吡格列酮对缺血-再灌注损伤大鼠皮质神经元的保护作用

目的 探讨过氧化物酶增值物激活受体-γ(PPAR-γ)及其激活剂噻唑烷二酮类药物-吡格列酮(pioglitazone)对缺血.再灌注损伤大鼠皮质神经元肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素(IL-1β)表达的影响.方法 采用原代培养的皮质神经元,通过去除培养液中的糖和氧,模拟缺血缺氧,恢复糖氧供给模拟再灌注.再灌注时分别加用普通培养或含吡格列酮20 μmol/L培养基分别再培养6 h后,以上各组及正常细胞组均采用RT-PCR检测PPAR-γ mRNA表达,MTT法检测细胞活性,同时免疫蛋白印记法检测TNF-α,IL-β蛋白表达.统计学采用单因素方差分析进行统计处理.结果 与正常细胞对照组相比,缺血-再灌注组细胞存活率显著下降,且PPAR-γ mRNA表达明显增强,同时TNF-α及IL-β蛋白表达及分泌均显著上调,而应用pioglitazone治疗进一步增加了大鼠脑组织PPAR-γ的表达,并有效抑制TNF-α及IL-1β的上调表达及分泌,以上差异均具有统计学意义(P相似文献   

无镁损伤培养海马神经元后ERK1/2核转移的动态变化

目的 动态观察培养的大鼠海马神经元经无镁损伤后不同时间细胞外信号调节激酶磷酸化(p-ERK1/2)及其核转移,探讨体外培养海马神经元受致痫性损伤后ERK1/2信号通路的动态变化. 方法 选24 h内新生Wistar大鼠,取双侧海马神经元,用NB培养基加B-27培养9 d,换成无镁细胞外液模拟"癫痫微环境",使得神经元受到致痫性损伤.采用免疫荧光标记,在激光共聚焦显微镜下定位无镁损伤前后p-ERK1/2的表达部位;运用Western blot技术检测无镁损伤不同时间p-ERK1/2表达强度的变化. 结果 无镁损伤前,p-ERK1/2主要在神经元胞浆和轴浆内表达,胞核表达不明显,而在损伤之后,p-ERK1/2在神经元胞浆、轴浆以及胞核内都有表达,强度接近;在损伤后1 h,p-ERK1/2表达就增强,3 h达到高峰(p-ERK1:2.2 838±0.1 186;p-ERK2:4.1 273±0.0 927),与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05). 结论无镁细胞外液损伤可引起培养的神经元p-ERK1/2的大量表达,培养神经元致痫性损伤后ERK1/2信号通路的过度激活可能与其反复癫痫样放电有关.     

黄芪注射液抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元JNK3 mRNA的表达

目的： 观察黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡相关基因c-Jun氨基末端激酶3(JNK3)mRNA表达的影响。方法：取原代培养8 d的大鼠海马神经元,随机分为4组：正常对照组、黄芪注射液原液对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组和黄芪注射液组。其中缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪注射液组及黄芪注射液原液对照组进行缺糖缺氧0.5 h再复氧复糖,并于复氧复糖后0 h、0.5 h、2 h、6 h、24 h、72 h和120 h采用原位杂交和RT-PCR方法检测海马神经元JNK3 mRNA的表达。结果：正常对照组大鼠海马神经元核膜完整,细胞突起明显,有少许细胞胞浆黄染;缺氧缺糖/复氧复糖组大鼠海马神经元胞核体积增大、突起回缩,大量细胞胞浆黄染,胞核内有黄色颗粒,海马JNK3 mRNA阳性神经元数目在各个时点均比正常对照组明显增多（P<0.05）;黄芪注射液原液对照组神经元形态变化和海马JNK3 mRNA阳性神经元数目均与缺氧缺糖/复氧复糖组相一致（P>0.05）;黄芪注射液组大鼠海马神经元有轻微核皱缩,可见部分神经元胞浆黄染,除120 h时点之外,海马JNK mRNA阳性神经元数目在各个时点均比缺氧缺糖/复氧复糖组明显减少（P<0.05）。缺氧缺糖/复氧复糖组在0 h、0.5 h、2 h、6 h、24 h、72 h和120 h海马神经元JNK3 mRNA平均灰度值均较正常对照组明显增加（P<0.05）;与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,黄芪注射液原液对照组各时点JNK3 mRNA的平均灰度值无明显变化（P>0.05）,而黄芪注射液组除120 h之外在各个时点JNK3mRNA的平均灰度值均明显降低（P<0.05）。结论：黄芪注射液可抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡相关基因JNK3 mRNA表达,从而抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元的凋亡。     

δ-, but not μ- and κ-, opioid receptor activation protects neocortical neurons from glutamate-induced excitotoxic injury

