桂枝茯苓丸对荷瘤鼠肿瘤细胞凋亡的影响

背景与目的:探讨桂枝茯苓丸方剂诱导肿瘤细胞凋亡机制,为桂枝茯苓丸(GFW)开发应用提供实验依据.材料与方法:取30只小鼠,每只鼠右侧腋下皮下注射0.2 ml的S180瘤细胞悬液,将其随机分为模型组、中药(GFW)组、环磷酰胺(CP)组,每组10只,另取10只未荷瘤小鼠作为正常对照.模型组用生理盐水灌胃,每天0.02 ml/g;中药组用GFW给小鼠灌胃,每天0.02 ml/g;环磷酰胺组于小鼠腹腔注射CP,每天20 mg/kg.各组小鼠均于接种后次日给药,每天给药1次,连续10 d后,小鼠脱颈处死,取腋下实体瘤,计算抑瘤率,流式细胞仪测定细胞凋亡率,电镜观察肿瘤细胞超微结构.原位杂交法检测Survivin mRNA表达.结果:GFW抑瘤率为38.93%,流式细胞仪检测GFW组细胞凋亡率17.79%,与模型组比较差异均具有统计学意义(P均＜0.05).GFW组镜下可见瘤细胞以凋亡变化为主.内膜结构完好,核膜清晰,细胞核固缩,染色质团块状散布核内或边集核膜下,并可见凋亡小体.GFW下调肿瘤细胞Survivin mRNA表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:GFW诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能与下调Survivin mRNA表达密切相关.     

Survivin与肿瘤转移

Survivin是一种新型凋亡抑制因子,近年来不断发现其在肿瘤组织中表达,并与肿瘤转移和预后密切相关,成为新的研究热点,同时也为肿瘤转移靶向治疗提供了全新的方向。     

Design of Dendrimer Modified Carbon Nanotubes for Gene Delivery

Objective: To investigate the efficiency of polyamidoamine dendrimer grafted carbon nanotube (dendrimer-CNT) mediated entrance of anti-survivin oligonucleotide into MCF-7 cells, and its effects on the growth of MCF-7 cells. Methods: Antisense survivin oligonucleotide was anchored onto polyamidoamine dendrimer grafted carbon nanotubes to form dendrimer-CNT-asODN complex and the complex was characterized by Zeta potential, AFM, TEM, and 1% agarose gel electrophoresis analysis. Dendrimer-CNT-asODN complexes were added into the medium and incubated with MCF-7 cells. MTT method was used to detect the effects of asODN and dendrimer-CNT-asODN on the growth of MCF-7 cells. TEM was used to observe the distribution of dendrimer-CNT-asODN complex within MCF-7 cells. Results: Successful synthesis of dendrimer-CNT-asODN complexes was proved by TEM, AFM and agarose gel electrophoresis. TEM showed that the complexes were located in the cytoplasm, endosome, and lysosome within MCF-7 cells. When dendrimer-CNT-asODN (1.0 μmol/L) and asODN (1.0 μmol/L) were used for 120 h incubation, the inhibitory rates of MCF-7 cells were (28.22±3.5)% for dendrimer-CNT-asODN complex group, (9.23±0.56)% for only asODN group, and (3.44±0.25)% for dendrimer-CNT group. Dendrimer-CNT-asODN complex at 3.0 μmol/L inhibited MCF-7 cells by (30.30±10.62)%, and the inhibitory effects were in a time- and concentration- dependent manner. Conclusion: Dendrimer-CNT nanoparticles may serve as a gene delivery vector with high efficiency, which can bring foreign gene into cancer cells, inhibiting cancer cell proliferation and markedly enhancing the cancer therapy effects.     

