肾上腺脑白质营养不良的分子诊断（附2例报告）

目的 探讨肾上腺脑白质营养不良(ALD)的分子诊断方法。方法 在临床诊断的基础上，从2名患者外周血提取白细胞总RNA，进行反转录后，用PCR方法分四段扩增ALD基因编码区。纯化PCR产物，并对其进行序列测定。查出突变位点后，对患者家系成员的基因组DNA进行PCR-限制性酶切分析。结果 患者A的ALD基因第280位密码子发生CGC→CTC改变，使原来编码的精氨酸被亮氨酸取代(R280L突变)；患者B的ALD基因第508位密码子发生了CCC→CTC改变，使正常的脯氨酸被亮氨酸替换(P508L突变)。两个突变通过酶切分析和家系调查得到进一步确证。结论 建立了ALD的分子诊断技术，并在中国人ALD患者发现了两个新的ALD基因突变。     

pten基因对人胃癌BGC823细胞PI3'K/AKT耐药通路的影响

目的:研究外源性pten基因转染对人胃癌BGC823细胞PI3'K/AKT耐药通路的影响。方法:以无内源性pten表达的人胃癌BGC823细胞株转染PEAK8空载质粒和PEAK8-pten质粒,给予足叶乙苷和阿霉素诱导,RT-PCR方法分析目的基因的表达,免疫沉淀后Western-blot检测AKT活性。结果:RT-PCR显示转染pEAK8-pten质粒组有pten强表达。pten基因的导入对化疗药诱导的AKT活性有抑制作用。结论:pten基因转染能抑制人胃癌BGC823细胞体外生长,促进凋亡,并通过抑制AKT活性加强化疗药物的疗效。     

纤维蛋白原Bβ链变异基因的体外重组

目的：采用基因重组技术将可能与血栓形成有关的纤维蛋白原Ｂβ链羧基端的ＫＧＤ结构置换为ＥＧＳ结构,提供一种简单方便的构建变异克阡的方法。方法：有含有正常ＢβｃＤＮＡ的ｐＭＬＰ质粒（简称ｐ６８８）的溶液中,加入变异引诱的、筛选引物和ｄＮＴＰ。在Ｔ４聚合酶和Ｔ４连接酶的作用下,合成除变异碱基外,其他碱基均与原正常Ｂβ链互补的变异Ｂβ链,经过两次在不同菌系的大肠杆菌中的表达与筛选,获取变异碱基外,其他碱基     

降钙素基因相关肽介导的离体大鼠心脏缺血预处置

降钙素基因相关肽介导的离体大鼠心脏缺血预处置１肖洲生，李元建２，邓汉武（湖南医科大学药理教研室，长沙４１００７８，中国）关键词降钙素基因相关肽；心肌再灌注损伤；心功能试验；肌酸激酶目的：研究降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）在离体大鼠心脏缺血预处置（ＰＣ）...     

Effects of malachite green on the mRNA expression of detoxification‐related genes in Nile tilapia (Oreochromis niloticus) and other major Chinese freshwater fishes

The use of malachite green (MG) in fish farming is prohibited in China due to its potentially toxicological and carcinogenic nature, but it is still illegally used in some places. The aim of this study was to investigate the time and concentration‐dependent responses of xenobiotic metabolizing and detoxification‐related genes in diverse fishes exposed to MG both in vivo and in vitro. Experimental fish were administered to two exposure groups of malachite green (MG) (0.10 and 0.50 mg L^?1) for 8 h. The hepatocytes isolated from Nile tilapia were incubated with MG (0.5, 1.0, and 2.0 mg L^?1) for 8 and 24 h, respectively. In vivo, exposure to 0.10 and 0.50 mg L^?1 MG for 8 h caused significant changes of the detoxification‐related genes on the mRNA expression levels. Low‐concentration (0.10 mg L^?1) level of MG induced significant increase on the mRNA expression level of GSTR gene in Nile tilapia and other fishes. The mRNA expression of grass carp UCP2 was significantly induced when exposed to 0.5 mg L^?1 MG. However, the mRNA expression levels of GSTA, CYP1A, and GPX were inhibited significantly by 0.5 mg L^?1 MG in Nile tilapia, grass carp, and Taiwan snakehead. In vitro, the significant increase of mRNA expression of these genes was detected after exposure to 0.5 mg L^?1 MG (UCP2), and 1.0 mg L^?1 MG (CYP1A1, GSTA, GSTR, and UCP2). The induction of hepatic CYP1A1, GSTA, GSTR, and UCP2 in response to MG suggested a potential role of fish CYP1A1, GSTA, GSTR, and UCP2 in MG metabolism. © 2011 Wiley Periodicals, Inc. Environ Toxicol, 2013.     