Recent observations from our laboratory have led us to hypothesize that δ-opioid receptors may play a role in neuronal protection against hypoxic/ischemic or glutamate excitotocity. To test our hypothesis in this work, we used two independent methods, i.e., “same field quantification” of morphologic criteria and a biochemical assay of lactate dehydrogenase (LDH) release (an index of cellular injury). We used neuronal cultures from rat neocortex and studied whether (1) glutamate induces neuronal injury as a function of age and (2) activation of opioid receptors (δ, μ and κ subtypes) protects neurons from glutamate-induced injury. Our results show that glutamate induced neuronal injury and cell death and this was dependent on glutamate concentration, exposure period and days in culture. At 4 days, glutamate (up to 10 mM, 4 h-exposure) did not cause apparent injury. After 8–10 days in culture, neurons exposed to a much lower dose of glutamate (100 μM, 4 h) showed substantial neuronal injury as assessed by morphologic criteria (>65%, n=23, P<0.01) and LDH release (n=16, P<0.001). Activation of δ-opioid receptors with 10 μM DADLE reduced glutamate-induced injury by almost half as assessed by the same criteria (morphologic criteria, n=21, P<0.01; LDH release, n=16, P<0.01). Naltrindole (10 μM), a δ-opioid receptor antagonist, completely blocked the DADLE protective effect. Administration of μ- and κ-opioid receptor agonists (DAMGO and U50488H respectively, 5–10 μM) did not induce appreciable neuroprotection. Also, μ- or κ-opioid receptor antagonists had no appreciable effect on the glutamate-induced injury. This study demonstrates that activation of neuronal δ-opioid receptors, but not μ- and κ-opioid receptors, protect neocortical neurons from glutamate excitotoxicity.     

β淀粉样蛋白诱导脑内神经元凋亡及褪黑素的保护作用

目的　探讨凋亡机制在 β 淀粉样蛋白 (Aβ)脑内致阿尔茨海默病 (AD)作用中的意义及褪黑素 (MT)对Aβ脑内神经毒性的干预效果。方法　将Aβ1 4 0 微量注射至大鼠右侧海马CA1区 ,7d后 ,用尼氏染色检测神经元丢失 ,HE染色、TUNEL染色及透射电镜检测细胞凋亡 ;用免疫组化SABC法检测Bax/Bcl 2的表达。结果　Aβ组右侧海马CA1区发现大量凋亡细胞 ,而假手术对照组和生理盐水对照组未发现细胞凋亡 ;Aβ组Bax表达增强 ,而Bcl 2表达在上述三组间无明显差异 ;MT组海马CA1区神经元计数为 47.4± 5 .9,明显多于Aβ组 (2 9.4± 4.5 ) ,但少于生理盐水对照组 (79.8± 7.6 )和假手术对照组 (83.1± 8.5 ) ,MT组细胞凋亡 (8.4± 3.7)少于Aβ组 (18.9± 6 .1)。 结论　Aβ能诱导脑内神经元凋亡 ,并可能与促进Bax的表达有关 ;MT能明显减轻Aβ的脑内神经毒性 ,补充MT可能有助于AD的防治     

急性重复缺氧小鼠海马CA1区的超微结构观察

 目的 从亚细胞水平了解小鼠在不同次数急性重复缺氧时海马CA1区神经细胞、星形胶质细胞和毛细血管的变化规律.方法 将昆明小鼠随机分成1次、2次及4次急性重复缺氧实验组及对照组,存活7 d后麻醉,立即灌杀,取海马CA1区组织,常规电镜制片,透射电镜下观察.结果 与对照组相比,不同缺氧次数实验组均呈不同程度变化,主要表现为神经元胞核染色质有大、小不等团块凝集的凋亡倾向.星形胶质细胞出现微管、微丝明显减少甚至消失,严重者胞浆结构除线粒体外全无;胞核缩小,核染色质在核膜周围有明显团块凝集,呈"半月形",严重者胞核结构全无;凋亡、坏死;突起的出现微管、微丝模糊或消失,线粒体结构不清的退行性变.D 7 H4实验组上述表现明显.毛细血管无病理变化.结论 急性重复缺氧有累加损伤作用,海马CA1区星形胶质细胞是缺氧易损细胞.     

一氧化氮(NO)在脊髓缺血再灌注损伤中作用的实验研究

目的　研究一氧化氮 (NO)在脊髓缺血再灌注损伤中的作用。方法　夹闭大鼠腹主动脉制成缺血再灌注模型 ,随机分成L -NAME组和再灌注组 ,L -NAME组每日腹腔注射一氧化氮合酶(NOS)非特异性抑制剂L -硝基精氨酸甲酯 (L -NAME) 10mg/kg体重 ,两周时取大鼠脊髓做NOS免疫组织化学染色、组织学及超微病理观察。结果　脊髓缺血再灌注后前角运动神经元出现固有型一氧化氮合酶 (cNOS)阳性表达 ,同时伴随前角运动神经元损伤 ;应用L -NAME后可减少cNOS的异常表达 ,减轻前角运动神经元损伤。结论　局部组织中NO产生增多可能是脊髓再灌注损伤的机制之一。     

