Rho 激酶抑制剂法舒地尔作用BTBD7-ROCK2 信号通路抑制肝细胞癌侵袭运动

目的：观察Rho激酶抑制剂法舒地尔(Fasudil)对人高侵袭潜能HCC细胞株3(human high metastatic liver cancer cells 3,HCCLM3)侵袭转移的影响,并且探讨其作用的机制。方法：应用100 μmol/L Fasudil作用于HCCLM3细胞,采 用肌动蛋白微丝荧光染色和侵袭小室实验观察HCCLM3细胞的运动侵袭能力。HCCLM3细胞经过处理后分为阴性对 照组、Fasudil作用组、BTBD7干扰组,通过Western印迹检测BTB/POZ结构域蛋白7(BR-C, ttk and bab/pox virus domain containing 7,BTBD7)、Ras同系物家族成员C(ras homolog family member C,RhoC)、Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶2(Rhoassociated, coiled-coil containing protein kinase 2,ROCK2)、MMP2和MMP9蛋白表达水平,酶谱分析法检测MMP2和 MMP9活性水平。BTBD7干扰组作为阳性对照。结果：Fasudil处理后HCCLM3侵袭运动能力下降,BTBD7,RhoC, ROCK2蛋白表达下调,MMP2和MMP9活性降低,与阴性对照组比较差异有统计学意义(均P<0.01)。结论：Fasudil具 有干预BTBD7-ROCK2信号通路、抑制HCC侵袭转移的重要作用。     

体内蛋白转导的研究进展

简要综述了几种能够携带药物跨越血脑屏障和细胞生物膜屏障的蛋白结构域的研究进展。     

在体组织微循环的无标记光学微血管造影

很多生物组织的病理及血管形态与组织微循环的改变密切相关。光学相干断层成像（OCT）是一种能以微米分辨率无创获取生物结构三维图像的成像技术。光学微血管造影（OMAG）则是XqOCT数据进行处理,从而实现对生物组织血管形态的三维可视化方法。OMAG具有很高的空间分辨率,能观察到单根毛细血管,并且不需使用造影剂,其图像衬比度是基于血管内运动的血细胞后向散射产生的内源光信号。本文简回顾了OMAG技术的理论,并介绍了该技术以毛细血管分辨率在活体组织如脑、皮肤、和视网膜内的动态血流灌注成像中的应用。     

黏着斑激酶、磷酸酶和张力蛋白同源缺失基因在脑胶质瘤中的表达及相关性研究

目的：明确黏着斑激酶（FAK）和第十号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失基因（PTEN）在脑胶质瘤组织中的表达变化,以及与肿瘤的发生、侵袭性生长和临床病理学特征的关系.方法：应用EliVision免疫组织化学方法检测FAK、PTEN在6例正常脑组织及54例各级脑胶质瘤中的表达情况.结果：FAK在脑胶质瘤中的表达总阳性率为66.67%,其中Ⅰ～Ⅱ级为35.00%,Ⅲ级为81.25%,Ⅳ级为88.89%,Ⅰ～Ⅱ级阳性率均低于Ⅲ级和Ⅳ级（P〈0.01）,而Ⅲ级和Ⅳ级差异无统计学意义（P〉0.05）.PTEN在脑胶质瘤中总阳性率46.30%,其中Ⅰ～Ⅱ级为75.00%,Ⅲ级为 31.25%,Ⅳ级为27.78%.Ⅰ～Ⅱ级阳性率均高于Ⅲ级和Ⅳ级（P〈0.01）,而Ⅲ级和Ⅳ级差异无统计学意义（P〉0.05）.PTEN与FAK在脑胶质瘤中的表达呈负相关关系（P〈0.01）.结论：FAK的阳性率随着脑胶质瘤病理级别的增加而增加,而PTEN的阳性率随着脑胶质瘤病理级别的增加而降低.同时分析二者在肿瘤细胞中的表达,有助于判断脑胶质瘤的病理学分级、预后,以及进一步指导临床治疗.     

非小细胞肺癌endocan?FLK-1的表达与血管生成相关性研究

目的:研究内皮细胞特异分子-1(endothelial cell specific-1,endocan)、血管内皮细胞生长因子受体(KDR/FLK-1)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其临床意义.同时探讨endocan、FLK-1与非小细胞肺癌血管生成的相关性.方法:应用免疫荧光技术检测60例手术切除的肺癌组织、21例癌旁肺组织(距癌组织5 cm以上)中的endocan表达水平;免疫组化SP法检测FLK-1表达,并计数微血管密度(MVD).结果:endocan、FLK-1的表达在NSCLC组织中明显高于癌旁组织(P均<0.05);endocan、FLK-1的表达与NSCLC的淋巴结转移、TNM分期正相关(P均<0.05),而与NSCLC的组织学分类无关(P均>0.05);在NSCLC中MVD、endocan、FLK-1阳性表达组明显高于二者阴性表达组(P均<0.05);endocan、FLK-1在NSCLC中的表达呈正相关(r=0.888 9,P<0.05).结论:endocan、FLK-1在NSCLC组织的血管发生、进展等病理过程有重要作用.     

