Induction of peroxisomal β-oxidation and P-450 4A-dependent activities by pivalic and trichloroacetic acid in rat liver and kidney

 The influence of pivalic acid (PIV), a compound often used to make pro-drugs, and of the structurally related trichloroacetic acid (TCA), on several hepatic and renal enzymes was investigated in Sprague-Dawley rats, following a 4-day treatment period. The PIV and TCA treatments resulted in a similar and selective induction (2 – 3 times) of peroxisomal palmitoyl-CoA oxidase and the cytochrome P-450 4A dependent microsomal (ω)- and (ω-1)-lauric acid activities, both in liver and kidney. Western blot analysis of liver and kidney microsomes from PIV- and TCA-treated rats, using antibody to the P-450 4A1, revealed induction of members of the P-450 4A subfamily. These results suggest that PIV, like TCA, is a renal and hepatic peroxisome proliferator in rats, and further support the previously indicated close association between the peroxisomal fatty acid β-oxidation enzymes and microsomal P-450 4A subfamily enzymes. Received: 7 February 1995 / Accepted: 21 August 1995     

黄芪甲苷和齐墩果酸对体外神经干细胞增殖和Jagged1 mRNA表达的影响

目的 观察黄芪甲苷和齐墩果酸对体外神经干细胞增殖和相关基因Jagged1表达的影响。方法 采用机械吹打法从胎鼠脑内获得神经干细胞,随机分组,分别给予不同浓度(10^-6,5×10^-7,10^-7,5×10^-8,10^-8,5×10^-9,10^-9 mol·L^-1)的黄芪甲苷、齐墩果酸进行干预,72 h后用WST法检测细胞的增殖情况,PCR检测Jagged1表达水平。结果 黄芪甲苷对体外神经干细胞增殖影响不显著,高剂量尚存在细胞毒性。齐墩果酸能促进神经干细胞增殖,且呈一定的剂量效应关系,与对照组和黄芪甲苷组比较均有显著差异(P<0.05)。细胞未分化状态下Jagged1基因存在一定的表达,增殖率越高Jagged1表达水平越高;与同浓度黄芪甲苷组比较,齐墩果酸显著上调Jagged1表达(P<0.05)。结论 不同浓度的黄芪甲苷和齐墩果酸对体外培养神经干细胞增殖和Jagged1表达的影响不同;齐墩果酸作用优于黄芪甲苷。     

银杏内酯A对小鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用及其抑制NF-κB信号通路下调p53、Caspase-3表达的机制

目的探讨银杏内酯A(Ginkgolide A,GA)对缺血/再灌注脑损伤小鼠的保护作用及其可能的作用机制。方法采用小鼠短暂性大脑中动脉阻塞(transient middle cerebralartery occlusion,tMCAO)模型观察GA(10,20 and 40 mg.kg-1)对小鼠脑梗死范围、脑含水量及神经症状的影响,并进行病理组织学检查;采用实时荧光定量PCR技术检测缺血大脑皮层p53 mRNA的表达;应用Western blot法检测缺血大脑皮层IκBα、pIκBα及Caspase-3蛋白水平的表达。结果 GA对缺血/再灌注小鼠神经症状有明显的改善作用,能明显降低脑梗死范围,降低脑含水量,脑组织病理组织学也显示了GA对神经细胞的保护作用。Western blot结果显示:小鼠脑缺血/再灌后,IκBα蛋白水平明显降低,GA能明显升高IκBα的蛋白水平,降低pIκBα和Caspase-3的蛋白水平。PCR结果表明:小鼠脑缺血/再灌后,p53 mRNA水平升高,GA能下调p53 mRNA的表达。结论 GA对缺血/再灌注小鼠脑损伤有明显保护作用,该作用可能与其抑制NF-κB信号通路,下调p53、Caspase-3的表达有关。     