经鼻给予肝素结合表皮生长因子样生长因子对脑出血大鼠血肿周围组织巢蛋白和胱天蛋白酶-3表达的影响

目的：探讨经鼻腔给予肝素结合表皮生长因子样生长因子(heparin binding epidermal growth factor-like growth factor, HB-EGF)对脑出血大鼠血肿周围组织巢蛋白和胱天蛋白酶-3表达水平的影响。方法36只成年雄性 Sprague-Dawley 大鼠随机分为 HB-EGF 组、对照组和假手术组(各12只),然后进一步分为4 d、7 d和10 d亚组(每亚组各4只)。采用Ⅳ型胶原酶注射法制作脑出血模型。 HB-EGF组在模型制作后1~3 d经鼻腔给予 HB-EGF,对照组给予等体积生理盐水。在相应时间点进行Bederson评分和前肢放置实验后处死大鼠,采用免疫组化法检测血肿周围组织巢蛋白和胱天蛋白酶-3表达。结果假手术组无神经功能缺损,HB-EGF 组在4 d和7 d时 Bederson 评分(P 均<0．05)和前肢放置实验结果(P 均<0．01)均显著优于对照组,但10 d时不再有统计学差异。在4 d、7 d和10 d时,HB-EGF组血肿周围组织巢蛋白阳性细胞数量均显著多于对照组(P 均<0．05),而胱天蛋白酶-3阳性细胞数量均显著少于对照组(P 均<0．01)。结论经鼻腔给予 HB-EGF 可改善脑出血大鼠早期神经功能,上调血肿周围组织巢蛋白表达和下调胱天蛋白酶-3表达,提示经鼻腔给予 HB-EGF可促进血肿周围组织神经前体细胞增殖并减轻细胞凋亡。     

三叉颈核复合体的解剖学研究进展

目的 以解剖视角系统总结头部痛觉二级神经元研究进展,寻求神经外科介入头痛治疗的切入点。方法 以数十个与“头部痛觉二级神经元”相关联的关键词,无时间范围限制,多批次检索了PubMed、Web of Science、OVID系列医学数据库,特别是深圳市迈特思创科技有限公司外文医学信息资源检索平台(FMRS)及其原文传递系统,历经多次检索—阅读—再检索—再阅读过程,筛选出历年以不同名称表述的头部痛觉二级神经元相关研究,总结其解剖学、生理学、病理学、胚胎学以及临床研究成果,分析三叉颈核复合体(TCC)在生理、病理状态下发挥作用的规律。结果 TCC是各类头痛共同的二级神经元,其会聚传入、会聚活化、会聚敏化在头痛的发生、发展,特别是慢性化过程中发挥重要作用。结论 TCC可作为现阶段头痛对症治疗的靶点之一,其会聚神经作为手术入路具有较大的探索空间。     

黄芪注射液对降低围产期窒息仔鼠海马神经元氧化应激损伤的研究

目的探讨黄芪注射液对降低围产期窒息仔鼠神经元氧化应激损伤的影响。 方法将10周龄妊娠SD大鼠30只分为3组,每组10只,对照组：孕鼠饲养至19 d行剖宫取出仔鼠;窒息组：孕鼠饲养至19 d行子宫血管完全夹毕20 min后,建立窒息模型后,剖宫取出仔鼠;窒息＋黄芪组：孕鼠于孕19 d行子宫血管完全夹毕20 min后,宫腔内注入黄芪注射液(10 ml/kg),剖宫取出仔鼠,迅速建立自主呼吸。取新生仔鼠海马组织,体外培养海马神经元细胞,检测神经元细胞存活率、超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量。 结果窒息组、窒息＋黄芪组的神经元细胞存活率分别为(56.78±14.62)%和(65.96±17.46)%,低于对照组(99.15±15.63)%,窒息组细胞存活率低于窒息＋黄芪组,差异具有统计学意义(P<0.05)。窒息组、窒息＋黄芪组和对照组SOD活力分别为(15.13±1.84)U/mg,(17.16±1.49)U/mg和(21.75±1.28)U/mg,GSH含量分别为(59.68±22.16)mg/g,(198.72±27.34)mg/g和(321.56±31.74)mg/g,窒息组、窒息＋黄芪组SOD活力和GSH含量比对照组降低,窒息组SOD活力和GSH含量低于窒息＋黄芪组,差异具有统计学意义(P<0.05)。窒息组、窒息＋黄芪组和对照组MDA含量分别为(4.98±2.12)nmol/mg,(3.68±1.47)nmol/mg和(1.25±0.63)nmol/mg,窒息组、窒息＋黄芪组MDA含量比对照组升高,窒息组MDA含量高于窒息＋黄芪组,差异具有统计学意义(P<0.05)。 结论围产期窒息导致仔鼠海马神经元细胞存活率降低和氧化应激损伤,黄芪注射液可降低活性氧对神经细胞的损伤,提高神经元细胞存活率。