慢病毒载体表达外源PON1对小鼠巨噬细胞的影响

目的:为探讨对氧磷酯酶1(PON1)在机体代谢性疾病中的作用及机制,本实验构建含人源性PON1基因的慢病毒表达载体,研究其表达分泌PON1的能力及对小鼠巨噬细胞的影响。方法:根据人肝cDNA文库的PON1序列设计特定引物,定点诱变PCR获得两端为PmeⅠ内切酶位点的目的基因,经酶切连接到pWPI-GFP载体上,筛选及DNA测序鉴定。磷酸钙法瞬时转染293T细胞,荧光显微镜观察GFP表达反映转染效率,Western Blotting检测细胞培养基中PON1分泌表达量,采用对氧磷为底物检测PON1活性。含PON1的培养基与小鼠腹腔巨噬细胞共孵育,ELISA法检测氧化条件下细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的水平。结果:构建的pWPI-PON1慢病毒表达载体序列正确,高效转染293T细胞(转染效率可达到80%-90%)可有效分泌表达PON1至培养基,显著提高培养基PON1活性,与对照组相比,培养基中PON1可明显抑制巨噬细胞炎症因子TNF-α、IL-6的分泌(P<0.01)。结论:pWPI-PON1慢病毒载体高效表达分泌的外源PON1能有效降低巨噬细胞的炎症反应。     

小鼠GSK-3β慢病毒表达载体的构建及其在骨髓树突状细胞DC2．4中的表达

目的构建pLVX‐IRES‐TDtomat‐GSK‐3β慢病毒表达载体,感染小鼠骨髓DC2．4细胞,建立过表达GSK‐3β的小鼠DC2．4细胞系。方法利用RT‐PCR方法扩增小鼠GSK‐3β基因的编码区,并将其重组于表达载体pLVX‐IRES‐TDtomat中,经酶切、测序鉴定后包装成慢病毒,感染小鼠DC2．4细胞。实验分3组,分别为DC2．4细胞对照组,空病毒感染组,GSK‐3β慢病毒感染组,用实时荧光定量PCR方法和Western Blotting方法检测各组GSK‐3β的表达水平。结果经酶切和测序鉴定结果证实pLVX‐IRES‐ TDtomat‐GSK‐3β构建成功,并在包装细胞中高水平表达,慢病毒滴度高达1．26×108 TU／mL。GSK‐3β慢病毒感染组的GSK‐3β在mRNA表达水平和蛋白表达水平上均高于DC2．4细胞对照组及空病毒感染组。结论成功构建了表达GSK3β基因的重组慢病毒载体,并可在DC2．4细胞中稳定表达,为后续DC2．4的免疫功能研究奠定了基础。     

腺相关病毒载体在肺疾病基因治疗中的应用

腺相关病毒（adeno-associated virus,AAV）载体具有安全性好、免疫原性低、能感染分裂细胞和非分裂细胞、能介导基因的长期稳定表达等优点。因此,作为一种基因导入系统,重组AAV载体在基因治疗的研究和开发中受到越来越多的关注和重视。本文着重就重组AAV载体在肺部疾病基因治疗中的应用以及改进重组AAV载体的策略作简要综述。     

负载PCA3启动子及CD-TK自杀基因腺病毒载体的构建及包装

目的 构建负载PCA3启动子联合CD-TK基因的腺病毒载体,并对其进行包装及滴度测定.方法 将PCA3启动子无缝克隆到pHBAd-U6-GFP上,取代原有U6启动子形成pHBAd-PCA3-GFP,AgeI单酶切该重组载体,将CD-TK基因片段无缝克隆至线性化pH-BAd-PCA3-GFP上,抽提质粒抗性筛选后经PCR及测序鉴定为pHBAd-PCA3-CD-TK载体.取上述重组载体质粒及骨架质粒pHBAd-BHG,用LipofiterTM转染试剂进行转染HEK293细胞包装成病毒,大量扩增并测定病毒感染性滴度.结果 经PCR及测序验证证实成功构建负载PCA3启动子及CD-TK自杀基因的重组腺病毒pHBAd-PCA3-CD-TK并包装扩增,病毒滴度为1×1010PFU/mL.结论 构建负载PCA3启动子及CD-TK自杀基因的重组腺病毒,为进一步体内外对前列腺癌细胞的杀伤效应研究奠定了基础.     

