HPLC法同时测定人参及其制剂中16种人参皂苷

目的 建立同时测定人参及其制剂中16种人参皂苷的HPLC方法。方法 采用C₁₈（150 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱;流动相为乙腈和水,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,检测波长203 nm,柱温35℃。结果 16种人参皂苷Rg₁、Re、Rf、Rb₁、Rg₂、Rc、Rb₂、Rb₃、F₁、Rd、F₂、Rg₃、Rh₂及原人参三醇、compound K、原人参二醇均得到良好分离,线性关系良好（r≥0.999 0）。加样回收率均在95%～102%,RSD<2%。结论 该方法快捷简便、稳定可靠,可应用于人参及其制剂的质量控制。     

基于SNP双峰法的人参花 西洋参花 三七花及其混合物的快速鉴定

目的:建立人参花、西洋参花、三七花及两两之间混合物的快速鉴定方法。方法:收集市售人参花、西洋参花和三七花共计22份,获取样品内转录间隔区2(ITS2)序列。通过数据比对发现,在19~47 bp存在这3种花的单核苷酸多态性(SNP)位点,据此建立混合粉末的双峰法检测方法,判断混合物的物种组成。结果:市售22份商品的DNA条形码序列经BLAST鉴定均为正品,但经SNP位点分析发现,有2份西洋参花样品(S1和S7)SNP位点处出现双峰[胸腺嘧啶(T)/胞嘧啶(C)]、(C/T),判断掺杂有人参花。结论:SNP双峰法可以作为BLAST分析的补充手段,应用于混合物的鉴定,为花茶类产品的市场监管提供参考。     

三七传统产区和新产区植株农艺性状比较及相互关系研究

目的：对三七传统产区和新产区的产地环境、植株农艺性状及其药材产量组成进行分析评价,为三七引种栽培和生产区划提供科学依据。方法：在采收期对文山、砚山、马关、靖西等三七传统产地和昆明、曲靖、红河、玉溪等三七新产地的商品三七进行调查取样,对产地经纬度、海拔、土壤类型、地貌以及三七植株叶、茎、根部农艺性状指标进行测量和统计分析。结果：商品三七种植由文山等传统产地大规模向红河、昆明、曲靖等新产区扩展。三七新产区种植海拔较传统产区有大幅提高,在1 800~2 130 m,种植地块选择在中低山斜坡和缓丘的红壤地。三七新产区植株株高、茎粗、地上和地下生物产量等农艺性状指标均较传统产区有不同程度提高,其中根条重、块根重、主根长等农艺指标增加幅度均超过20%。不同产区间比较,红河石屏牛街、昆明石林圭山、红河建水官厅等地所产三七植株高大粗壮、块根和剪口大、支根发达;昆明官渡小哨、广西靖西禄峒、文山砚山江那等地的植株瘦小、块根和剪口小。聚类分析表明,新产区和传统产区交叉聚类,三七产地可分为3大组,其中红河石屏牛街、红河建水官厅、昆明石林圭山3个新产区及传统产区文山砚山干河为三七高产区域。相关性分析表明,三七块根、剪口的大小和质量,同植株地上部分的株高、茎粗、叶片大小、叶重和茎重显著正相关。回归分析表明茎粗、叶片宽、叶片长/宽、叶干重等农艺性状是影响块根干重的主要因子,而株高、叶柄长、叶片长、叶片宽等农艺性状是影响剪口干重的主要因子。结论：三七传统产区的西部和北部,海拔为1 800~2 130 m的中低山斜坡及缓丘红壤地适合种植三七,其中红河石屏牛街、红河建水官厅、昆明石林圭山可作为商品三七的重点引种发展区域。     

