糖尿病肾病MKR小鼠蛋白尿与尿中nephrin、PCX含量相关性分析

目的 通过检测糖尿病肾病（DN）MKR小鼠足细胞结构蛋白nephrin 与足细胞标记蛋白（PCX）在肾组织中的表达量及尿中的含量,分析尿微量白蛋白(UmAlb)与尿中nephrin、PCX蛋白含量的相关性。方法 取30只8周龄MKR小鼠随机分为2组（空白组和DN组）,空白组以普通饲料喂养,将DN组小鼠单肾切除并加以高脂喂养2个月复制DN模型;另取15只同龄C57野生鼠为正常对照组,以普通饲料喂养。造模前1 d、喂养4周及8周后,采用电化学法检测各组小鼠空腹血糖(FBG);喂养8周后,取各组小鼠肾脏组织,用电镜观察肾组织足细胞形态结构;Western blot检测肾组织中nephrin、PCX蛋白表达含量;ELISA 法测定尿中UmAlb含量及nephrin、PCX蛋白表达含量。结果 电镜结果显示:喂养8周后,与C57组比较,DN组小鼠肾小球足细胞结构损伤明显,DN组FBG升高( P<0.01),且肾组织中nephrin、PCX蛋白表达下调,而尿中nephrin、PCX蛋白含量及UmAlb 含量均升高( P<0.01)。相关分析显示,尿UmAlb与尿中nephrin和PCX蛋白含量呈正相关（相关系数r=0.920,决定系数R 2=0.829, P<0.05)。结论 尿中nephrin、PCX蛋白含量与UmAlb含量呈正相关,足细胞结构蛋白丢失可能是导致糖尿病肾病蛋白尿的机制之一。     

白藜芦醇及SRT1720对2型糖尿病大鼠肾小球足细胞裂孔隔膜分子表达的影响

摘要：目的 研究白藜芦醇和SIRT1激活剂SRT1720对糖尿病大鼠肾功能以及足细胞损伤的干预作用,探讨SIRT1活化改善肾损害的作用和机制。方法 采用高脂饮食联合单侧肾切除和链脲佐菌素诱导方法建立2型糖尿病大鼠模型,用白藜芦醇和SRT1720等进行干预治疗。留取血清和肾脏,分析肾重及肾重/体重,检测空腹血糖、血肌酐、尿素氮等,采用免疫组化、逆转录-实时荧光定量PCR技术检测肾皮质中足细胞裂孔隔膜分子Nephrin和Podocin等蛋白原位表达和基因表达水平。结果 与正常组相比,模型组大鼠单侧肾重及肾重/体重比显著增高,空腹血糖、血肌酐和尿素氮均显著增高,肾皮质中Nephrin和Podocin蛋白表达和基因表达丰度显著降低。白藜芦醇和SRT1720治疗组各项检测指标均较模型组有所改善,白藜芦醇组肾重/体重指数、空腹血糖、Nephrin和Podocin表达等与模型组有统计学差异,SRT1720组空腹血糖、血肌酐、尿素氮、Nephrin和Podocin表达等与模型组均有统计学差异。结论 白藜芦醇、SRT1720 等SIRT1激活剂可显著改善糖尿病大鼠肾功能和足细胞损伤,在糖尿病肾病的防治方面具有重要价值和应用前途。 关键词：糖尿病肾病;白藜芦醇;SRT1720;Nephrin;Podocin     

五味子复方减轻阿霉素肾病小鼠蛋白尿的实验研究

[目的]观察五味子复方(SM)对阿霉素肾病(ADN)小鼠肾皮质WT1蛋白、Nephrin和Podocin mRNA的影响,探讨SM减轻蛋白尿的可能机制。[方法]雄性BALB/c小鼠27只随机分为对照组、ADN模型组和SM治疗组,单次尾静脉注射阿霉素法建立ADN模型,收集尿及肾组织,检测体质量、右肾质量、24 h尿白蛋白排泌率(UAER);光镜下观察肾组织形态改变;免疫荧光检测各组肾小球WT1;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组肾皮质Nephrin和Podocin mRNA。[结果]治疗组的右肾质量、UAER低于模型组(均P0.05);治疗组Nephrin mRNA和Podocin mRNA表达水平高于模型组(均P0.01);肾小球荧光染色示WT1在对照组正常,模型组呈节段性缺失,治疗组缺失较轻。[结论]SM可以通过上调WT1蛋白、Nephrin和podocin mRNA的表达,保护足细胞,减少ADN小鼠的蛋白尿。     

