广藿香悬浮细胞原生质体的分离与纯化研究

目的 探讨广藿香悬浮细胞原生质体分离与纯化过程中的影响因素.方法 以广藿香悬浮细胞为材料,采用酶解法分离原生质体,结合过滤法和离心沉降法进行纯化,测定原生质体产量和活力,考察酶液组合、酶解时间、渗透压调节剂甘露醇浓度、悬浮细胞继代培养时间、不同孔径滤网和离心条件的影响.结果 将继代培养9～14d的悬浮细胞在质量浓度分别为1.5％纤维素酶、0.8％果胶酶、0.5％半纤维素酶,渗透压调节剂甘露醇浓度为0.4 mol/L条件下,避光振荡酶解12h,可分离出大量原生质体,依次经40→100→200目滤网过滤,600 r/min离心5 min,得到杂质少、形态正常的广藿香悬浮细胞原生质体,产量为13.05x 105个/g,活力达到80.98％.结论 建立了广藿香悬浮细胞原生质体的分离及纯化方法,获得高产量高活力的原生质体,可用于培养、原生质体融合等进一步研究.     

甲磺酸加贝酯联合CBP治疗SAP的效果及对炎症“瀑布效应”相关因子的影响

［摘要］ 目的探讨甲磺酸加贝酯联合连续性血液净化（continuous blood purification,CBP）治疗重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）的效果及其对炎症“瀑布效应”相关因子的影响。 方法将60例SAP患者按完全随机法分为观察组与对照组各30例。对照组给予CBP治疗,观察组在对照组基础上联合甲磺酸加贝酯,比较2组疗效、临床治疗情况、炎症“瀑布效应”相关因子［肿瘤坏死因子(tumour necrosis factor α,TNF-α）、可溶性肿瘤坏死因子受体（soluble tumor necrosis factor receptor,sTNFR）、核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、白细胞介素6（interleukin 6,IL-6）、白细胞介素8（interleukin 8,IL-8）］及并发症发生率。 结果观察组临床疗效优于对照组（P＜0.05）,2组总有效率差异无统计学意义（P＞0.05）。观察组腹痛缓解时间、胃肠减压时间、住院时间均短于对照组（P＜0.05）,2组28 d病死率差异无统计学意义（P＞0.05）。2组TNF-α、sTNFR、NF-κB、IL-6、IL-8均呈降低趋势,观察组TNF-α、sTNFR、NF-κB、IL-6、IL-8降低幅度大于对照组,组间、时点间、组间·时点间交互作用差异均有统计学意义（P＜0.01）。2组总并发症发生率差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论SAP患者在CBP治疗基础上联合甲磺酸加贝酯或可取得更佳症状缓解获益,对炎症“瀑布效应”相关因子的改善更显著,且未显著增加并发症风险,值得临床推广。     

急性百草枯中毒患者30d预后影响因素的研究

目的 探讨应用血液净化治疗后,急性百草枯中毒患者30 d预后的影响因素。方法 选取西安交通大学第一及第二附属医院符合纳排标准急性百草枯中毒患者(79例),电话随访服毒30 d时的预后,分为死亡组(n=40)及存活组(n=39);比较两组年龄、性别、既往高血压史、糖尿病史、服毒量、服毒至就诊的时间、中性粒细胞计数/淋巴细胞计数比值、单核细胞计数/淋巴细胞计数比值、尿素氮、肌酐、天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、凝血酶原时间、凝血酶时间及急性病生理学和长期健康评价(acute physiology and chronic health evaluationⅡ,APACHEⅡ),采用二分类Logistic回归分析预测死亡组的危险因素;采用受试者工作特征曲线下面积(area under curve, AUC)分析服毒量对死亡组的预测价值;应用Kaplan-Meier生存曲线分析服毒量与30 d预后的关系。结果 服毒量及APACHEⅡ为30 d死亡的独立危险因素(P<0.05);服毒量预测死亡组的AUC为0.882(P<0.001),临界值为40 mL(敏感度72.5%,特异度87.18...     

Bre1与Rad6形成的复合物的表达、纯化和结晶

目的：建立Bre1及Rad6的表达和纯化方法,构建Bre1-Rad6的复合物,寻找复合物的结晶条件,为使用X射线晶体学的方法解析复合物的结构奠定基础。方法：使用大肠杆菌表达系统表达蛋白质;使用共纯化的方法组装复合物;使用气象扩散的方法结晶复合物。结果：建立了来源于Lodderomyces elongisporus的Bre1(LeBre1)氮端与Rad6相互作用的结构域（RBD）和Rad6(LeRad6)在大肠杆菌中大量表达的方法;通过使用共纯化的方法,成功组装了LeBre1 RBD-Rad6复合物,并进一步通过两步凝胶过滤层析纯化的方法精细纯化,获得了纯度超过95%的蛋白复合物;使用气象扩散的方法结晶复合物,在18℃通过对1 000多个结晶条件的筛选,确定了复合物的两种结晶条件,进一步对该条件优化,获得了质量相对较好的晶体。结论：成功的构建了LeBre1 RBD-Rad6复合物的表达、纯化和结晶的方法,为使用X射线晶体学方法解析复合物的结构奠定了基础。     

肾衰竭患者治疗中联合持续血液净化治疗的临床疗效

目的探讨肾衰竭患者治疗中联合持续血液净化治疗的应用效果。方法选择2015年3月~2017年3月我院收治的肾衰竭患者100例,按照入院顺序分为对照组和观察组两组,各50例,对照组给予常规治疗,观察组在对照组基础上联合持续血液净化治疗。观察两组患者治疗前后的血清i PTH水平、皮肤瘙痒症状评分、生活质量评分等。结果两组患者血清i PTH水平均得到明显改善,检测水平显著下降,且观察组改善效果明显优于对照组(P0.05)。两组患者皮肤瘙痒症状均得到明显改善,评分结果显著降低,且观察组改善效果明显优于对照组(P0.05)。治疗后两组患者的生活质量SF-36评分均显著提高,且观察组的提高幅度明显大于对照组,生活质量改善效果更好(P0.05)。结论对肾衰竭患者在常规治疗基础上联合实施持续血液净化疗效显著,可获得理想的有毒物质清除效果,并更好的改善患者的临床症状和生活质量。     

