适用于结核分枝杆菌RNA抽提的实验方法学研究

目的分枝杆菌的细胞壁结构和成分特殊而复杂,在RNA提取的实验方法学上是否区别于一般的细菌,有待考察。本文使用了异硫氰酸胍提取法与商业化的细菌RNA抽提试剂盒法进行对照,对减活牛型分枝杆菌卡介苗(BCG)进行RNA的抽提,进而确定了适用于分枝杆菌RNA抽提的最优方法。方法分别用异硫氰酸胍提取法和E.Z.N.A.~(TM)Bacterial RNA提取试剂盒从一定量的卡介苗细菌培养物中提取RNA,用Nanodrop2000c检测抽提所得的RNA的浓度和纯度。结果用异硫氰酸胍法从1到30 mg的BCG中均能提取到大量的RNA,而用E.Z.N.A.TMBacterial RNA提取试剂盒几乎未提取到RNA,而且在纯度上前者好于后者。结论异硫氰酸胍的裂解效率远远高于溶菌酶。对于分枝杆菌例如结核分枝杆菌RNA的提取应该使用异硫氰酸胍法。     

山东省非结核分枝杆菌感染的菌种分布研究

目的研究山东省13个哨点县2004—2007年非结核分枝杆菌临床分离率和菌种分布情况。方法对山东省13个哨点县2004—2007年送到汉光中心的2625株分枝杆菌菌株,进行分枝杆菌菌群鉴定试验,鉴定为非结核分枝杆菌的菌株应用16SrDNA测序方法进行菌种鉴定。结果2625株菌株分枝杆菌菌群鉴定39株为非结核分枝杆菌菌群,39株菌株16SrDNA序列分析结果有36株是非结核分枝杆菌,其中29株为胞内分枝杆菌株（80.6%）, 其余分别为堪萨斯分枝杆菌、偶然分枝杆菌各2株、戈登分枝杆菌、龟脓肿分枝杆菌复合物、瘰疬分枝杆菌各1株;结核分枝杆菌复合群2株;鼻疽诺卡氏菌1株。山东地区非结核分枝杆菌临床分离率占分枝杆菌培养阳性菌株的1.4%。结论山东地区流行的非结核分枝杆菌以慢生长分枝杆菌的胞内分枝杆菌为主。     

经纤支镜检查102例支气管结核的临床分析

目的:通过分析纤维支气管镜下支气管结核(简称EBTB)的各种表达,提高对该病的诊断.方法:按常规纤维支气管镜检查(纤支镜),直视下进行刷片、灌洗、活组织病理检查.结果:经纤维支气管镜检查得到刷片阳性(65.68％),灌洗液阳性(52.94％),活组织病理检查阳性(76.94％).青年人发病率居高占50.98％,60～81岁老年人占33.33％),女∶男=4.4∶1.镜下分型:炎性浸润(10.78％);溃疡坏死(48.03％);肉芽增殖(19.60％);纤维狭窄(21.56％).病变部位:肺的各叶段均可累及,主气管+隆突3例,上叶(52例)＞下叶(19例),右肺(65例)＞左肺(46例).结论:EBTB的症状及影像学均不典型,误诊率高达30.39％,纤维支气管镜检查是检出EBTB的最佳手段.     