脂蛋白脂肪酶A2与冠状动脉狭窄的相关性研究及临床意义

目的 探讨血清脂蛋白脂肪酶A2(Lp-PLA2)水平与冠状动脉粥样硬化性狭窄相关性及其临床诊断价值.方法 180例行冠状动脉造影患者分为冠心病组86例、非冠心病狭窄组64例和冠脉造影及体检正常对照组30例;依据冠脉造影结果计算Gesini积分;采用单因素方差分析探讨不同狭窄组与对照组间临床基线资料和脂蛋白脂肪酶A2差异,采用Spearman相关性分析Gesini积分与血清脂蛋白脂肪酶A2 (Lp-PLA2)水平,并绘制其ROC曲线,评价其临床诊断价值.结果 冠心病组、非冠心痛狭窄组与对照组在性别、年龄、吸烟、高密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白A中差异有统计学意义;Spearman相关性分析Lp-PLA2与Gesini积分相关(r=702,P=0.000),Lp-PLA2诊断冠脉狭窄的ROC曲线显示:诊断临界值、曲线下面积、敏感度、特异度分别为15.66 ng/mL、0.938、85.2％、93.3％.结论 Lp-PLA2与Gesini积分相关,可作为评估冠状动脉狭窄及严重程度的指标.     

非离子表面活性剂逆转肿瘤细胞多药耐药性的机制

目的探讨非离子表面活性剂聚氧乙烯醚﹑聚乙二醇300﹑曲拉通X100对肺癌耐药细胞A549/DDP(耐顺铂)多药耐药性的逆转及其机制。方法用四氮唑盐(MTT)法进行体外耐药逆转实验,Westernblot检测P-gp(P-糖蛋白)蛋白的表达。结果①合用非离子型表活剂前后,A549/DDP对化疗药物阿霉素、顺铂、丝裂霉素、5-氟尿嘧啶、依托泊甙和长春新碱的敏感性显著增加(各组都为P<0.01);②三种非离子型表面活性剂能抑制P-gp蛋白的表达。结论三种非离子表面活性剂具有逆转A549/DDP耐药性的作用,逆转机制与其抑制P-gp蛋白的表达有关。     

6′-羟基爵床定A对肿瘤细胞的抑制活性及其对肿瘤细胞氧化还原系统的影响

目的筛选对6′-羟基爵床定A(JR6)敏感的肿瘤细胞株并探讨其对细胞氧化还原功能的影响。方法将人膀胱癌细胞株EJ、肝癌细胞Bel、肺癌细胞A549、结肠癌细胞HCT-8和HT-29、胃癌细胞BGC、大肠癌细胞LS180、宫颈癌细胞HeLa、肝癌细胞HepG2以及乳腺癌细胞MCF-7分为正常对照组、阳性药对照顺铂、多柔比星、替尼泊苷、依托泊苷和5-氟尿嘧啶组及JR6组,细胞加入相应的药物培养48h后,采用噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞存活率并计算IC50值。选用对JR6与多柔比星作用敏感的人膀胱癌细胞EJ,加入相应的药物培养48h后,分别检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量。EJ细胞分为外源性SOD+多柔比星9.19μmol.L-1组和外源性SOD+JR63.02,9.07,27.2,81.7和245μmol.L-1处理组,其中SOD分别为0,1.9,5.6,16.7,50和150kU.L-1,MTT法检测细胞存活率。多柔比星9.19μmo.lL-1,JR612.3,49.0和196μmo.lL-1加入EJ细胞,24h后用激光共聚焦显微镜检测EJ细胞内活性氧类的含量。结果 EJ细胞对JR6较为敏感,IC50为57.1μmol.L-1,多柔比星对EJ细胞的IC50为4.08μmol.L-1。其余9种肿瘤细胞对JR6的IC50值为71.3～123μmol.L-1。与正常对照组比较,多柔比星9.19μmo.lL-1能明显降低EJ细胞内SOD,GSH-Px和CAT活性,分别降低了(64.3±2.1)%,(66.5±3.5)%和(49.6±1.9)%,而MDA的含量明显升高了(432.0±5.4)%(P<0.01);JR63.02,9.07,27.2,81.7和245μmo.lL-1使EJ细胞内SOD的活性分别降低了(7.28±0.3)%,(57.1±3.2)%,(66.5±4.7)%,(72.1±5.5)%和(77.8±2.4)%;GSH-Px活性分别降低了(20.3±1.6)%,(32.8±2.3)%,(45.3±3.6)%,(59.3±4.5)%和(71.9±4.2)%,CAT活性分别降低了(10.1±0.6)%,(15.9±0.7)%,(25.9±2.3)%,(38.8±3.5)%和(52.4±3.9)%;同时MDA含量分别升高了(24.4±1.3)%,(90.2±8.70)%,(217.0±19.0)%,(356.0±24.0)%和(539.0±32.0)%(P<0.05,P<0.01)。与无外源性SOD组比较,在外源性SOD存在时,多柔比星与JR6对EJ细胞的生长抑制率明显下降(P<0.05)。与正常对照组相比,多柔比星9.19μmol.L-1使EJ细胞活性氧类水平升高了(43.0±2.1)%,JR612.3,49.0和196μmol.L-1使EJ细胞ROS水平分别升高了(40.7±0.7)%,(84.1±6.3)%和(151.0±2.9)%(P<0.01)。结论人膀胱癌细胞株EJ对JR6最敏感;JR6通过干预细胞内氧化还原系统平衡抑制细胞的增殖,外源性SOD可以拮抗JR6对敏感细胞增殖的抑制作用。     

