Attempts to immunoprecipitate the LHRH precursor synthesized in cell free systems

In order to determine the molecular weight of the Luteinizing Hormone Releasing Hormone (LHRH) precursor, poly(A)-RNA from rat hypothalami and human placenta were translated in two mRNA dependent cell free translation systems. Total translation products were immunoprecipitated with two antisera that recognized LHRH high molecular weight forms. After SDS-polyacrylamide slab gel electrophoretic analysis of the immunoprecipitated material and fluorography, we detected in both tissues a protein of 50,000 daltons with the No. 1076 antiserum. This peptide was not immunoprecipitated by the No. 743 anti-LHRH antiserum or by non-immune rabbit serum. However, this protein was not displaced by excess LHRH added during the immunoprecipitation and seemed to be present in species where LHRH has not been reported. These data demonstrated that the LHRH mRNA is present in very low amounts in hypothalamus or placenta and that the sensitivity of the assay is not high enough to recognize it.     

TCT标本检测高危HPV E6/E7mRNA及在宫颈病变中的应用研究

目的 探讨新柏超薄液基细胞学检测(Thin-prep cytology test,TCT)标本检测高危人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)E6/E7 mRNA可行性及在宫颈癌筛查中的应用价值.方法 两种标本处理方法,分别在22例经超薄液基细胞学技术标本检测HPV E6/E7 mRNA及HPV E6/E7 DNA;对108例不同病变程度宫颈癌标本采取超薄液基细胞学技术检测高危HPV(high-risk HPV,HR-HPV)E6/E7 mRNA及高危HPV E6/E7 DNA,并行统计学处理.结果 两种方法处理标本行Willcoxon配对秩和检验比较,差异无显著意义(P＞0.05).随着宫颈病变程度增加,HPV E6/E7 mRNA表达率相应增加.新柏液基细胞学技术检测108例标本高危HPV E6/E7 mRNA表达的相对拷贝数为320.554±779.104,高危HPV E6/E7 DNA为1540.963士3575.255,两者秩相关检验,相关系数为1.结论 超薄液基细胞学检测标本可行高危HPV E6/E7 mRNA及HPV E6/E7 DNA检测;宫颈癌筛查检测HPV E6/E7 mRNA有一定临床意义.     

阿司匹林对卵巢癌细胞凋亡及Bcl-2／bax基因mRNA表达的影响

目的探讨阿司匹林对卵巢癌细胞凋亡的影响及对凋亡相关基因的作用。方法培养卵巢癌细胞株SK-OV-3,用不同浓度阿司匹林进行干预,用Giemsa染色观察细胞形态学改变,流式细胞仪方法定量检测细胞的凋亡及细胞周期的变化,用RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2／bax表达。结果阿司匹林对SK-OV-3增殖的抑制率随作用时间的延长和药物浓度的增加而增加;阿司匹林作用后SK-OV-3细胞出现了典型的凋亡形态学变化,可见凋亡小体;不同浓度的阿司匹林处理细胞48h后,流式细胞术（FCM）显示细胞的凋亡呈剂量依赖性。1、5、10mmol／L阿司匹林诱导SK-OV-3细胞的凋亡率分别为（11．1±0．5）％、（17．9±0．4）％、（30．8±0．4）％均高于对照组（P〈0．01）;同时,随着阿司匹林浓度的增加,Co／G期细胞比例下降,G／M期细胞比例升高,细胞被阻断在G2／M期,细胞周期发生明显改变;阿司匹林作用后的卵巢癌细胞的凋亡相关基因Bcl-2表达降低,bax基因表达升高。结论阿司匹林能抑制卵巢癌细胞增殖,诱导其凋亡．且阿司匹林诱导SK-OV-3细胞凋亡是通过下调Bcl-2表达和上调bax表达,而达到抗肿瘤的作用。     