冰片配伍黄芪甲苷与三七总皂苷对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障转运蛋白的影响

目的从血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)转运蛋白角度探讨冰片配伍黄芪甲苷(astragalosides IV,AST IV)和三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)在脑缺血再灌注状态下促进药物成分入脑的作用。方法采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,ig给予冰片、AST IV、PNS及其配伍药物,2,3,5-氯化三苯四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色法测定脑组织损伤,Western blotting法检测脑组织外排蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance protein-1,MRP-1)、MRP-2、MRP-4、MRP-5及摄取蛋白有机阳离子转运体3(organic cation transporter3,OCT3)、有机阴离子转运多肽-2(organicaniontransportingpolypeptides-2,OATP-2)蛋白的表达,real-timePCR法检测脑组织多药耐药(multidrug resistance,mdr)基因mdr1a、mdr1b和mrp-1、mrp-2、mrp-4、mrp-5 mRNA表达。结果 TTC染色结果显示,脑缺血再灌注后,大鼠脑组织出现明显梗死灶。各药物能显著减少脑梗死体积,ASTIV+PNS的效应强于AST IV与PNS单用,冰片+AST IV+PNS的效应强于各药物单用及AST IV+PNS。外排蛋白和基因检测显示,脑缺血再灌注后,大鼠脑组织P-gp、MRP-1、MRP-2、MRP-4、MRP-5蛋白表达均显著增多。与模型组比较,冰片能显著下调大鼠脑组织P-gp、MRP-2、MRP-4蛋白表达水平,PNS能显著下调MRP-4、MRP-5蛋白表达水平,AST IV、AST IV+PNS与冰片+AST IV+PNS能显著下调P-gp、MRP-2、MRP-4、MRP-5蛋白表达水平,且冰片+AST IV+PNS的效应显著强于各药物单用及AST IV+PNS,AST IV+PNS的效应显著强于AST IV或PNS单用。基因表达结果与蛋白表达结果类似。摄取蛋白检测结果显示,与对照组比较,脑缺血再灌注后大鼠脑组织OCT-3蛋白表达在模型组及各给药组变化均不明显,而模型组OATP-2蛋白表达水平显著降低。PNS、AST IV+PNS及冰片+AST IV+PNS能显著上调OATP-2蛋白表达水平,且AST IV+PNS的效应显著强于AST IV、PNS单用,冰片+ASTIV+PNS的效应显著强于各药物单用及ASTIV+PNS。结论脑缺血再灌注后,脑组织损伤,BBB的主要外排蛋白和基因表达均显著增强,而摄取蛋白OATP-2表达显著降低。冰片配伍AST IV及PNS后,能增强抗缺血性脑损伤的作用,其作用可能与下调BBB中外排蛋白P-gp、MRP-2、MRP-4、MRP-5和相应基因表达,同时上调摄取蛋白OATP-2表达,促使脑组织中冰片、AST IV及PNS有效成分的吸收与富集而发挥药理作用有关。     

Flower extract of Panax notoginseng attenuates lipopolysaccharide-induced inflammatory response via blocking of NF-κB signaling pathway in murine macrophages

Aim of the study

The root of Panax notoginseng (PN) is commonly used to treat chronic liver disease with its therapeutic abilities to stop haemorrhage in the circulation, while the PN flower (PN-F) is largely unknown in the biological activities on inflammation and mechanisms of its actions. In this study, the pharmacologic effects of PN-F methanol extract on inflammation were investigated to address potential therapeutic or toxic effects in LPS-stimulated mouse macrophage cells, RAW264.7 cells.

Materials and methods

Production of NO, PGE₂ and pro-inflammatory cytokines (TNF-α and IL-1β) in supernatant, the expression of iNOS, COX-2 and cytokines, the phosphorylation of MAPK moleduces (ERK1/2, JNK and p38 MAPK), and the activation of NF-κB in PN-F extract were assayed in LPS-stimulated RAW264.7 cells.

Results

PN-F extract significantly inhibited the productions of NO, PGE₂, TNF-α and IL-1β on the LPS-stimulated RAW264.7 cells. In addition, PN-F extract suppressed the mRNA and protein expressions of iNOS, COX-2, TNF-α and IL-1β in LPS-stimulated RAW264.7 cells. The molecular mechanism of PN-F extract-mediated attenuation in RAW264.7 cells has close a relationship to suppressing the phosphorylation of MAPK molecules such as ERK1/2, JNK and p38 MAPK, and the translocation of NF-κB p65 subunit into nuclear.

