前列腺癌患者CYP1A2 IVS4+43A/G基因型分析

目的:应用TaqMan荧光定量技术,了解前列腺癌患者CYP1A2 IVS4+43A/G位点基因表型。方法:应用ABI Prism7300型荧光定量PCR仪,通过序列检测系统测定85例前列腺癌患者CYP1A2 IVS4+43A/G的各种基因型,并分析不同基因型患者与前列腺癌分化之间的相关性。结果:85例前列腺癌患者中CYP1A2 IVS4+43A/G位点基因表型为AA5例(5.9%),AG33例(38.8%),GG47例(55.3%)。且各基因表型与前列腺癌Gleason评分无明显相关性。结论:CYP1A2 IVS4+43A/G各基因表型与前列腺癌分化之间无明显相关性。     

HCV NS5A反式激活基因 NS5ATP13在毕氏酵母中的表达研究

目的 探讨NS5AATP13能否在毕氏酵母中成功表达.方法 用Bst X I将pPICZαANS5ATP13线性化后,电转化毕氏酵母菌株KM71H,用Zeocin筛选高拷贝数的酵母菌落,在BMGY和BMMY培养基中进行诱导表达,以甲醇诱导,30℃培养4 d,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot 分析.结果 预期分子量大小的NS5ATP13蛋白分泌至培养液.结论 NS5ATP13在毕氏酵母中成功表达.     

应用羟基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺脂探讨新型免疫抑制剂J2作用机制

目的探讨基于CIM立体构型设计的新型免疫抑制剂（J2）在小鼠体内的免疫抑制作用以及其作用机制。方法将羧基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺酯（CFSE）标记的C57BL／6（H-2b）小鼠的淋巴细胞4×10^6～6×10^6经尾静脉注入经印钴照射（900拉德）后的DBA／2（H-2d）小鼠体内构建模型。将DBA／2小鼠随机分为5组，每组5只，模型建立后即刻腹腔注射J2，每天1次。对照组注射生理盐水、CsA组注射环孢素A（10mg／kg体重）；实验组J2A组（1mg／kg体重）、J2B组（4mg／kg体重）、J2C组（8mg／kg体重）。给药3d后分组处死DBA／2小鼠取脾制备淋巴细胞，用CD3、CD4、CD8单抗分别标记受检T细胞，FACS流式细胞仪检测CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞在小鼠体内分裂增殖的情况，并检测CD4^＋T细胞的凋亡情况。结果CFSE标记C57BL/6小鼠的脾淋巴细胞着染率大于99％。对照组分裂的CD4^＋T细胞（75．34±1．58）％、分裂的CD8^＋T细胞（83．48±1．25）％明显多于CsA组和实验组（P〈0．01）。J2B组和J2C组分裂的细胞数分别与CsA组比较差异无统计学意义（P〉0．05），但J2A组多于CsA组（P〈0．05）。对照组CD4^＋T细胞早期凋亡的比例（41．1±3．4）％明显高于其他各组（P〈0．01）。J2A组（35．6±4．1）％、J2B组（24．0±3．7）％和J2C组（13．6±2．3）％CD4^＋T细胞早期凋亡的比例显著高于CsA组（7．4±1．9）％（P〈0．05）。结论J2可能抑制T细胞亚群CD4^＋T细胞的活化，从而进一步抑制CD8^＋T细胞的分裂增殖而具有免疫抑制作用。     

RASSF1A基因表达对人肝癌细胞株QGY-7703生长的影响

目的观察RASSFlA基因的表达对人肝癌细胞株QGY-7703在体内外生长的影响。方法利用已构建成功的稳定表达RASSFlA基因的肝癌细胞株QGY-7703，通过细胞生长曲线、软琼脂集落形成试验、细胞周期的测定和裸鼠致瘤性试验对各稳定表达株的生物学行为进行检测。结果以未转染的QGY-7703为对照，RASSFlA基因的表达可明显抑制肝癌细胞在体外的生长速度，使肝癌细胞周期阻滞在G1／S期，显著降低肝癌细胞在软琼脂中形成的克隆数目（P〈0．01）和大小，显著减慢裸鼠皮下瘤的生长速度和重量（P〈0．01）。空载体的表达对肝癌细胞的生长影响不明显。结论RASSFlA的重表达抑制肝癌细胞在体内外的生长；RASSFlA基因是一个新的肝癌相关的抑癌基因。     

