下调TSG101基因对人结肠癌细胞LOVO生长的调节作用

目的:探讨TSG101基因对人结肠癌细胞生长的调节作用。方法:构建TSG101基因的小干扰RNA载体并将其转导入LOVO细胞,获得稳定转染的阳性克隆后,应用RT-PCR和western blot进行鉴定;MTT法和流式细胞仪检测细胞转染前后生长速度和细胞周期的变化;Western blot检测细胞转染前后细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CDK4、CDK6、p21和p27的表达变化。结果:成功构建了TSG101的小干扰RNA载体;筛选到稳定的TSG101低表达的结肠癌细胞模型;转染TSG101小干扰RNA后的细胞生长速度显著减慢,出现G1期阻滞,且Cyclin D1的表达明显降低,p21的表达明显增高。结论:下调TSG101基因能抑制结肠癌细胞生长,提示该基因可能具有临床应用前景。     

非小细胞肺癌的miRNA-29a表达及临床意义

目的 探讨miRNA-29a在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及临床意义。方法 采用实时荧光定量PCR技术检测55例NSCLC组织及癌旁组织中miRNA-29a的表达水平,并分析其与临床病理特征及预后的关系。结果 NSCLC组织中miRNA-29a的表达下调43例,表达上调12例,其表达仅与性别有关（P＜0.05）,而与年龄、吸烟史、病理类型、肿瘤大小及TNM分期均无关。miRNA 29a表达诊断癌组织与癌旁组织的受试者工作特征（ROC）曲线的面积（Az）为0.669（95％CI：0.568～0.770）,灵敏度和特异度分别为49.1％和85.5％。生存分析显示,不同miRNA-29a表达的NSCLC患者的生存率有明显差异（P=0.032）;多因素回归分析显示,miRNA-29a表达是总生存期的独立预后因素。结论 miRNA-29a在NSCLC组织中表达下调,其可作为NSCLC的诊断、预后判断指标及治疗靶标。     

皮肤黑素瘤中miRNA-34c的表达对促血管新生因子VEGF-A、VEGFR-1的影响

目的探讨皮肤黑素瘤中miRNA-34c的表达以及其对促血管新生因子VEGF-A和VEGFR-1的影响。方法 Northern blotting检测原代人黑素瘤细胞、黑素瘤细胞株A375和原代人表皮黑素细胞miRNA-34c表达。构建miRNA-34c基因过表达与基因敲低的黑素瘤细胞株A375细胞系即高表达miRNA-34c组和低表达miRNA-34c组,以空载体转染黑素瘤细胞株A375作为空载体对照组。CCK-8法检测各组细胞增殖活性。qRT-PCR和Western blotting分别检测各组VEGF-A、VEGFR-1 mRNA和蛋白表达。结果与原代人表皮黑素细胞相比,黑素瘤细胞株A375和原代人黑素瘤细胞中miRNA-34c的表达降低(P<0.05)。高表达miRNA-34c组、低表达miRNA-34c组和空载体对照组细胞增殖活性无明显差异(P>0.05)。高表达miRNA-34c组VEGF-A、VEGFR-1的mRNA和蛋白表达较空载体对照组降低(P<0.05)。低表达miRNA-34c组VEGF-A、VEGFR-1的mRNA和蛋白表达较空载体组升高(P<0.05)。结论 miRNA-34c在皮肤黑素瘤中呈现特异性下调,miRNA-34c可能通过对促血管新生因子VEGF-A、VEGFR-1的下调参与皮肤黑素瘤的发生与发展。     

