胆汁外引流对重症急性胰腺炎大鼠肺部炎症和水肿的疗效及机制研究

目的 探讨胆汁外引流对重症急性胰腺炎大鼠肺部炎症和水肿的疗效与机制。方法 24只雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为4组（n=6）：假手术组（SS组）、重症急性胰腺炎组（SAP组）、SAP+胆汁外引流组（SAP+BTED组）、SAP+BTED+锌原卟啉组（SAP+BTED+ZnPP组）。ZnPP是血红蛋白氧合酶1（HO-1）的特异性阻断剂,抑制HO-1的表达。造模24 h后取肺组织和血液备用。采用Schmidt评分标准对肺组织进行病理评分。采用Western印迹法检测肺组织中HO-1蛋白质水平表达。采用荧光定量RT-PCR法检测肺组织中HO-1、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）mRNA 基因水平的表达。采用ELISA法检测肺组织中髓过氧化物酶（MPO）的含量。计算肺组织干湿比。结果 SAP+BTED组大鼠肺组织Schmidt评分显著低于SAP组大鼠（P<0.05）。BTED使肺组织中TNF-α和IL-6 mRNA 基因表达水平、MPO含量显著低于SAP组大鼠（P<0.05）。SAP+BTED组大鼠干湿比和HO-1表达水平显著高于SAP组大鼠（P<0.05）。当应用ZnPP时,BTED引起大鼠的这些效应则消失。结论 BTED通过HO-1通路减轻SAP大鼠肺部的炎症和水肿。     

大鼠脊髓中血红素氧合酶基因的表达及其意义

目的观察正常大鼠脊髓中血红素氧和酶(H0)的表达和分布。方法雌性SD大鼠10只，按体重配成5对。每对随机分为正常组和诱导组，后者予以42℃热水浸泡躯体20min。取其中3对大鼠胸腰段脊髓，提取RNA后进行北方印迹分析；2对做免疫组织化学检测。结果HO-1探针检测到1．8kb mRNA，诱导组的丰度数倍于正常组。HO-2探针检测到两组标本都表达两种同源mRNA(1．3kb和1．9kb)，表达量相仿。免疫组织化学显示HO-1阳性细胞主要分布于前角神经元，诱导鼠中间带也可出现；HO-2阳性细胞散布于整个灰质中。结论HO参与脊髓信号传导和应激反应。     

血红素氧化酶-1介导脂联素在脓毒症肺损伤中的保护作用

目的 探讨血红素氧化酶-1(heme oxygenase,HO-1)介导脂联素(adiponectin,APN)在脓毒症肺损伤中的保护作用.方法 80只雄性Wistar大鼠采用随机数字表法分为4组(每组20只):对照组(C组)、脓毒症模型组(LPS组)、脂联素预处理组(APN组)和HO-1抑制剂锌原卟啉IX(zinc protoporphyrin IX,ZnPP IX)干预组(Zn组).各组分别于腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS) (20 mg/kg)或0.9％氯化钠溶液后6h,采用酶联免疫吸附法检测血清中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)和白介素(interlukin-6,IL-6)的含量.采用分光光度法测定一氧化氮(nitric oxide,NO)浓度、肺组织丙二醛(malonaldehyde,MDA)和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性变化.采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)法检测肺组织HO-1、诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)mRNA的表达水平.观察5d内大鼠生存情况,并绘制生存曲线. 结果 与C组比较,LPS组、APN组和Zn组血清TNF-α [(321.3±11.2)、(132.5±10.2)、(311.7±12.4)vs (52.1±1.4)] ng/L、IL-6[(2 229.26±210.25)、(1 134.14±11.24)、(2 028.27±167.04)vs(55.38±0.23)] ng/L、NO[(103±10)、(79±8)、(97±9)vs(48±3)] μmol/L和肺组织匀浆MDA[(16.209±0.151) 、(5.943±0.310)、(13.238±0.326)vs(3.081 ±0.017)] μmol/g、MPO[(12.42±0.46)、(6.77±0.14)、(10.45±0.21)vs(2.74±0.06)] U/g水平显著升高(P＜0.05),生存率显著下降(20％ vs 100％;70％ vs 100％;30％ vs 100％,P＜0.05);与LPS组比较,APN组血清TNF-α [(132.5±10.2)vs (321.3±11.2)] ng/L、IL-6 [(1 134.14±107.13)vs(2229.26±210.25)] ng/L、NO[(79±8)vs (103±10)] μmol/L和肺组织匀浆MDA[(5.943±0.310)vs (16.209±0.151)] μmol/g、MPO [(6.77±0.14)vs (12.42±0.46)] U/g水平显著降低(P＜0.05),肺组织HO-1 mRNA[(8.73±0.24)vs(1.54±0.03)]显著升高(P＜0.05),iNOS mRNA[(1.42±0.15)vs(2.01±0.10)]显著下降(P＜0.05),生存率显著增高(70％ vs 20％,P＜0.05);与APN组比较,Zn组血清TNF-α[(311.7±12.4)vs(132.5±10.2)] ng/L、IL-6[(2 028.27±167.04)vs(1 134.14±107.13)]ng/L、NO[(97±9)vs(79±8)] μmol/L和肺组织匀浆MDA[(13.238±0.326)vs(5.943±0.310)] μmol/g、MPO[(10.45±0.21)vs(6.77±0.14)] U/g水平显著升高(P＜0.05),肺组织HO-1 mRNA[(2.66±0.14)vs (8.73±0.24)]显著下降(P＜0.05),iNOS mRNA[(2.06±0.23)vs(1.42±0.15)]显著升高(P＜0.05),生存率显著下降(30％ vs 70％,P＜0.05). 结论 HO-1可能介导了APN在脓毒症性肺损伤中的保护作用.     