miRNA的研究进展

microRNA又称miRNA,是真核生物细胞中固有的一类不编码蛋白的小分子RNA。生物体中,miRNA能够转录后调控基因的表达,影响着几乎所有的信号通路,参与多种生理病理过程,在肿瘤的发生和发展中也发挥了重要的调节作用。研究miRNA与肿瘤的关系是近年来备受关注的热点之一,其影响肿瘤发生和发展的作用机制将为肿瘤的诊断和治疗提供新的思路。     

载体介导杜氏肌营养不良症的基因治疗研究现状

杜氏肌营养不良症(DMD)是由肌营养不良蛋白缺失或减少引起的全身肌肉渐进性损伤和运动功能减退的致死性基因遗传病.目前关于DMD患者的治疗手段越来越多,包括药物治疗、物理治疗、基因治疗、干细胞疗法和运动训练疗法等.本文梳理了近20年来载体介导DMD基因治疗情况,发现使用短序列肌营养不良蛋白基因在治疗DMD模型小鼠和犬类身...     

葡萄糖脑苷脂酶基因多态性与帕金森病的相关性

目的 研究贵州人群帕金森病(PD)患者的葡萄糖脑苷脂酶(GBA)基因N370S、V394L和IA44P突变位点多态性,探讨GBA基因突变与PD的相关性.方法 选取50例PD患者和50例正常对照组的基因组DNA,通过PCR扩增GBA基因的外显子8-11 DNA片段,再以纯化的PCR产物作模板,通过PCR分别扩增GBA基因外显子9和外显子10 DNA片段,纯化后测序.结果 PD患者和正常对照组的GBA基因外显子9和外显子10核苷酸序列完全一致,未发现突变点.结论 在中国贵州人群中,GBA基因N370S、V394L和LA44P突变位点无多态性,提示GBA基因N370S、V394L和L444P突变与中国贵州人群的PD不具有相关性.     

乳腺癌组织拓扑异构酶Ⅱα基因检测方法对比研究

目的对比研究免疫组织化学(IHC)法检测乳腺癌组织拓扑异构酶Ⅱα(TOP2A)蛋白表达水平和荧光原位杂交(FISH)法检测TOP2A基因状态,并探讨FISH法和显色原位杂交(CISH)法检测TOP2A基因状态的临床意义。方法用IHC法和FISH法分别检测96例乳腺浸润性导管癌组织TOP2A蛋白水平和TOP2A基因扩增状态(已有CISH结果),并进行比对分析。结果本组96例乳腺癌组织TOP2A蛋白阳性表达52例(54%),阴性表达44例(46%);TOP2A基因扩增15例(16%),无扩增81例(84%),2种方法检测结果差异有统计学意义(P<0.05)。17号染色体多体在TOP2A蛋白(+)和(-)2组中的发生率分别为46%和27%,2组多体发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05);17号染色体在本组96例乳腺癌中总发生率为38%。FISH法与CISH法检测TOP2A基因结果的一致性尚可(Kappa=0.66,P<0.05)。结论以FISH法检测TOP2A基因状态,用于指导临床选择蒽环类药物的辅助化疗方案,可能更有助于提高乳腺癌的治疗疗效;CISH法能否替代FISH法用于临床检测TOP2A基因状态尚需大样本量进一步验证。     

p15基因对人肝癌HepG2顺铂耐药细胞周期和耐药性的影响研究

目的:利用p15-shRNA表达载体干扰细胞周期相关基因p15,探讨p15基因对人肝癌HepG2顺铂耐药细胞周期和耐药性的影响。方法:用梯度浓度的顺铂诱导HepG2细胞耐药并建立动态耐药模型HepG2/顺铂/2.0,以不同浓度(30、60、90nmol·L-1)的干扰质粒p15-shRNAY2和阴性对照质粒(shRNA-F)转染HepG2/顺铂/2.0细胞后48h检测p15荧光阳性细胞,筛选最佳干扰浓度;以筛选结果转染HepG2/顺铂/2.0细胞,与未转染细胞和阴性对照转染细胞比较,检测细胞存活情况、周期分布和p15、Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果:最佳干扰浓度为60nmol·L-1;与未转染细胞和阴性对照转染细胞比较,p15-shRNAY2转染细胞的存活率明显增加,G1期细胞明显减少,p15、Bax蛋白表达明显降低,Bcl-2蛋白表达明显增加(P均<0.01)。结论:p15-shRNA可抑制p15基因表达,干扰细胞周期使G1期的比例减少,增加HepG2/顺铂/2.0对顺铂的耐药性。