淫羊藿苷对骨髓间充质成骨性活性强于金雀异黄酮

目的:比较研究金雀异黄酮与淫羊藿苷对体外培养原代大鼠骨髓间充质细胞(rats bone marrow stromal cell,rBMSC)成骨性分化的影响.方法:体外分离培养大鼠骨髓间充质细胞,筛选最佳的药物浓度;采用终浓度为1×10-5mol·L-1的金雀异黄酮和淫羊藿苷对体外培养原代大鼠骨髓间充质细胞进行干预;在药物干预后的第3,6,9,12,15天后测定碱性磷酸酶活性(alkaline pbosphatase,ALP)和3,6,9,12,15 d测定钙含量;第12天进行钙化结节茜素红染色;在药物干预后第12,24,48,72,96 h Real-time RT-PCR检测OXS,Runx-2,骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP-2)和Collagen-Ⅰ mRNA的表达水平.结果:浓度为1 ×10-5 mol·L-1金雀异黄酮和淫羊藿苷可提高ALP活性最高,增加Ca含量,调节骨代谢活性Runx-2,OXS,BMP-2和Collagen-Ⅰ mRNA的表达水平,淫羊藿苷比金雀异黄酮的成骨性作用更强一些.结论:在促进体外培养骨髓间充质细胞成骨性分化作用方面淫羊藿苷较强于金雀异黄酮.     

STMN 1m RNA在非小细胞肺癌中的表达与紫杉醇类药物化疗效果和患者生存率的关系

目的：RT－PCR法检测STMN1 mRNA在非小细胞肺癌石蜡组织中的表达与患者紫杉醇治疗疗效以及生存率的关系。方法：RT－PCR法检测135例非小细胞肺癌及20例正常肺组织中STMN1 mRNA的表达,探讨STMN1 mRNA表达水平与紫杉醇类药物化疗效果的关系。通过随访STMN1 mRNA不同表达水平的患者,探讨STMN1 mRNA表达水平与患者生存率的关系。结果：STMN1 mRNA表达水平在肺癌组织中显著高于正常肺组织（P＝0．021）。STMN1 mRNA低表达患者无进展生存期为13．0个月,而高表达者为8．0个月（P＝0．037）。紫杉醇类化疗方案在STMN1 mRNA 高表达组中的疗效显著低于 STMN 1 mRNA 低表达组（P＝0．028）,而在无紫杉醇类化疗患者中,两组之间疗效评价差异没有显著性（P＝0．912）。结论：STMN1 mR-NA在肺癌组织中高表达。STMN1 mRNA高表达与较短的生存期相关,STMN1 mRNA表达水平与紫杉醇类药物化疗效果有关。mRNA高表达组的患者化疗疗效较差,提示STMN1 mRNA高表达对紫杉醇耐药。     

nov基因在不同种属动物脊髓中的表达

用地高辛标记的cRNA探针原位杂交方法研究了鲢、青蛙、蛇、鸡、牛、犬和猫脊髓中肾母细胞瘤过度表达基因（nov）mRNA阳性神经元的种系发育。结果显示，低等脊椎动物鲢、青蛙和蛇脊髓中仅有少量novmRNA阳性神经元，分布于灰质腹角。鸡脊髓中阳性神经元除主要分布于脊髓腹角外，中央灰质也有少量分布。哺乳动物牛、大和猫脊髓灰质中novmRNA阳性神经元分布广泛，背腹角、中央灰质及中央核区都检测到很强的杂交信号。以上结果表明，nov基因在从低等脊椎动物到高等脊椎动物的进化过程中非常保守，这种保守性提示nov基因在脊髓神经元发育、分化及正常生理功能中可能具有重要作用。     

肝细胞生长因子对人舌鳞癌 Tca8113细胞 VEGF-C 表达的影响及作用机制的初步研究

目的：研究 HGF 对人舌鳞癌 Tca8113细胞中 VEGF-C 表达的影响并探讨其作用机制。方法：体外培养 Tca8113细胞,应用 ELISA 方法测定不同浓度 HGF 作用下以及分别用 LY294002、U0126、SP600125、SB203580信号通路抑制剂阻断PI3K/Akt、P44/P22MAPK、JNK、P38MAPK 信号通路后 VEGF-C 的表达水平。结果：随着培养液中 HGF 浓度的增加,Tca8113细胞中 VEGF-C 的表达水平出现先增高后降低的趋势,当 HGF 浓度为40 ng/ml 时,VEGF-C 表达水平最高。PI3K/Akt 信号通路抑制剂（LY294002）和 P42/44MAPK 信号通路抑制剂（U0126）显著抑制了 HGF 刺激下 Tca8113的 VEGF-C 蛋白的表达（P ＜0．01）;而 JNK 信号通路抑制剂（SP600125）和 P38MAPK 信号通路抑制剂（SB203580）对 HGF 刺激下 Tca8113的 VEGF-C 蛋白的表达影响甚微（P ＞0．05）。结论：在人舌鳞癌 Tca8113细胞中,随着 HGF 浓度的增加,VEGF-C 的表达先增高后降低。PI3K/Akt 和 P44/P22MAPK 信号通路在口腔鳞状细胞癌淋巴转移中可能发挥作用。     