改进的亚硫酸氢钠测序法检测HepG2 RASSF1A基因CpG岛甲基化状态

目的 改进亚硫酸氢钠测序法，并检验改进后方法在甲基化检测中的可行性。方法 提取人肝癌细胞株HepG2基因组DNA，亚硫酸氢钠化学修饰，针对修饰后Ras相关家族1A基因（RASSF1A）启动子序列设计特异引物并结合沉降PCR扩增，T-A载体克隆、测序。结果 HepG2细胞RASSF1A基因启动子CpG岛的16个CpG位点均被甲基化。结论 改进后亚硫酸氢钠测序法能明显减少非特异性扩增，提高PCR效率，更适于基因甲基化状态的检测。     

重症监护病房鲍曼不动杆菌的耐药性及同源性

目的检测分离自重症监护病房(ICU)的鲍曼不动杆菌的耐药性及其间的同源性。方法20株鲍曼不动杆菌分离自2005年5~8月我院ICU病人的标本,物体表面,肥皂盒,呼吸机管道和穿刺导管以及医务人员的手。采用纸片扩散法及E-test法进行药敏试验及MIC值测定,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对20株鲍曼不动杆菌进行分型。结果15株对包括碳青霉烯类在内的多种抗生素耐药,2株仅对碳青霉烯类等少数抗生素敏感,3株对大多数抗生素敏感。14株有高度同源性,3、14号株同源,12、19号株同源。结论分离自ICU的鲍曼不动杆菌耐药率高。大多数菌株有高度同源性,1号株可能是交叉感染的源头。     

柯萨奇-腺病毒受体不同胞内功能域缺失突变载体的构建与表达

背景与目的：柯萨奇-腺病毒受体（Coxsackie and adenovirus receptor,CAR）是具有复杂生物学功能的黏附分子,已被证实与多种肿瘤的发生和转移有关,但具体作用机制还不清楚。本研究以CAR蛋白结构的功能解析作为切入点,构建不同CAR胞内域缺失突变的表达载体。方法：利用定点缺失突变策略构建了CAR胞内PKC、CK2、TYR磷酸化位点的缺失突变体及胞内域完全缺失的突变体pTOPOTailless。利用三步PCR法扩增获得CAR胞内段不同突变体的基因片段后,将其克隆入真核表达载体 pcDNA3.1/V5/His,通过双酶切及测序进行鉴定后,采用脂质体法分别转染至低表达CAR的人卵巢癌细胞系SKOV3细胞中,并用Werstern blot检测细胞转染后CAR的表达水平。结果: CAR胞内段不同突变载体成功构建。各突变体转染SKOV3细胞后,其蛋白表达水平均显著增加。结论: 成功构建不同CAR胞内功能域缺失突变表达载体,并在卵巢癌细胞SKOV3获得了满意的表达,为后续研究CAR及其胞内不同功能域在卵巢癌中的作用机制提供了研究基础。     

蝙蝠SARS样冠状病毒S蛋白受体结合域在昆虫细胞中的表达和纯化

目的：在昆虫细胞表达系统中表达蝙蝠SARS样冠状病毒Spike蛋白的受体结合域,并探讨其表达动力学和纯化条件。方法：以PCR扩增蝙蝠SARS样冠状病毒Spike基因的受体结合域片段,产物连接到pMD-T载体,再亚克隆至供体质粒pFAST—HTB,经序列测定确认基因正确克隆,进一步将其转座入Bacmid中,在昆虫细胞S西中进行表达,采用SDS—PAGE和Westernblotting对表达产物进行分析,并通过镍离子螯合树脂纯化重组蛋白。结果：在昆虫细胞表达系统中表达出蝙蝠SARS样冠状病毒Spike蛋白的受体结合域片段,当感染复数（multiplicityofinfectiin,MOI）为2时,重组病毒感染细胞56h后,重组蛋白的表达量达到峰值。结论：蝙蝠SARS样冠状病毒Spike蛋白的受体结合域片段在昆虫细胞表达系统中得到了有效表达,并可通过镍离子螯合树脂纯化重组蛋白。     

肺炎链球菌dnaJ基因缺陷菌株的构建及毒力变化的初步研究

目的 构建肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)dnaJ基因缺陷菌株,并对其毒力作初步研究.方法采用长臂同源多聚酶链式反应( long flanking homology polymerase chain reaction,LFH-PCR)技术将dnaJ基因替换为红霉素耐药基因(erm...