定优球蛋白溶解时间，纤维蛋白（原）降解产物值，纤维蛋白原含量。结果：葡萄球菌激酶能明显降低家兔颈动脉血栓的湿重。溶栓过程中，优球蛋白溶解时间缩短，纤维蛋白（原）降解产物值增加，而血液中纤维蛋白原含量无明显变化。结论；葡萄球菌激酶具有显著的溶栓作用。     

A new recombinant thrombolytic and antithrombotic agent with higher fibrin affinity – a staphylokinase variant. I. In vitro study

We attempted to construct a new recombinant protein characterized by fibrin-specific properties of plasminogen activation combined with antithrombin and antiplatelet activities. To the C-terminal part of recombinant staphylokinase (r-SAK), which is a promising profibrinolytic agent, we assembled: (i) the Kringle 2 domain (K2) of tissue-type plasminogen activator (t-PA), containing a fibrin-specific binding site, (ii) the RGD sequence (Arg-Gly-Asp) for the prevention of platelet aggregation and (iii) the antithrombotic agent - hirudin. The cDNA for hybrid protein SAK-RGD-K2-Hir was cloned into pESP-3 yeast protein expression vector. The introduction of K2 t-PA, RGD sequence and hirudin into r-SAK molecule did not alter the SAK activity.The plasminogen activation rate (determined by K(M) and K(cat)) of SAK-RGD-K2-Hir was not significantly different from that of r-SAK. Affinity and binding strength of the recombinant protein to fibrin immobilized on the biosensor were higher than to r-SAK. We observed a higher clot lysis potency of SAK-RGD-K2-Hir as evidenced by a faster and more profound lysis of 125I-labeled human fibrin clots. The potency of thrombin inhibition by the hirudin part of the recombinant fusion protein SAK-RGD-K2-Hir was the same as that of r-Hir alone. In conclusion, the results of the in vitro study suggest that the SAK-RGD-K2-Hir construct can be a more potent and faster-acting thrombolytic agent with antithrombin and antiplatelet properties compared with standard r-SAK.     

溶栓治疗用于急性肺栓塞的临床评价

目的:评价、分析溶栓治疗应用于肺栓塞的适应证、有效性和安全性.方法:采用国内、外近期相关文献,结合笔者临床经验进行综述.结果与结论:溶栓治疗是肺栓塞(PTE)治疗的最重要进展之一.早在20世纪60年代,有关尿激酶和链激酶治疗PTE的临床试验就已开始,但因溶栓剂量、治疗方法、病例选择等问题以及缺乏以降低病死率为终点(end-point)的大宗病历的比较研究,30余年来在溶栓治疗的适应证、有效性和安全性方面一直存在争议.近10年,随着对PTE病理生理认识的深入,超声检查右室结构和功能的重视,对PTE进行危险分层以及溶栓方案的改进,现代PTE的溶栓治疗已变得更安全有效和简便.     

重组葡激酶治疗实验性幼猪急性脑栓塞的量效研究

目的 :应用数字减影脑血管造影 (DSA) ,研究重组葡激酶 (rSaK)治疗幼猪急性脑栓塞的疗效。方法 :幼猪 48头 ,随机分为对照组 ,7个rSaK治疗组 (4 0 0 0～ 64 0 0 0IU·kg-1) ;经颈内动脉注入体外血栓建立幼猪急性脑栓塞动物模型 ;4h后静脉应用rSaK ,对照组用安慰剂。治疗结束后 3 0min ,60min ,90min复查DSA。结果 :随着rSaK剂量增大和观察时间延长 ,DSA血管再通率升高。rSaK80 0 0IU·kg-1或 80 0 0IU·kg-1以上剂量组的血管再通率均大于对照组 (P <0 0 5 )。结论 :静脉应用rSaK溶化脑血栓有明显量效关系 ,最低有效溶栓剂量为 80 0 0IU·kg-1。     

兔股动脉血栓形成模型中国产重组葡激酶的药代动力学

目的 :研究国产重组葡激酶 (recombinantstaphylokinase ,r SAK)在兔股动脉球囊损伤后血栓形成模型中的药代动力学特征 ,采用“溶圈法”测定血浆r SAK水平。方法 :新西兰兔 30只 ,随机分为对照组 (生理盐水 10ml,30min)、r SAK小剂量组 (r SAK 0 .2 5mg kg ,30min)、r SAK中剂量组 (r SAK 0 .5mg kg ,30min)、r SAK大剂量组(r SAK 1.0mg kg ,30min)、r SAK单次静脉推注组 (r SAK0 .5mg kg ,2min)和联合肝素治疗组 (先静脉推注肝素 2 0 0U kg ,继之予r SAK 0 .5mg kg ,30min ,溶栓后予肝素5 0U (kg·h)静滴至观察终点 )。用球囊损伤法制作兔右股动脉血栓形成模型 ,然后经耳缘静脉匀速输注溶栓药物。溶栓前及溶栓后不同时间点取静脉血用“溶圈法”检测r SAK血药浓度 ,用药代动力学计算程序拟合r SAK药代动力学模型。结果 :r SAK血浆浓度在 2 .0× 10 4 ～ 2 .0× 10 6 U L范围内与溶圈直径线性关系良好 ,平均回收率为 (96 .0 5±11.35 ) % ,相对标准差 (relativestandarddeviation ,RSD)为±11.82 %。各静脉输注组血药浓度峰值时间为 30min ,低、中、高 3个剂量组峰值浓度与用药剂量呈正相关 (r =0 .99998,P <0 .0 0 0 1)。单次静脉推注组峰值浓度为 (5 .16± 1.0 2 )mg L ,显著高于等剂量 30min输注组 (P