Zeocin和GFP双筛选标记重组痘苗病毒载体的构建

目的 为研究重组痘苗病毒通用载体,构建融合Zeocin和GFP双筛选标记质粒pCB-ZeoGFP.方法 质粒LeGo-G/Zeo含有Zeo-GFP融合基因片段,通过PCR反应、BamHI酶切后连接替换空白质粒pCB的筛选基因gpt,通过菌落PCR,酶切图谱分析及测序分析鉴定重组质粒,构建成功后将其与野生型痘苗病毒进行位点特异性同源重组,经Zeocin药物筛选2代后,用流式细胞仪观察重组痘苗病毒GFP表达.结果 经菌落PCR,1号、5号和10号菌落中扩增出426 bp 的目的条带,与预期的大小完全一致,经酶切分析和DNA测序进一步验证了重组质粒pCB-Zeo-GFP;该质粒与野生型痘苗病毒同源重组,得到了重组的痘苗病毒；Zeocin 筛选2代后,病毒上清感染细胞,流式细胞分析7.18％的细胞中有CFP的表达,而阴性对照仅有1.43％；Zeocin 药物筛选5代后,通过激光共聚焦可在80％以上的细胞中观察带GFP;提取的重组痘苗基因组DNA也扩增出预期大小目的条带.结论 含Zeocin和GFP双筛选标记的新型重组痘苗病毒不仅具有可观察性且具有药物抗性,非常容易进行筛选鉴定.     

洪涝灾害病媒生物的应急控制

根据长江流域及广东省近年来发生的洪涝自然灾害,对灾害发生后救灾防病中病媒生物控制工作进行分析和总结。阐明洪涝灾害期间病媒生物蚊、蝇和鼠害的发生及其传播疾病特点,提出洪涝灾害病媒生物控制必须遵循的原则与应急控制技术措施。洪涝灾害发生后,要迅速开展救灾防病宣传教育工作,发动群众搞好环境卫生,及时清理垃圾、粪便,减少虫、鼠孳生地,是洪涝灾害时期控制病媒生物危害的治本措施;开展快速杀灭成蝇、成蚊和鼠类,迅速降低种群密度,是夺取抗洪救灾实现大灾之后无大疫的关键措施;做好洪涝灾害期间病媒生物控制效果的评价,做到有的放矢,防止药物浪费和污染环境.     

2017年武汉市3种媒介生物的抗药性分析

目的 了解2017年武汉市媒介生物抗性水平,为科学防制合理使用杀虫剂提供依据。方法 家蝇采用微量点滴法,测定羽化后3～4日龄雌性家蝇成虫的半数致死量（LD50）;致倦库蚊采用幼虫浸渍法,测定4龄幼虫的半数致死浓度（LC50）;德国小蠊采用药膜法,测定2～3周龄雄性成虫的半数击倒时间(KT50)。结果 该市家蝇对高效氯氰菊酯、氯菊酯、甲基吡恶磷的抗性倍数分别为221、23和2.3倍;致倦库蚊对高效氯氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、双硫磷和残杀威的抗性倍数分别为32、56、6和2.5倍;德国小蠊对毒死蜱、溴氰菊酯、甲基吡恶磷、仲丁威和残杀威的抗性倍数分别为2.8、4.3、3.0、2.5和1.6倍。结论 媒介生物抗药性监测与评估工作对于病媒生物防制和创建国家卫生城市中科学合理地选择杀虫剂以及延缓抗药性的持续增加至关重要。     

Gene therapeutic approaches to the treatment of Parkinson's disease

Parkinson's disease (PD) is a neurodegenerative illness of unknown etiology that presently has no cure. Symptoms of this progressively debilitating disease include bradykinesia, resting tremor, rigidity, gait abnormalities, and postural instability that can be transiently alleviated via continued administration of the drug, -DOPA. However, following prolonged usage, the effectiveness of this clinical treatment substantially diminishes. To that end, novel therapies for amelioration of symptoms and/or permanent cure of PD need to be developed. The utility of gene transfer modalities for PD treatment holds tremendous promise, but gene therapy is yet unproven within the realm of the central nervous system. This discourse proposes possible disease targets and reviews the present standing of adenovirus-, adeno-associated virus-, herpes virus-, and non-virus-based gene transfer technologies in regard to how they have been applied in in vitro and in vivo models of PD. Identification of disease mechanisms, potential points of therapeutic intervention, and an understanding of presently utilized gene delivery vehicles will facilitate the development of potentially safe and efficacious modalities for therapy of PD.     