伊凡露联合肉毒毒素在面部除皱术中的应用

目的:观察充填材料伊凡露结合肉毒毒素在面部除皱术中的临床应用效果.方法:首先将伊凡露注射于需要填充的皱纹部位,而后在皱纹附近标记点注射肉毒毒素.结果:共治疗69例,术后随访1～2年,满意率达89.6%,有效率达99%,疗效满意.结论:伊凡露联合肉毒毒素在面部除皱术中的应用,在美容外科领域有着非常好的应用前景.     

根据CD4立体构型设计的新型免疫抑制物J2抑制小鼠胰岛移植急性排斥反应的初步观察

目的评价基于CD4立体构型设计的新型免疫抑制物J2对小鼠胰岛移植后急性排斥反应的影响。方法将900～1000个DBA/2（H-2^d）小鼠的胰岛移植在糖尿病模型C57BL/6（H-2^b）小鼠肾被膜下。移植前用台盼蓝和双硫腙染色检测胰岛细胞活性和纯度。将C57BL/6小鼠随机分为5组,每组10只,在胰岛移植后第1～10天腹腔内注射J2,每天一次。对照组注射生理盐水、CsA组注射环孢素A（10 mg/kg）;实验组J2A组（1mg/kg）、J2B组（4 mg/kg）、J2C组（8 mg/kg）。术后监测不同时间各组小鼠的血糖变化及移植胰岛的存活时间,并观察移植胰岛在术后第三天及发生急性排斥反应时的组织病理学及免疫组化表现。结果获得的胰岛细胞的活性＞95%,纯度＞85%。胰岛移植术前各组糖尿病小鼠的血糖平均高于20.0mmol/L,术后前四天各组小鼠的血糖下降明显,均低于11.1 mmol/L,且各组之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。移植第7天以后,对照组、J2A组小鼠的血糖较术后前四天明显升高（P＜0.05）。术后第八天开始,对照组、J2A组小鼠血糖升高平均高于11.1 mmol/L;CsA组、J2B组、J2C组的血糖仍低于11.1 mmol/L,三组之间无明显差异,但明显低于对照组和J2A组（P＜0.05）。病理学检查示移植后第三天各组移植的胰岛细胞轻度水肿,形态大致正常;移植后第八天对照组、J2A组的移植胰岛出现急性排斥反应病理改变,其他组病理未见排斥表现,小鼠胰岛素抗体免疫组化结果显示胰岛素阳性。CsA组（21.6±2.1 d）、J2B组（19.0±2.7d）、J2C组（18.7±2.3d）的移植胰岛存活时间比较差异无统计学意义,但分别较对照组（8.1±0.56d）、J2A组（8.3±0.48d）显著延长（P＜0.01）。结论一定剂量的J2具有和CsA相似的免疫抑制作用,可明显抑制小鼠胰岛移植后排斥反应的发生,显著延长移植物的存活时间。     

