低氧诱导因子1α高表达对小鼠急性缺血性肾损伤的影响

目的 探讨低氧预处理诱导低氧诱导因子1α（HIF-1α）高表达对小鼠肾缺血再灌注损伤（IRI）的影响及其可能机制。 方法 雄性C57BL/6N小鼠35只，随机分为健康对照组、氯化钴（CoCl2）组和8%O2组，每组10只；预处理12 h后，以上3组各取5只，分为缺血再灌注（IR）组、CoCl2＋IR组、8%O2＋IR组；另设5只作为假手术对照组。采用夹闭双侧肾蒂30 min的方法建立肾缺血动物模型，观察CoCl2和8％O2预处理对小鼠IR 24 h后肾功能、肾组织病理和相关肾损伤指标的影响及与CoCl2和8％O2诱导HIF-1α及其保护性靶基因血红素氧化酶1（HO-1）表达之间的关系。 结果 CoCl2＋IR组小鼠的肾功能[BUN (35.2±12.2) mmol/L，Scr (34.0±9.7) μmol/L]和8%O2＋IR组小鼠的肾功能[BUN (31.8±9.1) mmol/L，Scr (41.6±10.6) μmol/L]均较IR组[BUN (65.8±2.6) mmol/L，Scr (229.5±11.2) μmol/L]显著改善（P < 0.01）；与此相一致，CoCl2＋IR组和8%O2＋IR组的病理学改变、细胞凋亡程度和波形蛋白的表达均明显低于IR组。另外，CoCl2组和8%O2组中HIF-1α及其靶基因HO-1的表达明显高于健康对照组。 结论 低氧预处理可上调体内HIF-1α表达，对小鼠IRI肾脏具有良好保护效果     

rAAV+HO-1基因对慢性脑缺血大鼠认知能力和氧化应激的影响

目的:研究从重组腺相关病毒介导血红素氧合酶-1(rAAV+HO-1)基因对大鼠慢性脑缺血认知能力改变和抗氧化应激作用。方法:成年雄性Wistar大鼠45只,每组各15只,随机分为假手术组(SH)、缺血2月组(2-VO),缺血2月+HO-1治疗组(2-VOH)。各组在脑立体定位仪下定位大鼠海马部位,2-VOH组缓慢注射rAAV+HO-1基因2μl,余组注入等量生理盐水。7 d后,采用永久节扎双侧颈总动脉方法制备慢性脑缺血动物模型。大鼠慢性缺血8周后,Morris水迷宫检测大鼠空间学习能力,Western blotting检测大鼠海马组织HO-1蛋白表达水平的变化,酶学法检测大鼠海马SOD活性、MDA含量、NO水平改变。结果:2-VO组大鼠认知水平下降与SH组比较,差异有统计学意义(P<0.01),2-VOH组比2-VO组逃避潜伏期明显减少,空间探索试验穿过平台次数增多,差异具有统计学意义(P<0.01),2-VOH组HO-1蛋白水平表达与2-VO组对比有统计学差异(P<0.01),2-VOH组与2-VO组对比SOD活性增多、MDA含量和NO水平下降,有统计学差异(P<0.05),2-VOH组与SH组SOD活性、MDA和NO含量无统计学差异(P>0.05)。结论:海马注射重组腺相关病毒介导HO-1基因,能够使慢性脑缺血大鼠海马组织HO-1蛋白水平表达升高,增加SOD活性,降低MDA、NO含量,减少氧化应激损伤,一定程度上改善大鼠空间认知学习能力。     

Assessment of ultra-structure,viability and function of lipopolysaccharides-stimulated human dermal fibroblasts treated with chrysin and exosomes (in vitro study)

BackgroundLipopolysaccharides (LPS) stimulate production of inflammatory cytokines. Chrysin is flavonoid beneficial for treatment of inflammatory conditions. Bone marrow mesenchymal stem cell (BM-MSC) exosomes have regenerative ability in different tissues.ObjectiveTo assess potential role of chrysin and BM-MSC exosomes on ultra-structure, viability and function of human dermal fibroblasts-adult (HDFa) stimulated by LPS.MethodsHDFa cells were divided into: Group I: Cells received no treatment. Group II: Cells were stimulated with LPS. Group III: LPS stimulated cells were treated with chrysin. Group IV: LPS stimulated cells were treated with exosomes.ResultsAfter 48 h, ultrastructural examination of HDFa cells in Group I revealed intact plasma membrane and numerous cytoplasmic organelles. Group II displayed destructed plasma membrane and apoptotic bodies. Group III showed intact plasma membrane with loss of its integrity at some areas. Group IV demonstrated intact plasma membrane that showed fusion with exosomes at some areas. Statistical analysis of MTT represented highest mean value of cell viability% in Group IV followed by Groups III, I and II respectively. Statistical analysis of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) showed the highest mean value of interleukin-1β (IL-1β) was in Group II followed by Groups III, IV and I, while highest mean values of interleukin-10 (IL-10), nuclear factor-erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) and heme oxygenase-1 (HO-1) proteins were in Group I, followed by Groups IV, III and II respectively.ConclusionsLPS have harmful consequences on ultra-structure, viability and function of HDFa cells. BM-MSC exosomes have better regenerative action on inflamed fibroblasts in comparison to chrysin.     