2010～2012年南昌市西湖区病媒生物监测

目的 了解南昌市西湖区病媒生物的种群密度和季节消长情况,为病媒生物及媒介生物性传染病防治工作提供有效防治措施.方法 成蚊密度调查采用灯诱法,蝇密度调查采用笼诱法,鼠密度调查采用夹夜法,蟑螂密度调查采用粘捕法.结果 2010～2012年共捕获蚊虫6 763只,平均蚊密度为2.62只/（灯·小时）,主要为致倦库蚊（占90.61％）和三带喙库蚊（占6.66％）;捕获蝇类186只,平均蝇密度为1.02只/笼,主要为家蝇（占33.75％）、丝光绿蝇（占17.5％）、市蝇（占13.75％）、铜绿蝇（占12.5％）和大头金蝇（占10.00％）;捕获蟑螂类9 955只,平均密度为4.83只/张,均为德国小蠊;捕获鼠类64只,平均鼠密度为1.66％,主要为褐家鼠（占95.65％）和小家鼠（占4.35％）.结论 致倦库蚊、家蝇、德国小蠊、褐家鼠为优势种;4月为蚊类活动高峰期;蝇类在5～10月,呈现4个活动高峰,以8月最高;蟑螂在5、7月呈现2个活动高峰,以7月最高;鼠类受春秋季灭鼠影响,季节性并不明显.     

Evolution of parasitism in kinetoplastid flagellates

Kinetoplastid protists offer a unique opportunity for studying the evolution of parasitism. While all their close relatives are either photo- or phagotrophic, a number of kinetoplastid species are facultative or obligatory parasites, supporting a hypothesis that parasitism has emerged within this group of flagellates. In this review we discuss origin and evolution of parasitism in bodonids and trypanosomatids and specific adaptations allowing these protozoa to co-exist with their hosts. We also explore the limits of biodiversity of monoxenous (one host) trypanosomatids and some features distinguishing them from their dixenous (two hosts) relatives.     

小鼠GATA3基因重组腺病毒载体的构建和病毒制备

目的:在已克隆的小鼠GATA3基因基础上构建腺病毒载体,制备GATA3-adv。方法:Ad-Easy法通过同源臂重组的方式在细菌中获得重组腺病毒基因组质粒。将克隆了外源基因的腺病毒穿梭质粒与携带了腺病毒大部分基因组的质粒共转化BJ5183细菌,在细菌重组酶的作用下经抗性筛选获得重组腺病毒基因组质粒,将其线性化后转染HEK293中获得有活性的包装腺病毒。腺病毒荧光检测试剂盒定量腺病毒浓度。结果:成功制备了小鼠Adv-GATA3,其浓度为3.34×109copies/ml。结论:小鼠GATA3基因重组腺病毒载体的成功构建为进一步在基因水平进行免疫紊乱性疾病的干预研究奠定了基础。     

三峡库区蓄水前后（1997-2009年）以生物媒介传播疾病为重点的人群健康状况监测与评价

目的 评价1997-2009年三峡库区人群健康状况以及蓄水对健康的影响.方法 在三峡库区选择9个县(区)的17个乡镇(街道)设立疾病和生物媒介监测点,1997-2009年连续系统收集人口出生死亡、传染病、生物媒介等监测数据.采用时间和空间分析以及蓄水前后比较,分析疾病流行状况及其影响因素,评价库区人群健康状况.结果 三峡库区监测点2003年蓄水后7年室内平均鼠密度(2.22％)比蓄水前6年平均鼠密度(4.38％)下降49.32％;蓄水后室外平均鼠密度(2.76％)比蓄水前平均鼠密度(4.43％)下降37.70％.蓄水后人房年均蚊密度[35.09只/(间·人工小时)]较蓄水前[54.24只/(间·人工小时)]下降35.31％.蓄水后畜圈年均蚊密度[125.75只/(间·人工小时)]比蓄水前[179.46只/(间·人工小时)]下降29.93％.2003年蓄水后,流行性乙型脑炎(乙脑)、疟疾、钩端螺旋体(钩体)病和流行性出血热(出血热)发病率分别较蓄水前下降22.88％、84.85％、95.03％和81.82％.在蓄水后,钩体病、疟疾和出血热各年发病率均处于较低水平(＜0.4/10万),乙脑历年发病率＜2/10万,下降幅度略低于重庆市和宜昌市.各年粗死亡率低于重庆市和湖北省的平均水平,标化死亡率为3.77％ ～ 5.12％,低于全国平均水平.平均婴儿死亡率为11.83‰,低于全国平均水平.结论 2003年三峡水库蓄水后未诱发疟疾、乙脑、钩体病、出血热等生物媒介传播疾病的明显升高,尚未发现水库蓄水对人群死亡率造成影响,库区人群总体健康状况较好.     

In vivo treatment of tumors using host-guest conjugated nanoparticles functionalized with doxorubicin and therapeutic gene pTRAIL

The combination of gene therapy and chemotherapy may increase the therapeutic efficacy in the treatment of patients. In this work, the anti-cancer drug Dox and therapeutic gene pTRAIL-loaded host−guest co-delivery system was assayed for the possibility of in vivo synergistically treating tumors. The introduced Dox could act as an auxiliary component to human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand-encoding plasmid gene pTRAIL. Such delivery system possessed the good ability of in vivo retention of chemotherapeutic drugs, achieved good therapeutic effects in the inhibition of tumor growth and significantly prolonged the survival time of tumor-bearing mice. With the efficient ability to co-deliver drug and gene, such host−guest assembly should have great potential applications in cancer therapy.