E-钙黏蛋白基因启动子区甲基化在卵巢子宫内膜异位症中作用的研究

目的　探讨E-钙黏蛋白基因（CDH1）启动子区甲基化状态及其在卵巢子宫内膜异位症中的作用。方法　选择2011年10月—2013年8月河北医科大学第四医院诊治的50例经手术确诊的卵巢子宫内膜异位症患者和50例由于宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅲ级行子宫切除或子宫探查的对照妇女为研究对象,采用甲基化特异性聚合酶链式反应检测卵巢子宫内膜异位症患者在位内膜（在位内膜组）、异位内膜（异位内膜组）和对照妇女子宫内膜组织（对照子宫内膜组）CDH1启动子区甲基化状态;采用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和流式细胞术检测CDH1启动子区甲基化阳性组织（甲基化阳性组）和甲基化阴性组织（甲基化阴性组）CDH1 mRNA、E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达水平。结果　在位内膜组CDH1启动子区甲基化阳性率为26.0%（13/50）、异位内膜组CDH1启动子区甲基化阳性率为32.0%（16/50）、对照子宫内膜组为8.0%（4/50）,在位内膜组和异位内膜组CDH1启动子区甲基化阳性率明显高于对照子宫内膜组（P=0.017、0.003）。甲基化阳性组CDH1 mRNA、E-cadherin表达水平〔（0.4±0.2）、（129.0±17.5）〕明显低于甲基化阴性组〔（0.6±0.1）、（158.0±51.0）〕（P=0.023、0.035）。结论　卵巢子宫内膜异位症患者的在位、异位内膜组织存在着CDH1启动子区异常甲基化,甲基化阳性、阴性组织中CDH1 mRNA和E-cadherin表达水平有明显差异。提示CDH1启动子区的异常甲基化可能与卵巢子宫内膜异位症的发生相关。     

兔眼小梁切除术后滤过泡组织Fas mRNA的表达

目的　对小梁切除术后滤过泡组织ＦａｓｍＲＮＡ的表达进行初步研究。方法　新西兰白兔４８只单独笼养,随机选取４０只兔右眼行小梁切除术,使上方结膜形成滤过泡,按术后时间又分为１ｄ、７ｄ、１４ｄ、２０ｄ、２８ｄ共５个亚组,每组８只兔。另外８只兔的右眼未进行手术为正常对照组。在行小梁切除术后１ｄ、７ｄ、１４ｄ、２０ｄ、２８ｄ,切下滤过手术区组织,同时于２８ｄ时切除正常对照组相应部位的结膜组织。实时荧光定量ＰＣＲ检测各组标本的ＦａｓｍＲＮＡ表达情况。结果　兔眼小梁切除术后１ｄ、７ｄ、１４ｄ三个亚组ＦａｓｍＲＮＡ的相对表达量分别为１．３３±０．３５、１．４１±０．２８、１．３８±０．２５,与正常对照组的表达量１．４２±０．３４相比差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）,术后２０ｄＦａｓｍＲＮＡ相对表达量为０．９０±０．１８,较对照组明显下降,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）,２８ｄ时进一步下降至０．７８±０．０９（Ｐ＜０．０５）。结论　在兔眼结膜滤过泡组织愈合过程中,术后２０ｄ及２８ｄ凋亡主要基因ＦａｓｍＲＮＡ表达量明显减少,可能为减少青光眼小梁切除术后瘢痕化寻找到一个新的突破口。     

正常SD大鼠心血管系统内皮素转换酶表达水平及意义

目的：探讨正常ＳＤ大鼠心脏及血管（动脉、静脉）内皮素转换酶（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ－ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅ ＥＣＥ）ｍＲＮＡ的分布。方法：半定量ＲＴ－ＰＣＲ法检测组织中的ＥＣＥ ｍＲＮＡ,同时以甘油醛－３－磷酸脱氢酶（Ｇｌｙｃｅｒ－ａｌｄｅｌｙｄｅ－３－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ,ＧＡＰＤＨ）作内参照。结果：正常ＳＤ大鼠心脏各部位及血管（动脉、静脉）ＥＣＥ ｍＲＮＡ的