蓝萼甲素对宫颈癌HeLa细胞的作用及其相关机制研究

目的观察蓝萼甲素对宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用,探讨其诱导凋亡的机制。方法采用体外细胞培养方法,以不同浓度蓝萼甲素作用于HeLa细胞,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞的存活率;透射电镜观察细胞的形态学变化;流式细胞仪(AnnexinV-FITC)检测细胞凋亡率的变化;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达情况。结果与对照组相比,蓝萼甲素对HeLa细胞有增殖抑制作用,呈剂量、时间依赖趋势;Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上调,Caspase-3、Caspase-9蛋白表达上调。结论蓝萼甲素对宫颈癌HeLa细胞有增殖抑制及诱导凋亡的作用,其分子机制可能与线粒体信号通路有关。     

分蘖葱头中新黄酮苷的结构鉴定

目的　研究百合科植物分蘖葱头（Allium cepa L. var agrogatum Don）鳞茎的黄酮类化学成分。方法　利用Sephadex LH-20柱色谱进行分离纯化。从分蘖葱头中分离得到4个化合物,用IR,UV,MS,¹HNMR,¹³CNMR,¹H-¹H COSY,¹H-¹³C COSY和HMBC等光谱鉴定化合物。结果　经光谱鉴定化合物结构为：槲皮素3′-甲氧基-4′-O-β-D-葡吡喃糖苷(I)、山奈酚(II)、槲皮素4′-O-β-D-葡吡喃糖苷(III)和槲皮素3,4′-二-O-β-D-葡吡喃糖苷(IV)。结论　化合物I为新的黄酮苷类化合物,命名为分蘖葱头苷甲（Alliumoside A）; II,III和IV为首次从该植物中分得。     

半夏水提取液逆转多药耐药细胞系K562/A02耐药性的研究

目的观察非细胞毒性浓度半夏水提取液对耐阿霉素的人白血病细胞系K562/A02多药耐药性的逆转作用,并探讨其逆转机制.方法采用MTT法测定半夏水提取液的细胞毒性及其对K562/A02细胞敏感性的影响,用流式细胞仪检测非细胞毒性浓度的半夏水提取液处理后K562/A02细胞膜表面糖蛋白P170表达的变化.结果半夏水提取液对K562/A02细胞有一定的细胞毒作用,非细胞毒性浓度半夏水提取液可显著降低阿霉素对K562/A02细胞的IC50,显著降低细胞膜糖蛋白P170的表达.结论半夏水提取液可部分逆转多药耐药细胞系K562/A02细胞对阿霉素的耐药性.     

正交试验法优选连翘叶中连翘酯苷A的提取工艺

目的建立连翘叶中连翘酯苷A的最佳提取工艺。方法以连翘酯苷A提取率为指标,采用高效液相色谱法检测,通过单因素、正交试验优化提取工艺参数。结果选用渗滤法,以50%乙醇浸泡24 h,以0.5 mL/min的速率渗滤,收集8倍量渗滤液,提取的效果最佳。结论渗滤法简单易行,提取率高,重现性好。