人牙周膜细胞在弹性牵张力作用下核心结合因子mRNA的表达

目的 探讨人牙周膜细胞在应力作用下的成骨特性及核心结合因子(corebinding factor a 1，cbfal)在正畸成骨和正畸牙齿移动中的作用机制。方法 体外原代培养新生SD大鼠颅骨成骨细胞，进行大鼠cbfal cDNA片段的克隆和序列测定，制备大鼠cbfal cDNA探针。人牙周膜细胞在弹性膜上体外培养，采用体外培养细胞加载系统加载弹性牵张力。用原位杂交方法检测cbfal mRNA的表达。结果 正常对照组不加力的人牙周膜细胞未检测到cbfal mRNA阳性表达，实验组加载弹性牵张力的人牙周膜细胞出现cbfal mRNA阳性表达。结论 弹性牵张力可以诱导人牙周膜细胞向成骨样细胞分化；cbfal作为转录因子是正畸成骨的调控途径之一。     

大鼠成骨细胞中蛋白激酶A的表达及信号作用

目的　探讨蛋白激酶A(cAMP -dependentproteinkinase ,PKA)在大鼠成骨细胞中的表达情况。方法　纯化培养大鼠成骨细胞后 ,以cAMP、PKI、rhBMP -2分别刺激细胞 3 0min ,设空白对照 ,通过免疫细胞化学及图象分析方法 ,观察细胞内PKA的活化表达情况。结果　各实验组均可见PKAα的活化表达 ,但是空白对照组表达弱(p <0 .0 5 ) ,PKI组最弱 (p <0 .0 1) ,cAMP组表达最强 (p <0 .0 1)。结论　在大鼠成骨细胞中存在功能状态的PKAα ,而且 ,rhBMP -2能激活PKAα。rhBMP -2信号途径与PKA信号途径之间存在交互作用     

静磁场对大鼠成骨细胞增殖分化功能的影响

目的研究静磁场刺激对成骨细胞的增殖和分化的影响,为临床选择合适的磁场参数,科学利用磁场疗法提供实验依据。方法体外培养Wistar大鼠颅骨成骨细胞,实验分为5组,分别置于0、40、62、83、108mT不同磁场强度的静磁场中作用24、48和72h,用噻唑兰(MTT)法检测成骨细胞的增殖情况;化学方法测定ALP酶的活性。结果随着细胞培养时间的增加,各组细胞出现不同程度的增殖和ALP活性增高,,以40mT和62mT组成骨细胞的增殖明显,与0mT组比较有显著性差异,P<0.05。结论一定强度的静磁场可以促进成骨细胞的增殖和分泌ALP的能力。     

犬骨髓基质干细胞诱导为成骨细胞的实验研究

目的：研究骨髓基质干细胞（Bone marrow stromal cells,BMSCs)在体外培养，诱导后的成骨活性，探讨BMSCs作为骨组织工程种子细胞的可能性和可行性。方法：抽取成年犬骨髓，用梯度离心法获取单核细胞，经条件培养液体外诱导培养后，进行组织化学、免疫组化、原位杂交检测，并在透射电镜下观察其成骨活性。结果：第1代细胞Alkaline phosphatase(AKP)染色、Core-binding factor alpha subunit 1(Osf2/Cbfal)、Osteopotin(OPN),I型胶原的免疫细胞化学检测和I型胶原的原位杂交结果开始呈现阳性，第3代细胞Bone Sailoplain(BSP),Osteocalcin(OCN)免疫细胞化学染色开始呈现阳性，透射电镜显示细胞外有胶原分泌和钙盐沉积。结论：BMSCs不仅能大量扩增，且在一定条件下可向成骨细胞分化，是骨组织工程理想的种子细胞。     

Differential responsiveness against mechanical stress between osteoblastic cells and periodontal ligament cells

Using the human osteosarcoma-derived osteoblastic cell line, HOS cells, and the human periodontal ligament-derived fibroblast-like cells (Periodontal ligament cells; PDL cells), we examined the responsiveness against mechanical stress (continuously applied compressive force) in HOS and PDL cellsin vitro. SDS-PAGE revealed that loading of mechanical stress (10 g/cm²) promoted intracellular protein production (approx. 30–35 kDa, 40kDa, 55kDa, 65–70kDa) in HOS cells, which are different sizes from those in PDL cells reported previously. Mechanical stress also enhanced heat shock protein (HSP) production in HOS cells and PDL cells: however, the responsiveness was different between HOS cells and PDL cells. In PDL cells, mechanical stress enhanced HSP 60 production more efficiently, in contrast that HSP 70 production was promoted more efficiently in HOS cells. These data suggest that differential responsiveness against mechanical stress between osteoblasts and PDL cells might have important role during orthodontic tooth movement.

