白细胞介素17在慢性丙型肝炎患者免疫损伤中的作用

目的 探讨白细胞介素17（IL-17）在慢性丙型肝炎患者免疫损伤中的作用.方法 选择22例慢性丙型肝炎患者作为HCV组,20例健康志愿者作为对照组.分别采用实时聚合酶链反应（RT-PCR）、酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清HCV-RNA及IL-17,其余检测指标包括血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）、凝血酶原时间（PT）、肌酐.结果 HCV组患者血清IL-17水平明显高于对照组（P＜0.05）.HCV组患者血清ALT、AST及HCV-RNA与血清IL-17水平显著相关（P＜0.05）.结论 IL-17可能参与了慢性丙型肝炎的免疫学发病机制.     

南京地区丙型肝炎病毒患者基因型分布特征

目的：探讨南京地区慢性丙型肝炎患者丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)基因型分布特征和相关的影响因素,以对 HCV 感染的控制和个体化治疗提供依据。方法收集南京市第二医院慢性丙型肝炎患者1030例,采用基因芯片法检测 HCV 患者基因型,分析 HCV 基因型的组成及其与性别、年龄的关系。结果本研究中南京地区基因型有1a,1b,2a,3a,3b,6型和少量混合型,1b 型占73.0%(752/1030),其次为2a 型占9.4%(97/1030),未见4型和5型;在男女慢性 HCV 患者中,1b 型均为主要基因型,1b 型在男性组中比例明显高于女性组,差异有统计学意义(P <0.01);1b 型与2a 型患者平均年龄大于3b 型患者,差异有统计学意义(P <0.01)。结论南京地区 HCV 基因型以1b 型为主,其次为2a 型,未见4 型、5型;3b 型患者的平均年龄均比1b 型和2a 型患者小。     

核酸纯化柱提取核酸定量检测丙型肝炎病毒RNA的临床应用

目的观察核酸纯化柱提取法（简称柱提法）对血浆标本中丙型肝炎（简称丙肝）病毒核糖核酸（HCV-RNA）进行定量检测的临床应用效果。方法分别用柱提法和酚-氯仿提取法提取血浆标本中的HCV-RNA,用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术对117例抗-HCV阳性的丙肝患者同时进行HCV-RNA定量检测,并对结果进行比较分析。结果117例抗-HCV阳性丙肝患者以酚-氯仿提取法提取核酸进行HCV-RNA定量检测的阳性率为66．7％（78／117）,以柱提法提取核酸进行HCV-RNA定量检测的阳性率为79．5％（93／117）。两法比较,差异有统计学意义（X^2=4．26,P〈O．05）。将两法所测浓度结果换算成对数值,经“检验两者差异无统计学意义（μ=1．61,P〉0．05）。结论采用核酸柱提法提取血浆标本中HCV-RNA进行定量检测简单、快速,分离效率高,容易掌握,适于临床常规应用。     

不同基因型丙型肝炎病毒Core蛋白HLA-DRBl^＊0311、0401表位预测

目的预测各型丙型肝炎病毒（HCV）Core区的人类白细胞抗原（HLA）-DRB1＊0311及0401抗原表位。方法从NCBI数据库中检索出十条包含六种分型的HCV完整氨基酸序列,使用生物信息学工具剪切Core区氨基酸序列并对其二级结构、可塑性、亲水性和抗原性指数进行预测,选择可能区域预测HLA-DRB1＊0311及0401的抗原表位。结果 HCV Core区二级结构、可塑性、亲水性和抗原性指数预测分析可认为16～28、60～74、98～120区域或为抗原表位区域。HLA-DRB1＊0311预测中,HCV-1a/b、4a、6a预测评分高的区域为28～36,HCV-2a/b为63～71,HCV-3a为29～37,HCV-5a为94～102。HLA-DRB1＊0401中,HCV-1a、2b、4a、6a预测评分高区域为84～92,HCV～5a为120～128,HCV-1b中120～128可以预测到表位但评分低。结论 HCV Core区HLA-Ⅱ类分子抗原表位具有型间差异。     

“ASSLD基因1型慢性丙型肝炎病毒感染治疗指南2011年更新版”解读

一直以来,慢性HCV感染诊治指南中标准治疗都是干扰素联合利巴韦林（RBV）,指南内容都是围绕该治疗方法中相关问题的处理。实际上,既往数据显示基因2／3型感染者聚乙二醇＋RBV获得持续病毒学应答（SVR）率为80％左右。     

人滋养层细胞培养上清液及裂解液中丙型肝炎病毒的检测

目的应用改良的分离、纯化方法对孕早期人绒毛滋养细胞进行原代培养,利用HCV阳性血清对滋养细胞进行体外感染,探讨HCV在体外培养条件下对细胞的感染及HCV在细胞中的复制状态。方法采用胰蛋白酶消化法消化正常人妊娠孕早期胎盘组织,以35%、45%2个Percoll密度梯度进行分离纯化、并免疫组化鉴定,获得纯度较高的滋养层细胞,应用HCV阳性且高载量的血清进行体外感染,应用免疫荧光染色检测滋养层细胞中HCV NS5表达,通过细胞裂解液裂解感染后细胞,应用荧光定量PCR（RT-PCR）技术检测感染后细胞培养上清和细胞内的HCV RNA,以观察HCV的感染及复制情况。结果该法分离纯化的滋养层细胞生长良好,特异性角蛋白-7阳性,纯度高。原代滋养层细胞在与HCV阳性血清共同孵育后均未出现明显的细胞病变,感染后48 h在滋养层细胞细胞浆中可见HCV NS5表达,感染后分别于24、48、72、96、120 h收集的培养上清和感染后细胞内均可以检测到HCV RNA。排除了培养洗涤液HCV污染,进一步检测其细胞裂解液中HCV,结果检测HCV阳性。结论利用改良后人胎盘滋养层细胞的体外培养系统,HCV阳性血清能在体外感染原代培养的人滋养层细胞,HCV可在滋养层细胞中复制。     