纳布啡通过调控 miR-4301/BRD4抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的 探讨纳布啡对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制.方法 本研究时间为2019年1—7月.肝癌细胞株Huh7购自美国ATCC,将Huh7细胞分为对照组、不同浓度纳布啡(50μmol、100μmol、200μmol)组、微小RNA-4301(miR-4301)组、miR-4301模拟物阴性对照(miR-NC)组、纳布啡+miR-4301抑制表达载体(anti-miR-4301)组、纳布啡+miR-4301抑制表达载体阴性对照(anti-miR-NC)组.四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测Huh7细胞的增殖抑制率;Transwell检测Huh7细胞的迁移和侵袭数;蛋白质印迹检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和溴结构域蛋白4(BRD4)蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-4301和BRD4 mRNA表达水平;荧光素酶报告实验检测miR-4301和BRD4的靶向关系.结果 与对照组相比,不同浓度纳布啡组Huh7细胞抑制率升高[(11.25±1.12)％、(22.63±2.25)％、(37.65±3.74)％比(0.00±0.01)％],迁移数减少[(79.32±7.38)个、(61.36±5.48)个、(45.69±5.37)个比(98.63±9.54)个],侵袭数减少[(67.53±6.65)个、(53.41±5.22)个、(37.64±3.87)个比(81.36±8.13)个],p21表达水平升高,Cyclin D1、MMP-2、MMP-9表达水平降低,miR-4301表达水平升高,BRD4mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05),且呈浓度依赖性.与miR-NC组相比,miR-4301组Huh7细胞抑制率升高[(31.25±3.15)％比(6.32±0.63)％],迁移数减少[(52.33±5.26)个比(96.32±9.54)个],侵袭数减少[(41.69±4.32)个比(83.15±8.33)个],p21表达水平升高,Cyclin D1、MMP-2、MMP-9表达水平降低(均P<0.05).miR-4301靶向调控BRD4的表达,抑制miR-4301表达逆转了纳布啡对Huh7细胞的作用.结论 纳布啡可抑制肝癌Huh7细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与miR-4301和BRD4有关.     

miR-1301在甲状腺乳头状癌中的表达变化及其临床意义

目的 探讨miR-1301、miR-1976在甲状腺乳头状癌（PTC）中的表达情况及其临床意义。方法 收集2015年6月~2016年6月在我院甲状腺外科行甲状腺手术的65例患者的甲状腺肿瘤组织、肿瘤旁正常甲状腺组织,其中良性35例,乳头状癌组织30例。在TCGA中选取PTC可能表达异常的miR 1301、miR 1976,通过qRT-PCR验证,并分析其临床相关性;通过在线数据库Targetscan、GEPIA预测miR-1301的靶基因。结果 miR-1301在PTC癌组织中表达降低( P＜0.01),miR-1976在PTC癌组织中表达无明显变化( P＞0.05);临床分析表明,miR-1301表达变化与PTC的病理分级“T”、“N”相关(P=0.005,P=0.045);ROC曲线提示miR-1301对PTC具有诊断价值,AUC=0774,敏感性50%,特异性90%。生信分析发现,miR-1301可能通过对CLDN1、TRPC5的调控,参与PTC的生长、凋亡及迁移等。miRNA-1301在PTC癌组织中表达降低,且与PTC临床病理特点相关,可能通过对其靶基因的负性调控抑制PTC的发生与进展。结论 miRNA-1301可作为PTC诊断、术前风险评估、预后分析的潜在分子标志物。     

miRNA-22在卵巢癌组织的表达及其对卵巢癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的：观察在不同卵巢组织中miRNA-22的表达,并研究上调miRNA-22表达对卵巢癌细胞株SKOV-3增殖、迁移与侵袭的影响。方法：实时荧光定量PCR（qPCR）检测不同卵巢组织样本miRNA-22的表达;随机将SKOV-3细胞分为正常对照组（control组）、空白载体组（miRNA-22-NC组）和转染miRNA-22-mimic组（miRNA-22-m组）,qPCR检测各组细胞miRNA-22的表达,CCK-8法检测细胞存活率,划痕实验与Transwell小室法分别检测细胞的迁移与侵袭能力,Westernblot法检测VEGF和P53蛋白表达。结果：卵巢癌组织中miRNA-22的水平显著低于正常卵巢组织;与control组相比,miRNA-22-m组细胞miRNA-22的表达显著增加,细胞存活率显著降低,细胞迁移数和侵袭数下降,VEGF和P53的蛋白表达水平显著下降。结论：miRNA-22的低表达可能与卵巢癌的发生发展有关。过表达miRNA-22能够抑制卵巢癌细胞株的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与下调VEGF和P53的蛋白表达有关。     

