锌指转录因子Snail 1在糖尿病大鼠肾组织中的表达

目的： 观察锌指转录因子Snail 1在糖尿病大鼠肾组织中的表达并探讨其与糖尿病肾病（DN）发生、发展的关系。方法: 链脲佐菌素（STZ）诱发大鼠糖尿病（DM），分为2、4、8、12、16、20、24周以及16周A、20周A和24周A组，其中A组动物从第13周起用胰岛素控制血糖至正常水平，每个时点均设鼠龄匹配的正常对照组。测定各组血糖、24 h尿蛋白、血肌酐（Scr）、肾脏指数。PAS染色光镜观察肾脏病理改变。免疫组化、RT-PCR方法检测肾皮质Snail 1和纤连蛋白（FN）的蛋白及mRNA水平，Western blotting检测Snail 1蛋白表达。结果: DM各组大鼠的血糖、24 h尿蛋白、血肌酐、肾脏指数明显高于正常对照组（P<0.05,P<0.01），A组上述指标均明显低于DM组（P<0.05,P<0.01）。Snail 1免疫组化阳性染色见于各组DM大鼠肾小管，正常对照组未见阳性表达，A组见弱阳性表达，并随治疗时间延长而减少。DM组肾皮质Snail 1、FN蛋白和mRNA的表达水平高于正常对照组（P<0.01），而A组显著低于DM组（P<0.01）。Snail 1与FN mRNA的表达水平呈显著正相关（P<0.01），Snail 1蛋白表达水平与血糖、尿蛋白、血肌酐、肾脏指数亦呈正相关（ P<0.01）。结论: Snail 1基因和蛋白在DM大鼠肾组织过度表达，提示Snail 1可能参与了DN的发生、发展机制。     

Snail在卵巢癌细胞侵袭转移潜能方面研究

目的研究Snail与卵巢癌侵袭转移问的关系,并探讨其分子机制。方法分别构建正义全长Snail真核表达载体和小分子干扰RNA,分别转染卵巢癌细胞系A2780、C13＊。采用Western印迹方法分析相关蛋白表达,Transwell试验检测细胞侵袭转移能力。结果①成功构建Snail正义全长真核表达载体,并合成Snail小分子RNA干扰片段;②在转染PEGFPCI／Snail的卵巢癌细胞株A2780、C13＊中E-eadhefin表达明显下调,Snail和Vimentin则表达上调;而在转染Snail／SiRNA的卵巢癌细胞株A2780、C13‘中E—cadherin表达明显上调,Snail和Vimentin则表达下调;③Snail过表达可显著促进卵巢癌细胞株A2780、C13＊的侵袭转移潜能;封闭Snail表达水平可一定水平抑制卵巢癌细胞株A2780、C13＊的侵袭转移潜能。结论snail可通过促进卵巢癌上皮细胞间质化转变（epithelial—mesenchymaltransition,EMT）而提高其侵袭转移能力;封闭Snail表达可一定程度逆转卵巢癌上皮细胞间质化转变（EMT）而抑制其侵袭转移能力。     

ROR1对人肺癌A549细胞上皮-间质转化的影响

目的 探讨受体酪氨酸激酶样孤儿受体-1（receptor tyrosine kinase-like orphan receptor,ROR1）诱导人肺癌A549细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）的作用及可能机制。方法 构建ROR1慢病毒表达载体,感染A549细胞筛选稳定过表达ROR1的A549细胞,采用划痕实验、Transwell实验检测A549细胞的侵袭和迁移能力; real-time PCR、Western blot分别检测ROR1、EMT相关标志物的表达。结果 过表达ROR1能够促进A549细胞向间质样细胞表型转化,Western blot结果显示Vimentin、N-cadherin表达上调, E-cadherin表达下调;划痕实验、Transwell结果显示细胞侵袭迁移能力显著增强（P=0.0023）;Western blot结果显示过表达ROR1能够上调EMT转录因子Snail的表达,干扰Snail能够逆转ROR1诱导的EMT,即下调Vimentin、N-cadherin表达,上调E-cadherin表达;划痕实验、Transwell结果显示干扰Snail显著降低细胞侵袭迁移能力（P=0.013）;进一步研究发现ROR1通过激活AKT信号而促进Snail的表达。结论 ROR1能够促进人肺癌A549细胞EMT转化,其机制可能与ROR1调控AKT/Snail信号有关。     

上皮性卵巢癌中PARP-1的表达及其与EMT的关系

 目的: 探讨上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)中聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1[poly(ADP-ribose) polymerase-1,PARP-1]的表达及其与上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系。方法: 免疫组化、实时荧光定量PCR法检测EOC和良性卵巢肿瘤组织中PARP-1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和转录调控因子Snail的表达;Western blotting法检测高效PARP-1抑制剂PJ34处理SKOV3细胞后PARP-1、E-cadherin、vimentin和Snail蛋白的表达。结果: PARP-1、vimentin和Snail在EOC中阳性表达率高于良性卵巢肿瘤组织,而E-cadherin则相反,差异均有统计学显著性(P<0.05)。PARP-1、E-cadherin、vimentin和Snail与EOC的病理分级、临床分期和有无淋巴结转移有关(P<0.05),与年龄和病理类型无关。E-cadherin表达与PARP-1表达呈负相关(P<0.05),vimentin、Snail表达与PARP-1表达呈正相关(P<0.05)。EOC中PARP-1、vimentin和Snail mRNA的相对表达量高于良性卵巢肿瘤组织,E-cadherin mRNA的相对表达量低于良性卵巢肿瘤组织,差异均具有统计学显著性(P<0.05)。PJ34处理SKOV3细胞后,PARP-1、vimentin和Snail的蛋白水平明显下降,E-cadherin的蛋白水平显著提高,差异有统计学显著性(P<0.05)。结论: PARP-1通过调控E-cadherin、vimentin和Snail的表达促进EOC上皮间质转化。PARP-1及其参与的上皮-间质转化在EOC进展中发挥重要作用。