Molecular composition and function of the slit diaphragm: nephrin, the molecule responsible for proteinuria

Although the role of the glomerular basement membrane has been emphasized as the barrier for retaining plasma proteins, some recent studies have clearly shown that the slit diaphragm is the structure most likely to be the main barrier in the glomerular capillary wall. Nephrin, ZO-1, P-cadherin and FAT are reported to be components of the slit diaphragm. Of these molecules, the molecular natures of ZO-1 and nephrin are relatively well investigated. ZO-1 was originally identified as a component of the tight junction. Nephrin was identified as a gene product mutated in congenital nephrotic syndrome. ZO-1 is localized at the cytoplasmic surface just at the insertion point of the slit diaphragm, whereas nephrin is located at the outer leaflet of plasma membranes. The expression of nephrin is decreased in several kinds of proteinuric states, and anti-nephrin monoclonal antibody (mAb) 5-1-6 is capable of inducing massive proteinuria, which indicates that nephrin is a functional protein in the slit diaphragm. Nephrin is expected to be a target of therapy for proteinuria. A model of nephrin assembly that forms the structure of the slit diaphragm has been proposed. However, we observed that the slit diaphragm structure was maintained in mAb 5-1-6 nephropathy, although nephrin expression was dramatically decreased. These findings suggest that nephrin is not essential for maintaining the structural integrity of the slit diaphragm. Although it has been proposed that P-cadherin is a core protein in the slit diaphragm, this hypothesis is still controversial. To better understand the structure of the slit diaphragm, it is particularly important to identify other components that build up the structure of the slit diaphragm together with nephrin and ZO-1. Received: July 7, 2000 / Accepted: July 27, 2000     

厄贝沙坦对早期糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin表达的影响

目的： 观察nephrin在糖尿病肾病（DN）大鼠肾小球足细胞中的表达，探讨厄贝沙坦对DN肾脏保护作用的机制。方法： 应用链脲佐菌素建立大鼠DN模型，将DN模型大鼠随机分为2组：厄贝沙坦治疗组、模型对照组；另设正常对照组。各组分别干预8周后，观察大鼠体重、肾重、相对肾重、24 h尿蛋白定量、血糖、血清尿素氮、肌酐、总胆固醇、甘油三酯变化，利用光镜、电镜观察肾脏病理改变，应用免疫组化技术观察nephrin表达情况。结果： 应用厄贝沙坦干预后，DN大鼠24 h尿蛋白定量明显减少、肾功能改善、肾脏病理改变显著减轻、足细胞nephrin表达量明显减少。结论： 厄贝沙坦对DN肾脏的保护作用可能与其抑制足细胞nephrin表达有关。     

通络泄浊方对糖尿病肾病大鼠Nephrin和Podocin表达的影响

目的：观察通络泄浊方对糖尿病肾病（DN）大鼠肾组织Nephrin和PodocinmRNA的影响。方法：采用链脲佐菌素（STZ）法制作DN大鼠模型,随机分为正常组、模型组、通络泄浊方组（中药组）、氯沙坦组（西药组）和通络泄浊方＋氯沙坦组（中西药组）。采用荧光定量PCR法检测肾组织Nephrin和Podocin mRNA表达。结果：与模型组比较,3个治疗组Nephrin和Podocin mRNA表达明显升高（P〈0.01）,且中西药组Nephrin和Podocin mRNA水平高于中药组和西药组（P〈0.01）。结论：通络泄浊方通过促进DN大鼠肾组织Nephrin和Podocin mRNA表达而对肾脏起保护作用。     

