Recombinant adeno-associated virus serotype 9 with p65 ribozyme protects H9c2 cells from oxidative stress through inhibiting NF-κB signaling pathway

Background Oxidative stress is a major mechanism underlying the pathogenesis of cardiovascular disease. It can trigger inflammatory cascades which are primarily mediated via nuclear factor-κB (NF-κB). ...     

大鼠siTLR4重组腺病毒载体的构建及功能鉴定

目的构建特异性针对大鼠TLR4基因的siRNA重组腺病毒载体,为进一步研究TLR4在不同疾病中的免疫调节机制奠定重要基础。方法设计并合成3对大鼠TLR4基因的siRNA序列,退火处理后定向克隆到pSES-HUS穿梭质粒中,获得pSES-HUS-siTLR4,经Pme I线性化后与pAdEasy-1骨架质粒在BJ5183细菌中进行同源重组,从而构建pAd-siTLR4质粒,通过脂质体转染,在HEK293细胞中包装形成Ad-siTLR4腺病毒颗粒,用该病毒感染PC12细胞,从基因和蛋白质水平分别检测3对siTLR4的抑制效果,同时从蛋白质水平检测TLR4下游关键分子NF-κB的表达。结果 PCR、酶切和测序均证实目的基因正确克隆到所构建的pAd-siTLR4重组腺病毒载体中;经包装获得的Ad-siTLR4病毒颗粒在PC12细胞中能够有效地抑制TLR4 mRNA和蛋白水平的表达,并显著地降低了NF-κB的表达。结论成功构建了pAd-siTLR4重组腺病毒质粒,同时包装获得了Ad-siTLR4重组腺病毒,转染PC12细胞后不仅能明显降低TLR4的表达,而且有效地抑制了TLR4通路下游关键分子NF-κB的表达。     

RAM7,一种新的核蛋白分子在小鼠中枢神经系统的表达

Notch信号途径参与动物多种组织和器官尤其是神经系统的发育调节。 RBP-Jκ是 Notch信号途径中的关键分子 ,RAM7是近年通过酵母双杂交技术发现的与 RBP-Jκ相互作用的蛋白。本实验表达 RAM7C-末端 60 k D的多肽片段 ,并制备特异性的多克隆抗体 ,检测 RAM7在小鼠中枢神经系统的分布。结果显示 :RAM7主要呈细胞核染色 ,在中枢神经系统中广泛分布 ;尾壳核、丘脑室旁核、下丘脑室旁核、室周核等核团内没有 RAM7阳性神经元 ,但存在着一定数量的 RAM7阳性神经纤维 ;另有相当多 RAM7胞浆染色的细胞和神经元以及一些胶质细胞 ,局限在脑室和脑室周围的神经组织中。RAM7分子的分布对其可能的生理功能有一定的提示作用     

Biological studies on Brazilian plants used in wound healing

Aim of the study

n-Hexanic and ethanolic extracts from twelve plants (Brugmansia suaveolens Brecht. et Presl., Eupatorium laevigatum Lam., Galinsoga parviflora Cav., Iresine herbstii Hook., Kalanchöe tubiflora Hamet-Ahti, Petiveria alliacea L., Pluchea sagittalis (Lam.) Cabrera, Piper regnellii DC., Schinus molle L., Sedum dendroideum Moç et Sessé ex DC., Waltheria douradinha St. Hill., Xanthium cavanillesii Schouw.) used in traditional South Brazilian medicine as wound healing agents were investigated in various biological assays, targeting different aspects in this complex process.

Materials and methods

The extracts were investigated on NF-κB DNA binding, p38α MAPK, TNF-α release, direct elastase inhibition and its release as well as on caspase-3. Fibroblasts migration to and proliferation into the wounded monolayers were evaluated in the scratch assay, the agar diffusion test for antibacterial and the MTT assay for cytotoxic effects.

Results

The hydrophilic extracts from Galinsoga parviflora, Petiveria alliacea, Schinus molle, Waltheria douradinha and Xanthium cavanillesii as well as the lipophilic extract of Waltheria douradinha turned out to be the most active ones.

Conclusions

These results increase our knowledge on the wound healing effects of the investigated medicinal plants. Further studies are necessary to find out the effective secondary metabolites responsible for the observed effects.     