     

成骨细胞凋亡与颅颌骨缝的生长改建

颅颌骨缝是颌面部的生长活跃区。骨缝的生长改建主要依赖于成骨细胞的增殖和分化。近年来,细胞凋亡的作用受到关注。细胞凋亡以与细胞有丝分裂相反的方式,清除受损伤的或衰老无用的细胞,保持细胞死亡和增殖的平衡。研究表明,在颅颌骨缝的形成和正常生长发育中,成骨细胞凋亡起着重要的调节作用。骨缝组织的改建离不开机械力刺激,应力不仅调控成骨细胞的增殖和分化,也影响成骨细胞的凋亡。本文主要对成骨细胞凋亡在颅颌骨缝改建中的作用及其相关基因调控机制进行综述。     

牛血浆纤维粘连蛋白对体外培养的大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的 :研究外源性牛血浆纤维粘连蛋白对体外培养的大鼠成骨细胞增殖分化的影响。方法 :采用体外培养技术原代培养大鼠成骨细胞 ,用AlamarBlue摄入法检测不同浓度的牛血浆纤维粘连蛋白对大鼠成骨细胞增殖的影响 ,ELISA方法测定碱性磷酸酶活性的改变。结果 :AlamarBlue摄入法结果显示牛血浆纤维粘连蛋白能够促进大鼠成骨细胞的增殖 ,当浓度为 40 μg/ml时 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,当浓度为 5 0μg/ml时作用差异极显著 (P <0 .0 1) ,ELISA方法结果显示牛血浆纤维粘连蛋白能够增加大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性 ,各组与对照组相比均有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,并有明显的剂量依赖性。结论 :一定浓度的牛血浆纤维粘连蛋白有促进大鼠成骨细胞增殖分化的作用     

牛血浆纤维粘连蛋白对体外培养的大鼠成骨细胞增殖的影响

目的研究外源性牛血浆纤维粘连蛋白对体外培养的大鼠成骨细胞增殖的影响。方法采用体外培养技术,原代培养大鼠成骨细胞,用AlamarBlueTM摄入法,检测不同浓度的牛血浆纤维粘连蛋白对大鼠成骨细胞增殖的影响。结果体外培养的成骨细胞呈梭形、三角形或多角形,多角形细胞有多个矢状突起;核卵圆形,常居一侧;胞质内碱性磷酸酶染色呈阳性反应,Ⅰ型胶原免疫组化染色呈阳性。牛血浆纤维粘连蛋白能够促进大鼠成骨细胞的增殖,当浓度为40μg/ml时,AlamarBlueTM还原率明显升高,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);当浓度为50μg/ml时,差异极显著(P<0.01)。结论一定浓度的牛血浆纤维粘连蛋白具有促进大鼠成骨细胞增殖的作用。     

雌激素对大鼠胚胎成骨细胞增殖及胶原合成的影响

目的 研究雌激素对大鼠胚胎成骨细胞增殖及I型胶原代谢的影响。方法 分离大鼠胚胎头盖骨成骨细胞，分别给予不同浓度雌激素培养；观察细胞增殖情况和ALP活性变化；苦味酸天狼星红及I型胶原免疫组织化学染色，从蛋白质水平观察成骨细胞中I型胶原的变化；地高辛标记的I型胶原基因探针进行原位杂交，从mBNA水平观察I型胶原的变化。结果 雌激素可降低大鼠胚胎成骨细胞增殖水平而使ALP活性以及I型胶原蛋白质和mRNA水平均升高。结论 雌激素可促进成骨细胞分化，而抑制增殖。     

The role of TGF-β1/Smad3 signaling pathway and oxidative stress in the inhibition of osteoblast mineralization by copper chloride

To explore the relationship of oxidative stress and TGF-β 1/Smad3 pathway in the inhibition of osteoblast mineralization by copper chloride (CuCl₂), the osteoblasts were treated with CuCl₂ (0, 50 μM, 100 μM, 150 μM CuCl₂ 5H₂O) for 24 h. We found that Cu impaired the osteoblast structure, inhibited the glutathione peroxidase (GSH-Px) and superoxide dismutase (SOD) activities, alkaline phosphatase (ALP) content, mRNA expression of collagen I (COL-I), osteocalcin (OCN), insulin-like growth factor I (IGF-I), bone morphogenetic protein-2 (BMP-2), transforming growth factor β1 (TGF-β1) and core-binding factor α1 (Cbfα1), promoted the reactive oxygen species (ROS) production, inactivated the TGF-β1/Smad3 pathway. It indicates that the inactivated TGF-β1/Smad3 pathway leads to osteoblast impairment by CuCl₂. It will contribute to clarify the influence of CuCl₂ on the osteoblast mineralization.