血红素氧合酶1/一氧化碳系统对球囊损伤后内膜增殖及内皮功能的影响

目的 探讨血红素氧合酶1/一氧化碳((HO-1)/CO)系统对兔颈动脉球囊损伤后内膜增殖及内皮功能的影响及其可能的作用机制.方法 家兔随机分为对照组、胆固醇组、血红素组、卟啉锌组和假手术组5组,每组10只.对照组予普通饮食,其余4组喂饲含1.5%胆固醇饲料,血红素组和卟啉锌组同时分别予氯化血红素或锌原卟啉9腹腔内注射,2周后实验组行颈总动脉球囊损伤术,术后续原喂养给药8周.结果 高胆固醇饮食血脂(总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白)水平显著升高(P<0.01).与对照组比较,胆固醇组颈动脉一氧化氮生成量、cNOS活性显著降低,而一氧化碳生成量、血红素氧合酶活性显著增加(P均<0.01),内膜面积和内膜/中膜面积比值为(0.586±0.090比1.381±0.180).与胆固醇组比较,氯化血红素干预显著增加血红素氧合酶活性、一氧化碳生成量,显著降低内皮素1水平,内膜面积和内膜/中膜面积比值最小(0.386±0.076比0.862±0.164;P均<0.01);锌原卟啉9显著抑制血红素氧合酶活性、一氧化碳生成量,显著增高内皮素1水平,内膜面积和内膜/中膜面积比值最大(0.734±0.096比1.843±0.212),差异均有显著性(P<0.01).结论 高胆固醇饮食加球囊损伤严重损害颈动脉NOS/NO系统,血红素氧合酶1/一氧化碳系统通过代偿和调节NOS/NO系统及降低内皮素1表达从而改善内皮功能,抑制血管损伤后内膜增殖和不良重塑.     

血红素氧合酶1在变应性鼻炎豚鼠模型的鼻黏膜中的表达

目的:通过制备豚鼠变应性鼻炎动物模型,观察并分析内源性一氧化碳(CO)的限速酶血红素氧合酶1(HO1)在豚鼠鼻黏膜组织中的表达。方法:分别以卵清蛋白致敏制备豚鼠变应性鼻炎动物模型为致敏组及以地塞米松处理作为治疗组,以生理盐水处理作为正常对照组,取豚鼠鼻黏膜,苏木精伊红染色观察炎性细胞浸润,免疫组织化学染色方法观察HO1在各组豚鼠的鼻黏膜组织中的表达情况。结果:在黏膜组织中,炎性细胞的浸润与炎症程度有关,炎性细胞以嗜酸粒细胞(EOS)浸润明显,HO1主要表达在黏膜腺上皮细胞的胞质中,3组中,致敏组鼻黏膜HO1表达明显增强(P<0.01),黏膜下EOS浸润明显(P<0.01),激素治疗组HO1的表达弱于致敏组(P<0.01),黏膜下EOS浸润程度减轻,但强于对照组(P<0.01),组间差异有统计学意义(均P<0.01)。结论:HO1主要表达于鼻黏膜的腺上皮细胞质内,豚鼠变应性鼻炎模型中HO1的表达与炎症的严重程度相关,提示内源性CO可能参与了变应性鼻炎的炎症过程。     

缬沙坦对高血压病患者血清过氧化物酶体增生物激活受体-γ及血红素氧合酶-1水平的影响及其肾脏保护作用

目的观察缬沙坦对高血压病患者血清过氧化物酶体增生物激活受体-γ（PPAR-γ）、血红素氧合酶-1（HO-1）水平的影响及其肾脏保护作用关系。方法将35～65岁高血压病患者60例随机分为缬沙坦组（80～160 mg/d）30例和常规治疗组30例,接受16周的治疗。治疗期间监测血压,分别于治疗前和治疗16周后采用Elisa方法检测血清PPAR-γ、HO-1水平;并检测尿β2-微球蛋白和尿微量蛋白含量。结果缬沙坦治疗可显著降低高血压病患者血压水平（P〈0.01）,升高血清HO-1和PPAR-γ水平（P〈0.01）,降低尿β2-微球蛋白和尿微量蛋白含量（P〈0.01）。结论缬沙坦在血压治疗达标的同时可显著降低尿蛋白,作用机制推测可能与其炎症调控作用有关。     