Conclusion

These results indicate that PN-F extract inhibits LPS-induced inflammatory response via the blocking of NF-κB signaling pathway in macrophages, and demonstrated that PN-F extract possesses anti-inflammatory properties in vitro.     

脑得生丸中总皂苷的提取工艺研究

目的：以三七总皂苷含量为指标确定脑得生丸的最佳提取工艺。方法：以三七总皂苷标准品为对照,用紫外分光光度法检测其含量,以溶剂量、乙醇浓度、提取时间、提取次数为影响因素,选用L9（3^4）正交表进行正交实验。结果：优选工艺为加10倍量浓度为70%的乙醇,回流提取2次,1h/次。结论：本提取工艺设计合理,能充分有效的提出脑得生丸中的有效成分。     

毛细管气相色谱法分析西洋参中有机氯农药残留量

目的：测定西洋参中有机氯农药六六六（BHC）,DDT、五氯硝基苯等9个组分残留,方法：采用毛细管气相色谱法,结果：40例不同产地西洋参分析结果,BHC残留符合我国对糖食规定标准（≤0．3μg/g),DDT各样品中残留高出我国规定标准（≤0．2μg/g)。结论：应对进口西洋参药材及制剂增加农药留量检测及规定限量标准。     

正交试验优选人参中人参皂苷Rg_1的酶解工艺研究

目的优化酶解法提取人参皂苷Rg1的工艺条件。方法采用高效液相色谱法为测定方法,以人参皂苷Rg1提取率为指标,通过正交设计试验进行优选。结果纤维素酶酶解为最优方法,且酶用量、酶解时间、酶解温度对人参皂苷Rg1提取率有显著性影响;提取人参皂苷Rg1的最佳工艺条件为:纤维素酶用量为1.4%,酶解60min,酶解温度为45℃。结论优化后的提取工艺简单、稳定、提取率高。     

超细三七粉质量标准研究

目的：建立超细三七粉饮片质量评价方法。方法：采用HPLC法测定超细三七粉中单体皂苷R1、Rg1、Rb1的含量结果：样品在线性范围内有良好的线性关系．三七皂苷R1的平均回收率为100．02％．RSD为2．20%；人参皂苷Rg1的平均回收率为99．25%．RSD)为2．39%；人参皂苷Rb1的平均回收率为98．49％．RSD为2．31％(n=5)结论：HPLC、梯度洗脱法能将多种皂苷很好地分离检测．提高了时效．减少了误差．结果表明该方法准确可靠．重现性好．结果稳定。     

灵发素对三七愈伤组织发生和增殖的影响

为探讨三七Panax notogingseng愈伤组织快速高效的诱导和增殖,以三七茎段为外植体,进行了5组培养基的对比研究:(1)MS 2,4-D 2 mg/L(CK);(2)MS 2,4-D 2 mg/L N6-BA 2 mg/L;(3)MS 2,4-D 2 mg/L KT 2 mg/L;(4)MS 2,4-D 2 mg/L ZT 2 mg/L;(5)MS 2,4-D 2mg/L LFS 2 mg/L.结果表明:1.在CK的基础上添加灵发素(LFS),可以促进茎段愈伤组织早发生1～2周,诱导率达81%,比CK高出30%以上,而N6BA、KT和ZT作用不明显.2.LFS能使愈伤组织的鲜重在40 d内增加360.2%,而KT、ZT和N6-BA仅增加13.4%～21.8%.以平均接种1 g愈伤组织计,40 d内含LFS的第(5)组收获干物质81.5 mg,另4组只收21.6～25.9 mg.3.LFS可以使愈伤组织继代保存3年以上未表现老化,一直保持增殖能力.