山东地区秋冬型恙虫病传播媒介的调查研究

目的：探讨山东地区恙虫病传播媒介。方法：1995年5月～2002年4月在山东恙虫病疫区捕鼠。观察鼠体外恙螨季节消长，分离恙虫病东方体(Ot)。结果：室内外共捕捉到的527只活鼠(黑线姬鼠335只，大仓鼠119只，黑线仓鼠6只，小麝鼩2只，褐家鼠63只，小家鼠2只)，从活鼠体外共检获15467只恙螨，其中太平洋无前恙螨最多5720只，其它螨数量依次为小盾纤恙螨4175只，临淮岗纤恙螨3090只，须纤恙螨1687只，泰山纤恙螨466只，脆弱无前恙螨329只。恙螨季节变化：小盾纤恙螨主要出现在9～12月，高峰在11月，是秋季鼠体外绝对优势种；须纤恙螨出现在10～翌年4月，高峰在12月，为冬季优势螨种，临淮岗纤恙螨5月出现，11月消失，高峰在8月，为夏季优势种；泰山纤恙螨主要出现在6～10月，数量较少，且起伏较大；太平洋无前恙螨、脆弱无前恙螨全部采自仓鼠，主要出现在4～12月，高峰期在7月。Ot分离：小盾纤恙螨共接种11批，分离到5株Ot；须纤恙螨、临淮岗纤恙螨和太平洋无前恙螨分别接种4批，分离到4株、2株和2株Ot。小盾纤恙螨是恙虫病发病季节疫区鼠体外优势螨种，季节消长与当地人群恙虫病季节分布基本一致；能自然感染、叮刺传播和经卵传递恙虫病东方体；被恙螨叮刺或悬液接种的小白鼠血清中能检测到特异性抗体，以上结果证明小盾纤恙螨为当地秋冬型恙虫病的传播媒介。血清学分型：除从临淮纤恙螨分离到的1株为Karp型外，其余分离株均为Gilliam型。从不同材料中分离到的Ot毒力相差不大，均属弱毒株，分离株与标准株间有交叉免疫保护能力。现场和实验室杀螨实验表明，小盾纤恙螨对敌敌畏和以二氯苯醚菊酯为主的杀虫剂均很敏感，且防治效果至少可维持1个月以上。结论：小盾纤恙螨为当地秋冬型恙虫病的主要传播媒介，同时其它螨种也有充当恙虫媒介的可能。     

SSA抗原真核表达载体的构建

目的：通过基因克隆构建表达人干燥综合征抗原A（SSA）的巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体。方法：从人白血病淋巴细胞HL60株中提取RNA，反转录出cDNA，然后以cDNA为模板，通过PCR法扩增目的基因SSA，经纯化、双酶切、DNA浓缩回收，插入到酵母分泌型表达载体pPIC9k，用热冲击法转化感受态细胞DH5a，筛选阳性克隆提取质粒，双酶切鉴定并测序。结果：PCR产物大小符合要求，重组质粒pPIC9k-SSA双酶切鉴定与预期一致，测序结果正确。结论：成功构建SSA毕赤酵母分泌型表达载体，为今后获取高纯度、高产量的SSA抗原，研制新型抗SSA诊断试剂盒作前期准备。     

新疆大沙鼠鼠疫传播媒介的初步调查

目的明确新疆大沙鼠鼠疫的传播媒介。方法以常规方法在鼠体和鼠洞收集寄生物。结果在鼠体和鼠洞采到蚤类4属7种,经病原学检验,从臀突客蚤(Xenopsylla m inax)中分离出5株鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis),从长吻角头蚤(Echidnophaga oschanini)中分离出1株鼠疫菌。结论从臀突客蚤中分离出鼠疫菌在中国尚属首次。臀突客蚤是新疆大沙鼠鼠疫的主要传播媒介。     

腺病毒载体介导NGF基因转染大鼠肌源性干细胞的实验研究

目的:探讨腺病毒载体介导神经生长因子(NGF)体外转染大鼠肌源干细胞(MDSCs)应用于基因治疗的可行性。方法:培养并纯化MDSCs细胞株,采用具有高效转染能力的腺病毒载系统将NGF基因导入MDSCs中,采用绿色荧光蛋白(EGFP)荧光技术检测转染率、实时荧光定量PCR (qPCR)检测目的基因NGF的表达情况。结果:...