Survivin和PTEN蛋白在宫颈鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的：探讨凋亡抑制基因蛋白Survivin与抑癌基因蛋白PTEN在宫颈癌前病变和宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及其两者的相关性。方法：选取93例慢性宫颈炎、宫颈糜烂伴鳞化（慢鳞）、宫颈上皮内瘤变（CIN）及宫颈鳞状细胞癌患者，另取10例正常宫颈组织作为对照。应用免疫组化S-P法检测各组宫颈组织中Survivin和PTEN蛋白的表达。结果：（1）从慢鳞-上皮内瘤变-宫颈鳞状细胞癌，Survivin的表达逐渐增强（P〈0．01），而PTEN的表达逐渐减弱（P〈0．01）；（2）Survivin的表达与宫颈癌组织学分级、浸润深度、临床分期有关（P〈0．05），而与年龄无关（P〉0．05）；PTEN蛋白的表达与宫颈癌浸润深度、临床分期有关（P〈0．05），而与年龄、组织学分级无关（P〉0、05）；（3）Survivin与PTEN蛋白的表达在CIN、宫颈鳞状细胞癌组织中的表达呈显著负相关（P〈0．01），而且在宫颈癌中的表达相关性更为密切。结论：Survivin的异常高表达与PTEN的异常低表达参与了宫颈癌的发生、发展，与凋亡抑制和增殖能力增强有关；发生在宫颈癌恶性转化的早期，并且其表达程度可作为预后不良的标志。     

生存素在肝细胞癌中的表达及其与Akt磷酸化的相关性

目的 研究抗凋亡基因生存素(survivin)在肝细胞癌中的表达及其与磷酸化蛋白激酶B(Akt)的相关性.方法 从30例肝细胞癌组织、11例癌旁组织、11例正常肝组织中提取总RNA及蛋白,利用RT-PCR、蛋白印迹,检测生存素在3种组织中的表达水平;并分析肝癌组织中生存素表达与Akt磷酸化水平的关系.结果 肝癌组织中生存素的表达水平明显高于癌旁和正常肝组织(P＜0.01);同时低分化、有肿瘤转移的肝癌其生存素表达强度明显高于高分化、无转移的肝癌(P＜0.05);相关分析表明,肝细胞癌组织中生存素的表达与Akt磷酸化的表达呈正相关(r= 0.8086,P＜0.05).结论 Akt磷酸化水平的增高可导致生存素蛋白表达水平的明显增高,生存素、磷酸化 Akt异常高表达与肝细胞癌具有密切关系,它们在肝癌的发生、发展中起着重要的作用.     

生存素在卵巢移行细胞癌中的过度表达

目的 探讨生存素(survivin)在卵巢移行细胞癌中的表达及意义.方法 应用免疫组化的方法检测生存素在36例卵巢移行细胞癌和25例正常卵巢组织中的表达,并评估其与各临床指标以及预后的相关性.结果 生存素在卵巢移行细胞癌组织中阳性表达率为80.6%(29/36),在正常卵巢组织均不表达(P＜0.01);卵巢移行细胞癌生存素表达与预后有相关性(P＜0.05).结论 卵巢移行细胞癌生存素高表达患者预后较差.     

乳腺癌新辅助化疗Bcl-2和生存素的表达及其与化疗反应的相关性

目的 探讨乳腺癌新辅助化疗Bcl-2和生存素两种凋亡抑制蛋白的表达与新辅助化疗反应之间的相关性.方法 用免疫组化法(SP法)测定64例行新辅助化疗乳腺癌及38例术前未行化疗乳腺癌中Bcl-2和生存素的表达,观察癌组织的临床化疗反应与病理组织学上疗效,并分析它们之间的相关性.结果 (1)新辅助化疗组与未化疗组Bcl-2和生存素蛋白阳性率分别为65.6%、68.7%与60.5%、76.3%,两者比较差异均无显著性(P＞0.05).(2)64例乳癌新辅助化疗组中,化疗后临床有效者为39例(有效率为60.9%),病理组织学上有效者为35例(有效率为54.7%),Bcl-2与新辅助化疗反应之间的相关性不明显(P＞0.05),生存素与新辅助化疗反应之间存在负相关(P＜0.05).(3)乳癌组织中Bcl-2与生存素蛋白表达之间存在显著正相关性(P＜0.05).结论 生存素的高表达预示乳癌细胞对化疗的相对不敏感;Bcl-2和生存素两种凋亡抑制蛋白的共同表达可能在乳癌中起协同作用.     