灵芝菌发酵培养基的优化及灵芝胞外多糖的分离纯化

用正交法研究了不同条件对灵芝菌生长影响,从中选出了灵芝 菌液体深层发酵的优化 培养基：葡萄糖 3.6%,蛋白胨 0.4%,pH 6.0,酵母膏 0.2%,KH2PO40.1%,MgSO 4· 7H2O 0.05%,Vit B1 0.005%,每升发酵液产干菌丝体 15.6 g,粗多糖 0.72 g。 经葡 聚糖凝胶层析对灵芝胞外多糖进行了分离纯化,共有 5 个组分,并用红外光谱、紫外光谱 ,气相色谱等手段进一步分析了灵芝胞外多糖的组成,结果表明灵芝胞外多糖系由甘露糖、 果糖、葡萄糖通过糖 β-D 糖苷键构成。     

急诊血液净化治疗重度乌头碱中毒的疗效及对预后的影响

〔摘 要〕 目的：研讨重度乌头碱中毒患者实施急诊血液净化处理的疗效及其对预后的影响。 方法：选择 2018 年 3 月至 2020 年 5 月长沙市中医医院急诊救治的 56 例重度乌头碱中毒患者作为研究对象,依据随机数表模式设组,对照组和观察组 各 28 例。对照组接受常规急诊救治,观察组基于对照组救治条件实施血液净化治疗,比较两组患者的急诊救治疗效、心律 失常转复时间、住院时间以及不良反应率等指标。 结果：观察组患者的救治总有效率为96.43 %,较对照组的75.00 %明显更高, 差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。观察组患者心律失常转复时间、住院时间均显著短于对照组,差异具有统计学意义 （P ＜ 0.05）。观察组患者不良反应总发生率为 3.57 %,相比对照组的总发生率 21.43 % 显著更低,差异具有统计学意义 （P ＜ 0.05）。观察组无一例患者死亡,对照组死亡率为 10.71 %,两组间死亡率差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。 结论：对重度乌头碱中毒患者实施急诊血液净化处理,能够提升临床救治效果,改善患者预后。     

HA-2FKBP-ABD融合蛋白的原核表达及与BCR-ABL的相互作用

摘要：目的：构建经原核表达和纯化的HA-2FKBP-ABD（HF-2A）融合蛋白,探讨HF-2A对BCR-ABL的靶向作用。 方法：用PCR扩增HF-2A片段,将HF-2A克隆入pET32a（+）原核表达载体,IPTG诱导表达,镍离子亲和层析柱纯化HF-2A蛋白,SDS-PAGE分析诱导和纯化的条件,western blot鉴定HF-2A蛋白的表达,pull down实验检测HF-2A与BCR-ABL的相互作用。 结果：重组原核表达载体经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确;0.1 mmol/L IPTG 25 ℃诱导4 h获得HF-2A蛋白的高表达,其分子量（Mr)约为74 000,纯化后可获得高纯度的HF-2A蛋白;HF-2A与BCR-ABL能相互作用。 结论：成功表达并纯化了HF-2A融合蛋白,HF-2A能够靶向作用BCR-ABL。     

大孔吸附树脂法研究荔枝草总黄酮纯化工艺

[摘要]：目的　研究富集纯化荔枝草总黄酮的最佳工艺。方法　以总黄酮吸附率、解吸率和转移率为评价指标,采用静态吸附–解吸附的方法,筛选最佳大孔树脂型号;以总黄酮含量为指标成分,确定最佳洗脱剂浓度;以除杂率、高车前苷转移率和总黄酮转移率为指标,评价其最优工艺。结果　D101 树脂分离效果较好,其最佳工艺为：上样量为1 g/mL（生药量/树脂体积）,用7 BV,75% 的乙醇溶液洗脱,洗脱流速为6 mL/min-1。结论　D101 树脂可有效地对荔枝草总黄酮进行富集纯化。     

川楝子中的化学成分研究

目的:研究黔产川楝子中的化学成分.方法:应用正、反相硅胶(RP-18型)柱层析;葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20型)柱层析,结合重结晶方法进行分离纯化,运用1 H-NMR,13 C-NMR,ESI-MS和ES-MS等现代波谱技术对化合物的结构进行鉴定.结果:从黔产川楝子乙醇提取物中分离鉴定了12个化合物,分别被鉴定为:1-O-tigloyl-1-O-debenzoylohchinal(1),印楝醛(ohchinal,2),1-cinnamoyhrichilinin (3),3,7-diacetyl-14,15-deoxyhavanensin(4),7-O-acetyl-14,15-deoxyhavanensin(5),6α-O-acetyl-7-deacetylnimocinol (6),6α-hydroxyazadirone (7),24-Nor-5(ょ)-13α,17α-chola-14,20,22-triene-3β,7α-diol-21,23-epoxy-4,4,8-trimethyl-3-acetate(8),hedyotol-A(9),2,6-bis (3-methoxy-4-hydroxyphenyl)-3,7-dioxabicyclo[3,3,0]octan-8-one(10),exo-endo-2,6-bis (4'-hydroxy-3 '-methoxy-phenyl)-3,7-dioxabicyclo[3,3,0]octane (11)和betulafolienediolone (12).结论:化合物2～12均为首次从该植物中分离得到.