HO-1/CO径路在肺缺血-再灌注损伤中的作用

目的：探讨血红素氧合酶-1（HO-1）/一氧化碳（CO）径路在肺缺血-再灌注损伤中的作用。 方法： 采用在体兔单肺原位缺血-再灌注模型。实验兔40只，随机均分为假手术对照（C）组、肺缺血-再灌注（I-R）组、肺缺血-再灌注加氯铁血红素(H)组和肺缺血-再灌注加锌原卟啉(Z)组。分别在缺血前、缺血后、再灌注1 h、2 h、3 h抽血，检测一氧化碳血红蛋白(COHb)浓度。实验结束时取肺组织检测湿干重比（W/D）、肺泡损伤率（IAR），观察肺组织超微结构的改变、HO-1的活力、表达部位及强度。 结果： 血浆COHb浓度，I-R组、H组明显高于C组，以H组为著（P<0.01）；H组、Z组显著高于、低于I-R组（P<0.01）。肺组织HO-1活力H组最高，其次是I-R组，Z组和C组最低（P<0.05和P<0.01）。I-R组、H组、Z组HO-1在肺血管内皮、部分血管平滑肌、外膜层及部分气道上皮均有阳性表达，明显高于C组，尤以H组最为明显（P<0.01）。W/D、IAR值，I-R组和Z组均明显高于C组，尤以Z组为著，H组虽较C组为高，但显著低于IR组和Z组（P<0.05和P<0.01）。肺组织形态学异常改变，以Z组为著，H组较轻。 结论： HO-1/CO径路对缺血-再灌注肺发挥积极的保护作用。     

血红素氧合酶-1对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白表达对大鼠主动脉平滑肌细胞(RASMC)增殖的影响。方法大鼠主动脉平滑肌细胞株经复苏、传代培养后用于实验,设置空白对照组、HO-1诱导组、HO-1抑制组,后两组分别加用血晶素、锌原卟啉Ⅸ与细胞共同孵育,用Western blot法检测HO-1表达量,并检测HO-1活力;用MTT法检测RASMC增殖能力。同时,还观察了血晶素、锌原卟啉Ⅸ的细胞毒性作用。结果上调HO-1蛋白表达及升高HO-1活力能显著抑制血清刺激的RASMC增殖,反之,抑制HO-1蛋白表达及其活力则增强血清刺激的RASMC增殖。实验浓度的血晶素、锌原卟啉Ⅸ无明显细胞毒性作用。结论 HO-1蛋白高表达能有效抑制RASMC增殖。     

短时间缺血诱导亚铁血红素氧化酶-1对大鼠80%肝切除的影响

目的：观察短时间缺血对大鼠80％肝切除术后肝功能的影响，并对其作用机制进行探讨。方法：12只大鼠分成两组，缺血组肝右叶缺血15min,24h后行缺血肝叶亚铁血红素氧化酶－1免疫组化染色和ATP酶活性测定，同时行肝左叶和尾状叶切除，观察肝切除前，肝切除后1d,2d,3d和第5d肝功能指标GOT，GPT和LDH变化，第5d测定肝再生指数。结果：缺血组缺血后24h，肝细胞亚铁血红素氧化酶－1染色强阳性，并由中央小静脉周围向汇管区逐渐减弱，两组肝ATP酶活性无差异；80％肝切除后第5d,缺血组血清GOT，GPT和LDH明显低于对照组（P＜0．05），肝功能恢复较对照组快，两组肝再生指数无明显差异（P＞0．05），结论：肝缺血15min后24h，肝细胞亚铁血红素氧化酶－1被大量诱导产生，短时间缺血可以改善肝切除术后肝功能，缺血组肝切除术后肝功能的迅速改善可能与亚铁血红素氧化酶－1的诱生有关。     

改变血红素加氧酶-1水平对糖尿病大鼠氧化应激状态及肾功能的影响

目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对糖尿病(DM)大鼠氧化应激状态及肾功能的影响.方法 以链脲佐菌素诱导DM大鼠模型.SD大鼠分成4组:对照组、DM组、正铁血红素Hemin(HO-1)诱导剂组、ZnPP(HO-1抑制剂)组.检测血清总抗氧化能力(TAOC)、丙二醛(MDA)含量和尿白蛋白排泄率(UEA);RT-PCR法检测肾脏组织TNF-α和HO-1mRNA表达水平.结果 Hemin组血清总抗氧化能力与DM组相比明显增高;而给予ZnPP后DM大鼠MDA含量增加,总抗氧化能力降低;DM大鼠UEA上升(P均<0.01),并随病程延长而加重.Hemin组UEA与DM 5 w组相比已有下降趋势,但尚无统计学差异(P>0.05);ZnPP组大鼠UEA明显增高(P<0.01);与对照组相比,DM大鼠肾组织TNF-α及HO-1 mRNA表达增加;应用Hemin后DM大鼠肾脏组织TNF-α表达减少(P<0.01).结论提高DM大鼠肾脏HO-1表达水平可以改善肾组织氧化应激状态、延缓肾功能障碍.