海南地区疑似肺结核患者非结核分枝杆菌感染特征

目的了解海南地区疑似肺结核患者非结核分枝杆菌(NTM)的菌种分布、耐药性及临床感染特征。方法收集2015年1月—2018年8月海南省某院疑似肺结核患者痰、肺泡灌洗液等呼吸道标本进行培养、菌种鉴定,对NTM感染情况、药敏结果,以及NTM肺部感染患者临床资料进行分析。结果共有833份疑似肺结核患者阳性呼吸道标本,其中126份初步鉴定为NTM,经菌种鉴定,检出结核分枝杆菌3株,检出非分枝杆菌属细菌3株,检出的4株NTM无法鉴定至种,最终116份标本中检出NTM118株。109例为单一NTM感染,7例为混合感染。有8种NTM菌种类型,主要以龟/脓肿分枝杆菌(41.5%)和胞内分枝杆菌(37.3%)为主。8种NTM菌种对8种一、二线抗结核药物呈不同程度的耐药,总耐药率最高的为异烟肼(96.6%),对8种抗结核药物全部耐药的比率高达32.2%。NTM肺部感染患者中男性少于女性,主要好发于中老年人,患者主要以海南沿海地区为主。NTM肺部感染患者主要临床表现为咳嗽咳痰、胸闷气促、血痰或咯血、食欲减退及体重下降,基础疾病既往有结核病史、支气管扩张、肺部感染及咯血,影像学表现为继发型肺结核、肺部空洞、胸膜肥厚、支气管扩张伴有肺气肿及肺部感染。结论海南地区NTM肺部感染主要是以龟/脓肿分枝杆菌和胞内分枝杆菌为主,NTM对常用的抗结核药物均具有较高的耐药性,NTM肺部感染与肺结核应依据病原学检查进行鉴别。     

牛鼻腔分泌物非结核分支杆菌分离培养结果分析

目的调查非结核分支杆菌在牛中的感染情况。方法对174头牛鼻腔分泌物，按中国防痨协会1995年11月颁布的“结核诊断细菌学检验规程”进行非结核分支杆菌分离培养和鉴定。结果从174份标本中分离出分支杆菌88株，阳性率为50.5％，其中草分支杆菌占22．7％、偶然分支杆占21.5％、戈登分枝杆菌占17．3％、不产色分支杆菌占14．8％、土分支杆菌占10．2％、龟脓肿分支杆菌占9．1％和鸟胸分支杆菌占2.2％。结论非结核分支杆菌在牛中存在的现象应引起重视，其毒力对人类的影响应进一步研究，以便采取有效的措施，保护人群的健康。     

Role of antigen-presenting cells in variation in immunogenicity of mycobacteria.

The route of immunization was observed to play a significant role in deciding the outcome of immunization with killed mycobacterial vaccines. Whereas the slow growers were immunogenic by both intraperitoneal and intradermal routes, the rapid growers were immunogenic only by intradermal route. The non-responder state of mice to Mycobacterium vaccae by i.p. route of immunization could be corrected by prior treatment with poly I:poly C, an interferon inducer, or indomethacin, a prostaglandin inhibitor. Antigen-presenting efficiency of peritoneal and spleen cells were compared employing M. vaccae and M. tuberculosis H37Rv primed T cells and corresponding sonicates as antigens in an in vitro lymphocyte transformation test. Irradiated spleen cells presented both the antigens efficiently. However, with peritoneal cells as antigen-presenting cells, proliferative response against only M. tuberculosis was observed; proliferation of M. vaccae primed T cells was very poor. Peritoneal cells of poly I:poly C treated mice showed distinct improvement in their efficiency of presentation; even paraformaldehyde-fixed peritoneal cells gave an efficient stimulation with M. vaccae. The percentage of Ia-positive fraction in peritoneal cells was very low (5.95%) in comparison with spleen cells (38.37%). Poly I:poly C treatment resulted in increase in the Ia-positive cell fraction of the peritoneal cells to 24.5%.     

分枝杆菌在液体培养基中的L型诱导

通过对不同生长时期的卡介苗及耻垢分枝杆菌以不同组合和浓度的D-环丝氨酸(cyc)和氨苄青霉素(AMP)进行L型诱导,综合染色镜检、菌落形态观察及计数,以及对十二烷基磺酸钠(SDS)敏感性测定的结果,发现在对数生长晚期(卡介苗为OD_600=0.25～0.30,耻垢菌为OD_600=1.0～1.4)开始诱导,cyc和AMP的浓度分别为1.0mg/ml及0.lmg/ml时诱导效果最好,诱导率可达80％左右。