胚胎干细胞诱导的内皮细胞对自身向成骨细胞分化的影响

目的探讨由胚胎干细胞（embryonic stem cells,ESCs）诱导的内皮细胞（endothelial cells,Ec）与自体胚胎干细胞联合培养时对ESCs成骨作用的影响。方法提取小鼠的胚胎干细胞和胚胎成纤维细胞,诱导胚胎干细胞生成Ec,培养细胞分为四组。A组：胚胎干细胞诱导组;B组：胚胎干细胞诱导组;C组：胚胎干细胞诱导生成的内皮细胞（Ec）诱导组;D组：ESCs和诱导的EC联合培养诱导组。通过干细胞形态的观察、免疫荧光、细胞的增值、碱性磷酸酶以及骨钙素含量的测定从酶学、组织学及生化学等不同方面观测骨髓基质细胞对胚胎干细胞向成骨细胞诱导转化的影响。结果通过细胞免疫荧光染色证实C组培养诱导的细胞为EC。D组ESCs和诱导的Ec联合培养组MTT检测结果各组细胞生长差异没有显著意义（p〉0.05）,骨钙素和碱性磷酸酶测定D组有明显差异高于其他3组（p〈0.05）。结论以胚胎干细胞诱导生成的内皮细胞对胚胎干细胞的成骨有明显的促进作用。     

b-FGF、IGF-Ⅱ、TGF-β影响兔成骨细胞体外增殖的实验研究

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（b-FGF）、胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF-Ⅱ）和转化生长因子－β（TGF-β）单独及交互联合作用，对兔成骨细胞体外增殖的剂量效应及时间效应。方法：采用细胞培养技术及噻唑蓝比色法，观察3种生长因子对兔成骨细胞体外增殖的调节作用。结果：b-FGF和IGF-Ⅱ在0.1-10.0ng/ml浓度范围内与兔成骨细胞增殖呈剂量效应关系。TGF-β在低浓度（0.01ng/ml）时可促进兔成骨细胞的增殖，随着浓度的增加，促增殖作用明显减弱，5d后，生长因子促进兔成骨细胞体外增殖作用达到最大。3种生长因子联合应用效果叠加。结论：3种生长因子均能促进兔骨髓来源成骨细胞的体外增殖，其作用有剂量依赖性和时间依赖性。提示探索最佳生长因子组合可有效促进成骨细胞增殖。     

骨髓基质干细胞接种于纤维蛋白凝胶的体外培养

目的：研究经分离培养的免音舱基质子细胞(MSC)接种在可吸收性纤维蛋白凝胶上向成分细胞分化，表型维持的影响。方法：取兔骨髓基质子细胞于含100nl/L胎牛血清的DMEM培养液中培养，并向成管细胞诱导。将细胞与纤维蛋白凝胶复合，通过扫描电镜观察细胞附着情况，共聚焦显微镜观察I型胶原的分泌，组织化学染色检测碱性磷酸酶(ALP)阳性细胞，ALP含量测定。结果：骨髓基质子细胞在可吸收性纤维蛋白凝胶表面附着良好并继续增殖，可分泌I型胶原，这些细胞的ALP染色呈强阳性，细胞碱性磷酸酶含量增高。结论：具有良好的可塑性、低抗原性、好的降解吸收性的纤维蛋白凝胶具有促进骨髓基质细胞表达成管细胞表型、合成细胞外基质的功能，是良好的细胞载体。     

重组肝细胞生长因子质粒的构建及其在成骨细胞中的表达

目的 构建人肝细胞生长因子(hHGF)真核表达质粒,探讨重组质粒对体外培养胎兔成骨细胞增殖分化的影响,为转基因治疗骨科疾病提供实验基础.方法 RT-PCR扩增人肝脏中hHGF全长cDNA片段,克隆入pcDNA3.1( )真核表达载体中,用脂质体法将pcDNA3.1( )-hHGF质粒转染成骨细胞,通过G418筛选获得阳性克隆,用免疫荧光染色检测hHGF基因在成骨细胞内的表达;MTT法和FCM检测pcDNA3.1( )-hHGF转染后对细胞增殖和细胞周期的影响;采用RT-PCR和ELISA方法检测hHGF在成骨细胞中的表达.NPP法检测碱性磷酸酶合成情况.结果 成功构建hHGF真核表达质粒,免疫组化和RT-PCR检测显示转染成骨细胞后细胞内hHGF mRNA呈现高水平表达;MTT法和FCM检测显示重组质粒转染后能促进成骨细胞的增殖,S期细胞比例增多;ELISA法检测到hHGF在细胞中有分泌性表达.转染重组质粒的成骨细胞合成碱性磷酸酶能力显著提高.结论 成骨细胞经基因转染后可以表达hHGF,外源性hHGF基因能够刺激成骨细胞增殖、分化及成骨活性.     

