小鼠GSK-3β慢病毒表达载体的构建及其在骨髓树突状细胞DC2．4中的表达

目的构建pLVX‐IRES‐TDtomat‐GSK‐3β慢病毒表达载体,感染小鼠骨髓DC2．4细胞,建立过表达GSK‐3β的小鼠DC2．4细胞系。方法利用RT‐PCR方法扩增小鼠GSK‐3β基因的编码区,并将其重组于表达载体pLVX‐IRES‐TDtomat中,经酶切、测序鉴定后包装成慢病毒,感染小鼠DC2．4细胞。实验分3组,分别为DC2．4细胞对照组,空病毒感染组,GSK‐3β慢病毒感染组,用实时荧光定量PCR方法和Western Blotting方法检测各组GSK‐3β的表达水平。结果经酶切和测序鉴定结果证实pLVX‐IRES‐ TDtomat‐GSK‐3β构建成功,并在包装细胞中高水平表达,慢病毒滴度高达1．26×108 TU／mL。GSK‐3β慢病毒感染组的GSK‐3β在mRNA表达水平和蛋白表达水平上均高于DC2．4细胞对照组及空病毒感染组。结论成功构建了表达GSK3β基因的重组慢病毒载体,并可在DC2．4细胞中稳定表达,为后续DC2．4的免疫功能研究奠定了基础。     

腺相关病毒载体在肺疾病基因治疗中的应用

腺相关病毒（adeno-associated virus,AAV）载体具有安全性好、免疫原性低、能感染分裂细胞和非分裂细胞、能介导基因的长期稳定表达等优点。因此,作为一种基因导入系统,重组AAV载体在基因治疗的研究和开发中受到越来越多的关注和重视。本文着重就重组AAV载体在肺部疾病基因治疗中的应用以及改进重组AAV载体的策略作简要综述。