白藜芦醇诱导人成骨肉瘤细胞凋亡及其机制

目的 探讨白藜芦醇(resveratrol)诱导人成骨肉瘤细胞株MG63的凋亡作用及其分子机制.方法 应用不同浓度的白藜芦醇作用于MG63细胞,利用透射电镜观察细胞形态学变化;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测药物对细胞的增殖抑制率;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡、细胞周期分布;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测P21cip1/WAF1 mRNA、Survivin mRNA的表达.结果 白藜芦醇能明显抑制MG63细胞的增殖,并呈剂量和时间依赖性.经白藜芦醇处理MG 63细胞后,透射电镜下可见到凋亡细胞,FCM分析发现,10、20 μg/ml的白藜芦醇处理细胞72 h后,凋亡率分别为(11.9±0.6)%、(19.7%±0.9)%(P＜0.01),处理后的细胞G0/G1期比例增高,S期、G2/M期细胞比例减少;RT-PCR检测到P21cip1/WAF1表达升高,Survivin表达降低(P＜0.01).结论 白藜芦醇能明显抑制MG63细胞的增殖,诱导其凋亡,其机制可能与促进P21cip1/WAF1表达、抑制Survivin的表达有关.     

Survivin和P53在大肠腺癌中的表达及其临床意义

目的研究p53、Survivin在大肠腺癌中的表达以及二者之间的关系,并探讨p53和Survivin在大肠腺癌组织中的表达及与大肠腺癌发生、发展及预后的关系。方法选用大肠腺癌组织标本60例和癌旁正常黏膜组织40例,应用免疫组织化学SP法分别检测其survivin和p53的表达,分析二者在大肠腺癌中的表达及与大肠腺癌临床病理参数之间的关系。结果p53和Survivin在大肠腺癌组织中的阳性表达显著高于癌旁组织（P〈0.001）,且p53表达阳性大肠腺癌组织中survivin表达明显高于阴性组（P〈0.001）,其表达与年龄、性别、大体病理类型、浸润深度、分化程度、Dukes分期无显著性相关（P〉0.05）。结论p53的突变和Survivin过度表达在大肠腺癌的发生发展过程中起重要作用,且survivin表达与p53表达密切相关,可能作为大肠腺癌发生、发展及预后的肿瘤标志。     

氟伐他汀对溶血性磷脂酰胆碱致动脉平滑肌细胞增殖和凋亡相关因子表达的影响

目的：观察氟伐他汀对溶血性磷脂酰胆碱（LPC）诱导人脐动脉平滑肌细胞（HUASMC）增殖和凋亡作用的影响,探讨他汀类药物抗动脉粥样硬化的机制。方法：采用体外培养的HUASMC,待其生长到融合状态时用不同浓度（10-7～10-5mol/L）氟伐他汀和LPC（1、2.5、5mg/L）干预后用MTT法检测细胞增殖,Hoechst-33258染色法观察细胞凋亡,免疫组化染色方法和RT-PCR检测血管平滑肌凋亡相关因子Survivin、Fas的表达。结果：（1）MTT结果反映LPC作用24hHUASMC数量明显增多,增殖指数增大,氟伐他汀能抑制LPC促增殖的作用,使OD值降低,细胞数量明显减少;（2）免疫组化和RT-PCR结果显示：LPC对照组（5mg/L）和氟伐他汀处理组在作用早期（6～12h）Survivin因子表达明显,胞浆内可见大量棕黄色颗粒,随时间延长Survivin因子表达逐渐下降,72h时Survivin因子表达明显减弱,与LPC对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;而LPC对照组和氟伐他汀处理组在早期（6～24h）Fas因子表达不明显,晚期（48～72h）可检测到Fas因子大量表达,胞浆内可见棕黄色颗粒,晚期处理组与LPC对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：氟伐他汀抑制LPC对HUASMC的促增殖作用并诱导细胞发生凋亡,其凋亡作用主要与抑制Survivin因子和促进Fas因子表达有关。