11个Fabry病家系的α-半乳糖苷酶A活性及GLA基因检测

目的 建立Fabry病α-半乳糖苷酶A（α-gal A）酶活性及基因检测体系,并对基因型临床表型进行分析。方法 检测11个Fabry病家系先证者及家系成员外周血粒细胞α-gal A活性及GLA基因。酶活性检测采用底物荧光法,基因检测采用PCR直接测序法,并进行临床评估。结果 在11个Fabry病家系中检出9种GAL基因突变,包括5个错义突变（R301Q、I91T、G132R、F273L、D165Y）,2个无义突变（W236X、R342X）,1个单碱基缺失（1082delG）和1个大片段缺失（44 bp nt．1077）,其中4种为新突变（D165Y、F273L、1082delG、44 bp nt．1077）。11个家系中通过基因及酶活性检测,确诊男性半合子13例,女性杂合子12例。男性半合子α-gal A酶活性显著下降,女性杂合子α-gal A酶活性部分下降,1/4女性杂合子的α-gal A酶活性处于正常范围内。结论 确诊了11个Fabry病家系的GLA基因突变类型,并筛出所有家系中先证者以外的患者14例。外周血粒细胞α-gal A酶活性和GAL基因检测是筛查和诊断Fabry病的有效手段。     

吸入麻醉药作用机制的5埃理论

在过去的20多年中,对吸入麻醉药作用机制的合理解释大量增多,同时也提出了更多目前还不能回答的问题。Eger等提出了吸入麻醉药产生对伤害性刺激无体动反应的作用靶位可能是两个相距5埃的位点的假设,简称5埃理论。现就相关问题作一综述。     

Fifteen-year remission of a steroid-resistant nephrotic syndrome sustained by cyclosporine A

Many children with a late steroid-resistant nephrotic syndrome (SRNS) and focal glomerulosclerosis have a poor prognosis and enter end-stage renal failure (ESRF) within five years. Reports are scarce on the long-term follow-up of patients entering remission while receiving immunosuppressive therapy after steroids have failed. A two-year-old boy with focal and segmental glomerulosclerosis having both late steroid and cyclophosphamide resistance entered complete remission of the SRNS almost two years after starting induction therapy with cyclosporine A (CSA). During the 15-year follow-up, the patient experienced five relapses during CSA maintenance therapy. All relapses were successfully treated within 10 days by intravenous methylprednisolone pulses in addition to CSA. The relapses were accompanied by a drop in the glomerular filtration rate (GFR). At the age of 18 years, the patient had grade II chronic kidney disease (GFR=61 ml/min/1.73 m²). At the age of 14 years, mycophenolate mofetil (MMF) was added to the maintenance therapy and the CSA dosage was reduced. Two renal biopsies at the ages of 10 and 18 years failed to detect CSA nephrotoxicity. We conclude that children with SRNS may have long-term benefit from a combination therapy using intravenous methylprednisolone pulses and CSA.     

The hallucinogenic herb Salvia divinorum and its active ingredient salvinorin A inhibit enteric cholinergic transmission in the guinea-pig ileum.

Salvia divinorum is a widespread hallucinogenic herb traditionally employed for divination, as well as a medicament for several disorders including disturbances of gastrointestinal motility. In the present study we evaluated the effect of a standardized extract from the leaves of S. divinorum (SDE) on enteric cholinergic transmission in the guinea-pig ileum. SDE reduced electrically evoked contractions without modifying the contractions elicited by exogenous acetylcholine, thus suggesting a prejunctional site of action. The inhibitory effect of SDE on twitch response was abolished by the opioid receptor antagonist naloxone and by the kappa-opioid antagonist nor-binaltorphimine, but not by naltrindole (a delta-opioid receptor antagonist), CTOP (a mu-opioid receptor antagonist), thioperamide (a H(3) receptor antagonist), yohimbine (an alpha(2)-receptor antagonist), methysergide (a 5-hydroxytryptamine receptor antagonist), N(G)-nitro-L-arginine methyl ester (an inhibitor of NO synthase) or apamin (a blocker of Ca(2+)-activated K(+) channels). Salvinorin A, the main active ingredient of S. divinorum, inhibited in a nor-binaltorphimine- and naloxone-sensitive manner electrically induced contractions. It is concluded that SDE depressed enteric cholinergic transmission likely through activation of kappa-opioid receptors and this may provide the pharmacological basis underlying its traditional antidiarrhoeal use. Salvinorin A might be the chemical ingredient responsible for this activity.