复方积雪草防治局灶节段性肾小球硬化模型大鼠足细胞损伤的实验研究

目的:探讨复方积雪草对局灶节段性肾小球硬化(focal segmental glomerulo sclerosis,FSGS)模型大鼠足细胞裂孔膜蛋白nephrin、podocin表达的影响,阐述其延缓肾小球硬化的部分分子生物学机制。方法:采用左肾摘除+阿霉素重复静脉注射方法建立FSGS模型。复方组分别予高中低剂量复方积雪草膏剂灌胃;对照组予苯那普利混悬液;于第8周末留取24h尿蛋白定量,检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)和血浆蛋白(Alb);留取右肾标本,光镜标本行HE染色;用免疫组化法观察裂孔膜蛋白nephrin和podocin表达;RT-PCR法检测肾组织nephrin和podocinmRNA表达。结果:各复方组24h尿蛋白定量及血Scr、BUN、TC、TG较模型组有显著改善,且与西药组疗效相似。RT-PCR及免疫组化结果显示模型组足细胞裂孔膜蛋白表达较正常组明显降低(P<0.05)。而各治疗组表达较模型组均有明显增加(P<0.05),且与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:复方积雪草能通过上调模型大鼠肾小球内nephrin和podocin分子表达,减轻足细胞损伤,延缓肾小球硬化。     

替米沙坦对糖尿病肾病患者尿nephrin排泄的影响

目的 探讨糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）患者尿nephrin排泄的变化及替米沙坦干预对其的影响.方法 62例DN患者经2周洗脱期后给予替米沙坦40 mg/d＆#215;4周,继以替米沙坦80 mg/d＆#215;4周.另有20例健康志愿者作为正常对照组.采用ELISA法检测尿nephrin蛋白.结果 正常对照组尿液中未检测到nephrin,DN患者组尿液中可检测到nephrn排泄,随DN病情的进展,大量白蛋白尿组比微量白蛋白尿组尿nephrin排泄增加.经替米沙坦治疗后,微量白蛋白尿组患者尿nephrin下降较为明显,大量自蛋白尿组患者治疗前后尿nePhrin 变化无统计学意义.结论 尿nephrin检测可预测DN肾病病情进展,替米沙坦可减少尿nephrin排泄,具有肾脏保护作用.     

血管生成素样蛋白2对糖尿病肾病足细胞损伤的影响及雷公藤甲素干预研究

目的：通过观察血管生成素样蛋白2（ANGPTL2）在2型糖尿病大鼠肾脏中的表达,探讨其对足细胞损伤的影响及雷公藤甲素的干预机制。方法50只SD雄性大鼠随机分为正常对照组（NC,10只）和实验组（40只）,实验组予高糖高脂喂养联合小剂量链脲佐菌素（STZ 30 mg/kg）建立2型糖尿病大鼠模型,成功建立模型（32只）再随机分为2组：糖尿病对照组（DM,16只）及雷公藤甲素组（DT,16只）。雷公藤甲素干预8周后,测体重、血压、肾重、血糖、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）,24 h尿蛋白（UAL）的排泄量;镜下观察肾组织病理改变;免疫组化染色技术、实时定量PCR及Western blot法检测肾组织ANGPTL2、Nephrin及Podocin mRNA及蛋白表达的变化。结果 DM组24 h UAL排泄量明显高于NC组（9.07±0.13,0.73±0.03,P＜0.01）,同时ANGPTL2 mRNA及蛋白表达量明显升高（P均＜0.01）, Nephrin及Podocin 的mRNA及蛋白表达量明显降低（P＜0.01）,DT组较DM组24 h UAL排泄量降低（5.51±0.07,9.07±0.13,P＜0.01）,足细胞损伤改善,ANGPTL2 mRNA及蛋白表达量降低（P＜0.01）, Nephrin及Podocin的mRNA及蛋白表达量升高（P＜0.01）,且ANGPTL2 mRNA及蛋白表达量与尿白蛋白呈正相关（r＝0.768,r＝0.989,P＜0.01）,其与 Nephrin及 Podocin的 mRNA及蛋白表达量呈负相关（r＝-0.711,r＝-0.700;＝-0.983,r＝-0.945;P均＜0.01）。结论 ANGPTL2可能通过下调Nephrin及Podocin表达参与足细胞损伤机制,雷公藤甲素可下调ANGPTL2在肾脏的表达,保护足细胞。