缓释bFGF微球的制备及微球对成骨细胞的作用

目的 应用W/O/W复乳-干燥法制备碱性成纤维细胞生长因子-聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(bFGF-PLGA)微球,考察其对成骨细胞的作用.方法 应用正交设计试验进一步优化bFGF微球的制备工艺,采用优化处方制备bFGF-PLGA微球,并考察其外观形态和粒径分布,检测其载药量和包封率,研究其体外释药的性质.将bFGF和bFGF-PLGA微球加入成骨细胞培养液中,用MTT法、流式细胞仪观察细胞的增殖情况,并检测成骨细胞上清液中骨钙素(BGP)的含量.结果 所制微球表面光滑圆整,球体均匀度好,无黏连现象.微球粒径的98%分布在1.22～10.24 um之间,平均粒径为5.52um,径距1.43±0.18.载药量48×10-3%±1×10-3%,包封率为72.37%±1.16%.突释期内微球的体外释放度仅为19.26%,21 d后体外累积释放度高达85.46%,释出bFGF的平均浓度为72.47±6.26 ng·ml-1,微球的体外释药规律符合Higuichi方程(r=0.9978).培养1 d后,3组吸光度的差异均无显著性意义;4、6、8 d时,PLGA微球组明显优于其余两组.培养2 d后,bFGF组的G2/M S期百分数最高,4、8 d后,PLGA微球组G2/M s百分数最高.成骨细胞上清液中PLGA微球组的BGP含量最高,其次为bFGF组.结论 所制备的bFGF-PLGA微球表征良好,载药量和包封率高;微球通过较长时间地持续释放活性bFGF,可明显促进成骨细胞的增殖和分化.     

高糖对原代成骨细胞分化的影响

目的：观察高糖对原代成骨细胞分化和矿化功能的影响。方法：将原代成骨细胞按1×10^5接种于6孔板上。设置3组，即对照组（葡萄糖浓度为5．5mmol／L）、高糖组（葡萄糖浓度为22mmol／L）和甘露醇组（葡萄糖5．5mmol/L＋甘露醇16．5mmol／L）。于28d后检测其碱性磷酸酶（ALP）活性，运用钙沉积试剂盒检测钙沉积数值，并用实时荧光定量PCR检测I型胶原（Cog I）和骨钙素（OC）的基因表达，采用茜素红染色观察矿化结节形成情况。结果：高糖条件下，ALP活性和CogI表达增高，而OC表达及钙沉积均减少，矿化结节数量减少。结论：在高糖的影响下，成骨细胞停留于分化早期，不再进一步向晚期分化，矿化功能减退，而这一作用不依赖于渗透压。     

体外冲击波对骨膜组织骨不连及骨折延迟愈合的影响

目的：了解体外冲击波对骨膜组织代射的影响及其治疗骨不连、骨折延迟愈合的疗效。方法：采用体外冲击波作用于骨组织，通过动物组织体外培养３Ｈ－ＴｄＲ掺入放射自显影研究；体外冲击波治疗骨不连１９例，骨折延迟愈合２２例。结果：证明冲击后１、２周实验侧骨膜组织３Ｈ－ＴｄＲ标记率明显高于对照侧（Ｐ＜０．０５），表明实验侧骨膜成骨细胞有丝分裂明显加强，骨膜成骨作用增强。治疗后１２周，２２例骨折延迟愈合均愈合，冲击后１６周，１９例骨不连中，１６例愈合。结论：体外击波可促进骨膜成骨细胞有丝分裂活动、加强骨膜成骨作用，可治疗骨不连、骨折延迟愈合等疾病     

降钙素基因相关肽对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响

目的 探讨外源性降钙素基因相关肽（CGRP）对大鼠颅盖骨来源成骨细胞的影响，以进一步了解CGRP促进成骨的作用机制。方法 利用二次酶消化法培养的成骨细胞，加入含不同浓度CGRP的条件培养液，24小时后通过MTT比色，^3H-TdR掺入以及细胞内碱性磷酸酶（ALP）含量的测定来观察CGRP对成骨细胞增殖和分化的影响。结果 CGRP可以明显促进成骨细胞增殖，而且作用呈剂量依赖性。CGRP对细胞内ALP含量无明显影响。结论 CGRP能够直接作用于成骨细胞并通过促进其增殖而有利于骨形成。     

富含血小板血浆对牵引成骨过程中新骨生成的影响

目的　探讨富含血小板血浆 (PRP)对成骨细胞以及牵引成骨过程中新骨生成的作用。方法　通过体外成骨细胞的培养及牵引成骨动物模型的制备 ,采用MTT法检测成骨细胞的增殖情况 ,采用组织化学、四环素标记等方法观察骨组织新骨生成情况。结果　PRP可以促进体外培养成骨细胞的增殖 ,促进牵引成骨过程新骨的生成。结论　PRP可以加快牵引成骨过程的新骨生成 ,临床应用可能缩短牵引成骨的治疗过程。     

番茄红素对氧化应激后成骨细胞的影响

目的研究具有强抗氧化作用的番茄红素对氧化应激后成骨细胞的影响。方法制造氧化应激状态成骨细胞模型。将细胞随机分为4组:高、中、低浓度番茄红素组及对照组。然后用流式细胞术检测各组成骨细胞生长指数,用酶标仪检测各组成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。在各组细胞中另加入矿化结节诱导液,观察各组成骨细胞矿化能力。结果各实验组成骨细胞较对照组生长指数高,碱性磷酸酶表达增加,形成的矿化结节多。结论番茄红素可以增加氧化应激状态成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶的表达及矿化功能。