右美托咪定对老年患者全身麻醉术后认知功能障碍及炎症反应的影响

目的 观察右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)对全身麻醉术后炎症反应及术后认知功能障碍(postoperative cognitive dysfunction,POCD)的影响. 方法 选择行择期腹部手术全身麻醉患者60例,年龄60～75岁,采用随机数字表法分为Dex组(D组)和对照组(C组),每组30例,两组患者均采用咪达唑仑0.03～0.05 mg/kg、芬太尼2～3 μg/kg、丙泊酚0.5～1.5 mg/kg、顺式阿曲库铵0.15 mg/kg静脉注射进行麻醉诱导.D组在诱导前10 min内静脉泵入1μg/kg Dex,随后以0.2～0.7 μg·kg-1·h-1维持泵注,根据患者HR、BP等变化及时调整输注速率;C组则与D组相同时间和途径注入相同容积的生理盐水.分别于麻醉后手术前(T1)、手术结束后即刻(T2)、手术结束后24 h(T3)抽取静脉血测定血浆IL-6含量及外周血中性粒细胞NF-κB表达水平.术前1d或2d及术后第1、3、7天用简易智能量表(mini-mental state examination,MMSE)测定认知功能,使用简易精神测定表(abbreviated mental test,AMT)评定术后谵妄情况. 结果 13例患者出现POCD(21.67％),其中D组3例,C组10例,两组间差异有统计学意义(P＜0.05).两组T2、T3时点外周血中性粒细胞NF-κB表达均较T1时增加(P＜0.05),但D组表达水平低于C组(P＜0.05).两组T2时点血浆IL-6水平均较T1时点明显升高(P＜0.01),且C组显著高于D组(P＜0.01);两组T3时点血浆IL-6水平较T2时点明显下降,但仍高于T1时点(P＜0.05),T3时点两组间差异无统计学意义(P＞0.05).D组外周血中性粒细胞NF-κB表达水平与血浆IL-6有良好的相关性(r=0.65,P＜0.01). 结论 POCD的发生可能与氧化应激反应有关,抑制NF-κB的激活可减少术后炎症反应及POCD的发生.     

三氧化矿物凝聚体对乳、恒牙牙髓细胞增殖和分化影响的比较

目的 对比三氧化矿物凝聚体（MTA）和氢氧化钙对人乳、恒牙牙髓细胞增殖和分化的影响。方法 采用甲基噻唑基四唑（MTT）法检测牙髓细胞生长增殖变化;实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测碱性磷酸酶（ALP）、牙本质涎磷蛋白（DSPP）、骨保护因子（OPG）、核因子κB受体活化因子配体（RANKL）基因的表达。结果 氢氧化钙组乳、恒牙牙髓细胞增殖均显著低于对照组（P<0.01）,MTA组乳、恒牙牙髓细胞增殖均高于对照组（P<0.01）。实时荧光定量PCR检测结果显示,乳牙氢氧化钙组ALP、DSPP和OPG的表达显著低于对照组（P<0.01）,MTA组上述因子的表达显著高于对照组（P<0.01）;氢氧化钙组RANKL的表达显著高于对照组（P< 0.01）,MTA组RANKL的表达与对照组差异无统计学意义（P>0.05）。恒牙牙髓细胞氢氧化钙组ALP和DSPP的表达与对照组相比无显著差异（P>0.05）,MTA组ALP和DSPP的表达显著增加（P<0.01）;氢氧化钙组和MTA组OPG、RANKL的表达与对照组无显著差异（P>0.05）。结论 MTA比氢氧化钙更适合做乳牙和恒牙的盖髓剂,其优势在乳牙可能更为明显。     

人健康和炎性牙槽骨成骨细胞COX-2、PGE2、OPG,RANKL的表达

目的：初步探讨COX-2、PGE2、OPG和RANKL在牙周炎发病机制中所起的作用及其相互关系。方法：采用组织块法对人健康和牙周炎性牙槽骨进行体外培养和传代,加入含100μg/LrhOPG的不含胎牛血清的DMEM2mL。严格按照ELISA试剂盒说明进行操作,获得各指标的检测数值。结果：牙周炎组RANKL、PGE2、COX-2的表达较健康组明显增高,OPG的表达较健康组明显降低。加入rhOPG后,牙周炎组RANKL、PGE2、COX-2的表达明显降低;OPG表达明显增加。健康组RANKL、PGE2、COX-2表达明显降低;OPG表达增加。结论：RANKL、PGE2、COX-2可促进牙周炎的发生、发展,而OPG对牙周炎的发生、发展可起抑制作用,同时表明人工重组OPG可能协同其内源性OPG来共同抑制RANKL、PGE2、COX-2的活性。