肺炎链球菌青霉素结合蛋白与耐药相关性研究

目的 明确本地区肺炎链球菌临床菌株青霉素结合蛋白(penicillin-binding proteins,PBPs)对青霉素G(penicillin G,PCN-G)和头孢噻肟(cefotaxime,CTX)的耐药率.方法 采用生物信息学软件比对ATCC6306株与18株肺炎链球菌临床菌株6个基因序列.采用PCR及测序...     

海绵来源的smenospongine通过抑制非小细胞肺癌细胞中的EGFR-Akt-ABCG2信号通路抑制顺铂耐药

目的·研究海绵来源的倍半萜胺醌类化合物smenospongine (SME)对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞A549及其顺铂耐药株A549/DDP的抗肿瘤活性及作用机制。方法·利用2种细胞（母本细胞A549和顺铂耐药细胞A549/DDP）作为研究模型,采用CCK-8实验检测2株细胞对一线化学治疗药物的半抑制浓度（half maximum inhibitory concentration,IC50）以验证A549/DDP多药耐药的情况;通过克隆形成实验检测SME对母本及耐药细胞增殖的影响,同时采用Transwell侵袭实验以及蛋白质印迹法（Western blotting）检测SME对A549/DDP上皮间质转化（epithelial to mesenchymal transition,EMT）的影响;应用Western blotting和实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测2株细胞中受到SME调节的多药耐药基因的蛋白和mRNA表达水平,探讨其耐药分子机制;进一步采用West...     

基于腺相关病毒血清型8型介导的Gjb2基因c.109G>A纯合突变耳聋小鼠的基因治疗

目的·探究腺相关病毒血清型8型(adeno-associated virus serotype 8,AAV8)介导的野生型缝隙连接蛋白β2 (gap junction protein β 2,Gjb2)基因在Gjb2基因c.109G>A纯合突变小鼠(简称Gjb2纯合突变小鼠)耳蜗支持细胞区域的表达情况及安全性,以及对呋塞米引起的听力下降的影响。方法·将带有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的AAV8-GFP病毒,经耳蜗中阶注射入新生Gjb2纯合突变小鼠的内耳,注射14 d后取小鼠耳蜗,荧光显微镜观察基底膜GFP的表达情况。将载有野生型Gjb2基因的AAV8-GJB2-GFP病毒经中阶注射入新生Gjb2纯合突变小鼠内耳后,于4周后通过实时荧光定量PCR和Western blotting检测耳蜗Gjb2 mRNA及其编码的连接子蛋白(connexin 26,CX26)的表达水平,通过免疫荧光法观察其具体表达位置。通过听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)实验评价新生纯合突变小鼠中阶注射AAV8-GJB2-...     

TRMT61A在肝癌细胞中的功能及其机制研究

目的·探究N1-甲基腺苷(N1-methyladenosine,m¹A)甲基转移酶催化亚基(tRNA methyltransferase 61 Homolog A,TRMT61A)对肝癌细胞功能的影响及其潜在机制。方法·通过生物信息学软件分析TCGA数据库中TRMT61A在肝细胞肝癌患者样本中的表达情况并绘制相关生存曲线。通过CRISPR-Cas9技术构建稳定敲低TRMT61A表达的肝癌细胞系Huh7细胞和HepG2细胞,通过蛋白质印记法(Western blotting)检测对照组和敲低组细胞TRMT61A蛋白水平;通过斑点印迹实验检测2组细胞总RNA的m¹A修饰水平。利用CCK-8法和平板克隆形成实验检测2组细胞增殖能力。使用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色和流式细胞术检测细胞周期;通过Western blotting检测细胞周期相关蛋白表达水平。使用Annexin V/PI细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况;通过Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白表达水平。结果·经生物信息学软件分析,TCGA数据库...     

基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶2、迁移诱导蛋白7和细丝蛋白A在结肠癌中的表达及其预后意义

目的:探讨基质金属蛋白酶9（MMP-9）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、迁移诱导蛋白7（MIG-7）、细丝蛋白A（FLNa）在结肠癌组织中的表达及其对预后的影响。方法:收集2013年1月至2015年12月南京医科大学附属淮安市第一人民医院899例结肠癌患者手术切除的肿瘤标本及其对应的癌旁正常组织。采用酶联免疫吸附试验...     