TSG101在人脑恶性胶质瘤中的表达与细胞增殖侵袭的关系

【摘要】 目的 探讨人肿瘤易感基因101（TSG101）在人脑恶性胶质瘤组织中的表达及其与胶质瘤细胞增殖侵袭的关系。方法 收集2015年7月至2016年10月我院神经外科收治的34例恶性胶质瘤患者的临床资料和肿瘤组织标本肿瘤组及同期因脑外伤入院的19例患者的正常脑组织作为对照组。使用Real time PCR技术检测临床样本中TSG101的表达水平,Spearman等级相关分析检测TSG101的表达与患者各临床病理指标间的相关性。Western Bolt检测不同人脑恶性胶质瘤细胞系TSG101的表达水平,选取表达最高的细胞在体外构建干扰TSG101表达的细胞系siTSG101组,Western Bolt及Real time PCR进行验证,MTT法检测细胞增殖能力,transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果 Western Bolt结果示U251细胞中TSG101相对其他细胞高表达,体外成功干扰U251细胞TSG101的表达后其增殖能力在48 h、72 h出现升高（P<0.05）。Real time PCR结果示恶性胶质瘤组织中TSG101的表达低于正常脑组织,差异具有统计学意义（P<0.05）;Spearman等级相关分析结果示TSG101表达水平与患者性别、年龄及体重无显著相关,与患者胶质瘤细胞分级存在负相关。transwell侵袭实验结果示干扰TSG101表达的细胞侵袭能力显著增强（P<0.05）。结论 TSG101在恶性胶质瘤组织中低表达,其表达与胶质瘤恶性程度呈负相关,并在胶质瘤的增殖侵袭过程中发挥抑制作用。     

腺病毒介导microRNA-99a过表达抑制肝癌细胞生长

目的:利用腺病毒介导microrRNA-99a(miR-99a)的过表达,观察miR-99a对肝癌细胞生长的抑制作用,探讨一种腺病毒介导miRNA治疗肿瘤的新方法。方法:qRT-PCR检测正常肝细胞系L-02和肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、Hep3B和Huh7细胞中miR-99a的表达,构建含miR-99a的重组5型腺病毒Ad5-miR-99a。用空载腺病毒Ad-blank和Ad5-miR-99a分别感染Huh7细胞,MTT法和集落形成实验检测miR-99a过表达对Huh7细胞生长的抑制作用。结果:与正常肝细胞L02和其他肝癌细胞相比,miR-99a在肝癌Huh7细胞中表达量相对最低(P<0.01)。成功构建重组腺病毒Ad5-miR-99a,Ad5-miR-99a感染Huh7细胞后,miR-99a可在Huh7细胞中稳定高表达。集落形成实验和MTT实验显示,相对于Ad-blank组,Ad5-miR-99a可显著抑制Huh7细胞的生长和集落形成(P<0.01)。结论:成功构建重组腺病毒Ad5-miR-99a,miR-99a能有效抑制肝癌细胞的增殖,Ad5-miR-99a有可能成为治疗肝癌的新药物。     

ATX-101 for reduction of submental fat

Introduction: Facial esthetics are important for self-esteem. Undesired submental fat (SMF) deposits lead to an unappealing submental profile associated with aging and overweight. Compound ATX-101 is a proprietary formulation of purified synthetic deoxycholic acid for pharmacological submental contouring.

Review areas covered: This reviews covers anatomy of SMF, biochemistry of deoxycholic acid related to adipose tissue and tissue response to injection of ATX-101. Data from clinical trials were analyzed for efficacy and safety.

Methodology: Published studies using PubMed^© database 2000 – 2014 have been analyzed. The terms ‘deoxycholate’, ‘deoxycholic acid’, ‘ATX-101’ and ‘injection lipolysis’ were used.

Results: Deoxycholic acid causes adipocyte breakdown and an inflammatory tissue reaction leading to fat cell reduction and limited fibrosis. Four large clinical Phase III trials demonstrated efficacy of ATX-101 in reduction of SMF measured by validated scales and objective measurements. Patients reported improved psychological features and feeling. Adverse effects were mild and temporary.

Expert opinion: Adipocytolysis of SMF by ATX-101 is an important step forward to the development of approved drugs for reduction of localized fat pads. This could become a growing market.