HEV ORF3真核表达载体的构建、鉴定和真核表达

目的构建表达戊型肝炎病毒(HEV)ORF3-pXF2RH融合蛋白的真核表达载体;获得重组质粒稳定转染的L02细胞系。方法利用PCR技术从HEV基因组中扩增出ORF3基因片断,HindⅢ/EcolⅠ双酶切后连接到经同样酶切的pXF2RH真核表达载体,转化DH5α菌株感受态细胞,获得阳性重组质粒ORF3-pXF2RH。将阳性克隆用脂质体法转染L02细胞系,G418筛选抗性克隆,SDS-PAGE、Western blot分析鉴定ORF3-pXF2RH融合蛋白的表达。结果真核表达质粒转染L02细胞,SDS-PAGE显示在28.5kD左右蛋白表达量明显高于对照组,Western blot在28.5kD左右有一条强的棕色条带。结论成功构建ORF3-pXF2RH真核表达质粒,在L02细胞表达融合蛋白,为进一步研究该蛋白生物学功能奠定了基础。     

丙型肝炎病毒感染的检测

丙型肝炎病毒（HCV）感染的检测包括血清学检测和核酸检测（NAT）,前者包括HCV抗体（抗-HCV）、核心抗原检测,后者包括定性/定量RNA检测和基因型/亚型检测。抗-HCV检测是应用最广的HCV感染筛查试验,操作简便、耗时短、成本低,但其缺点是窗口期较长,不能判别是活动性感染还是病毒已被清除,不适用于免疫缺陷人群。HCV RNA是病毒感染的直接证据,既往定性RNA检测灵敏度较高,但随着实时定量PCR技术的成熟,定量检测灵敏度不断提高,线性范围不断拓宽,适用于临床抗病毒治疗应答的监测,也正逐步取代定性检测用于血液制品的筛查。近年HCV抗原检测和抗原抗体联合检测试剂盒已用于HCV感染的筛查及治疗监测,但其灵敏度尚不及NAT。目前主流的HCV基因分型试剂检测基因型有较高的符合率,而检测亚型的结果存在较大差异,需要方法学上的改进。     

丙型肝炎病毒感染者外周血淋巴细胞亚群的变化及意义

目的调查丙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群变化及影响因素。方法利用流式细胞术检测241例丙型肝炎患者和117例健康人群外周血淋巴细胞亚群数值,通过回顾性分析,调查我国丙型肝炎人群淋巴细胞亚群变化及其相关的影响因素。结果在健康人群中,CD3＋CD4＋T细胞、CD3＋CD16＋CD56＋NKT细胞频率以及CD4/CD8比值与年龄呈显著正相关;而在慢性丙型肝炎人群中,CD3＋CD4＋T细胞与年龄呈显著正相关,CD3-CD19＋B细胞则与年龄呈显著负相关;在肝硬化人群中,只有CD3-CD16＋CD56＋NK细胞频率与年龄呈显著正相关;在15～49岁的健康人及慢性肝炎人群中,女性CD3＋CD4＋T细胞亚群频率高于男性,而在肝硬化患者中女性CD3-CD19＋B细胞频率低于男性;同时,在HCV感染的不同阶段,CD3-CD16＋CD56＋NK细胞亚群频率均较正常人显著降低,而CD3＋CD8＋T细胞频率则显著升高,在15岁以上人群,CD3-CD19＋B细胞在健康人、慢性肝炎、肝硬化人群中呈持续升高的现象。结论通过回顾性分析健康人群和HCV感染不同阶段人群淋巴细胞亚群的分布特点及其与HCV疾病进展、年龄、性别的关系,为临床科学评价丙型肝炎人群免疫状态提供重要的免疫指标。     

延边地区1996～2010年丙型肝炎病毒感染状况及危险因素分析

[目的]了解延边地区丙型肝炎病毒(HCV)感染情况及HCV感染的相关危险因素.[方法]选择1996～2010年延边大学附属医院检验室提供的丙型肝炎抗体检测资料,采用描述性流行病学方法进行分析,同时采用病例对照研究方法分析HCV感染的危险因素.[结果]1996～2010年丙型肝炎抗体阳性率逐年上升,呈现1996～2003年低水平维持阶段和2004～2008年快速增长阶段.丙型肝炎抗体阳性率随着年龄的增长而增高.HCV的主要感染危险因素仍然是破损的皮肤黏膜暴露.[结论]加强丙型肝炎知识的宣传教育,采取针对性措施是延边地区丙型肝炎预防与控制的重点.