血清ficolin-3、ALA水平与妊娠期糖尿病的相关性分析

目的探讨血清纤维凝胶蛋白-3(ficolin-3)、血清丙氨酸(ALA)水平与妊娠期糖尿病(GDM)的关系。方法选取2020年1月至2020年8月期间宁波大学医学院附属医院产科收治的GDM孕妇98例作为观察组, 另取同期于本院体检的健康孕妇98例作为对照组。酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清ficolin-3水平、高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定血清ALA水平。比较两组孕妇的血清ficolin-3、ALA水平、各项生化指标[糖化血红蛋白(Hb A1c)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血清总蛋白(TP)、血清尿素(SU)水平]及妊娠结局。Pearson法分析血清ficolin-3、ALA水平与各项生化指标的相关性, 采用单因素分析和二元logistics回归分析探讨GDM的危险因素。结果观察组的血清ficolin-3、HbA1c、SU水平均高于对照组[(22.35±5.36)vs(17.10±6.71)ng/ml、(6.03±1.09)% vs(5.24±0.53)%、(4.20±1.19)vs(3.54±0....     

N6-甲基腺苷依赖性pri-miR-17-92成熟激活AKT/mTOR途径促进子宫内膜癌进展

目的探究N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine, m6A)及其调节因子甲基转移酶3(METTL3)在子宫内膜癌非编码RNA中的作用。方法定量检测浙江大学医学院附属第二医院临平院区2016年7月至2020年12月妇产科20例子宫内膜癌患者配对的癌和癌旁组织样本m6A及METTL3的表达水平。购自ATCC的HEC-1-A细胞系构建METTL3过表达及敲低的细胞。Western blot检测METTL3高表达和敲低细胞的METTL3、AKT/mTOR中关键分子的磷酸化水平;使用qRT-PCR定量检测METTL3高表达和敲低细胞的mRNA;使用RNA免疫共沉淀检测METTL3过表达及敲低细胞的m6A与其受体DGCR8的结合水平。结果 m6A RNA甲基化定量试剂盒检测结果表明, 子宫癌组织中m6A(1.0 ± 0.15)vs(1.7±0.34)(P<0.01)和METTL3(1.0± 0.13)vs(2.5±0.45)(P<0.05)水平升高。过表达METTL3的miR-17-92细胞簇中, Western blot及qRT-PCR检测结果表明, METTL3过表达显...     

妊娠期高血压患者血清SFRP5、miR-124-3p表达及临床意义

目的探究妊娠期高血压疾病(HDCP)患者血清分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)、miR-124-3p表达水平及临床意义。方法选取金华市妇幼保健院2019年1月至2022年2月确诊的98例HDCP患者为观察组, 其中包括妊娠期高血压(GH)组41例, 轻度子痫前期(PE)32例, 重度PE 25例, 另选取同期的80名健康体检者作为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测SFRP5水平, 实时荧光定量法(qRT-PCR)检测miR-124-3p表达水平。分析SFRP5、miR-124-3p水平与HDCP患者临床病理指标的关系, 采用Pearson法分析SFRP5与miR-124-3p的相关性。HDCP的危险因素探究利用多因素Logistic回归。结果与对照组相比, 观察组血清SFRP5表达水平[(33.78±5.21)vs(43.34±8.56)ng/L]下调, 而miR-124-3p水平[(2.16±0.41)vs(1.01±0.17)]上调, 且观察组血清SFRP5水平随着疾病程度加重而降低[(38.43±6.37)vs(33.18±5.14)vs(26.94±3.38)ng/L...     

人STN1蛋白结构、功能的生物信息学分析

目的 基于生物信息学分析人STN1蛋白的结构、功能.方法 从Uniprot数据库中获取人STN1蛋白氨基酸序列,使用ProtParam在线工具分析其理化性质,DNAMAN软件分析其亲/疏水性,通过Genecar网站查看其在细胞中的分布.分别通过PSIPRED网站、PDB数据库、Uniprot网站和NCBI Conser...     

miR-15a对高糖诱导人晶状体上皮细胞氧化应激损伤的促进作用及其机制

目的探讨微小RNA15a(miR-15a)对高糖诱导的人晶状体上皮细胞(LECs)抗氧化应激能力的调控作用及其可能的作用机制。方法收集糖尿病性白内障(DC)患者晶状体前囊膜组织标本及健康供体前囊膜组织标本各26个, 采用实时荧光定量PCR法和Western blot法分别检测组织中miR-15a和沉默信息调节蛋白1(SIRT1)的表达。取人晶状体上皮细胞系HLEB-3细胞分别于0、10、20和50 mmol/L葡萄糖条件下培养24 h, 采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-15a表达;采用Western blot法检测细胞中SIRT1、叉头转录因子3a(FOXO3a)、p53蛋白表达;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用2’’, 7’’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)探针法检测细胞内源性活性氧簇(ROS)含量, 试剂盒检测细胞内源性活性氧总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)浓度。将miR-15a对照和miR-15a抑制剂分别转染至HLEB-3细胞, 在50 mmol/L葡萄糖条件下培养24 h, 采用流式...