血红素氧合酶-1基因治疗减缓移植物血管病及机制

目的 观察血红素氧合酶-1(HO-1)基因治疗减缓同种移植物血管病的效果,探讨其机制.方法 以BN-Lewis大鼠血管移植为对象,依据基因治疗方案分为4组:同系对照组、空白对照组、载体对照组、腺病毒介导的HO-1( AdHO-1)组.移植后2个月,观察各组移植物纤维化和内膜增生,检测T细胞(CD3+)、B细胞(CD45RA)和巨噬细胞(CD68+)浸润数量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测移植物HO-1基因和蛋白的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测受体血清白细胞介素(IL)-10的浓度.结果 同系对照组无移植物血管病表现,空白对照组和载体对照组大量纤维沉积,AdHO-1组纤维沉积轻微.血管内膜/(内膜+中膜)百分比4组分别为7.6％、81.4％、85.9％、15.9％.每400倍视野浸润细胞数4组分别为T细胞(9.2±1.6、92.3±11.6、89.6±17.8、39.3±10.1)、B细胞(3.6±1.1、72.6±11.8、66.6±10.9、30.6±9.9)、巨噬细胞(7.5±1.2、78.5 ±21.7、72.5 ±19.8、34.5±18.7).血清IL-10浓度4组分别为(50.2±20.1)、(40.2±11.1)、(38.6±19.3)、(481.2 ±69.1)ng/L.AdHO-1组与空白对照组和载体对照组间差异有统计学意义(P＜0.05).AdHO-1基因治疗增高了移植血管HO-1基因和蛋白的表达.结论 AdHO-1基因治疗减缓同种移植物血管病,移植物纤维化和内膜增生明显减轻.AdHO-1基因治疗下调了T细胞、B细胞和巨噬细胞在移植物中的浸润,增加了HO-1和IL-10的表达,IL-10-HO-1通路的活化可能是移植血管得到保护的重要原因.     

钴原卟啉诱导血红素氧合酶-1高表达减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤

目的 探讨钴原卟啉(CoPP)诱导血红素氧合酶-1(HO-1)高表达对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)的影响及其机理.方法 以Wistar大鼠为实验对象,CoPP组分别于左肾血流阻断前48 h和24 h腹腔注射CoPP 2.5 mg/kg,然后阻断左肾血流47 min,恢复左肾血流的同时切取大鼠右肾,采用免疫组织化学染色和免疫印迹法检测其HO-1的表达.在再灌注24 h后,处死大鼠,取其下腔静脉血和左肾,测定血肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)浓度,观察肾组织学变化,检测肾组织中HO-1的表达.IRI组除不用CoPP处理外,其余同CoPP组.CoPP组和IRI组另有部分大鼠的血流阻断时间延长至80 min,恢复血流后不处死,观察14 d,记录其存活情况.结果 IRI组血清Cr及BUN分别为(134.37±24.26)μmol/L和(30.10±3.09)mmol/L,明显高于CoPP组的(48.92±12.92)μmol/L和(13.99±5.00)mmol/L(P＜0.05).IRI组肾小管细胞大片坏死,管型形成,与之相比,CoPP组肾小管坏死范围稍小,但肾小管病变范围仍较广泛,肾小管上皮细胞多处于水变性阶段,"缺血样"肾小球减少,管型形成较少.缺血前及再灌注24 h后,CoPP组的肾组织中HO-1均为高表达,主要位于肾间质的毛细血管处,IRI组再灌注24 h后也见肾组织中HO-1为高表达.术后14 d内,IRI组的6只大鼠中有4只死亡,而CoPP组的5只大鼠全部存活,两组大鼠存活率的差异有统计学意义(P＜0.05).结论 缺血前使用CoPP可减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤,该保护作用可能是通过CoPP诱导肾脏高表达HO-1来实现的.     

rAAV+HO-1基因对慢性脑缺血大鼠认知能力和氧化应激的影响

目的:研究从重组腺相关病毒介导血红素氧合酶-1(rAAV+HO-1)基因对大鼠慢性脑缺血认知能力改变和抗氧化应激作用。方法:成年雄性Wistar大鼠45只,每组各15只,随机分为假手术组(SH)、缺血2月组(2-VO),缺血2月+HO-1治疗组(2-VOH)。各组在脑立体定位仪下定位大鼠海马部位,2-VOH组缓慢注射rAAV+HO-1基因2μl,余组注入等量生理盐水。7 d后,采用永久节扎双侧颈总动脉方法制备慢性脑缺血动物模型。大鼠慢性缺血8周后,Morris水迷宫检测大鼠空间学习能力,Western blotting检测大鼠海马组织HO-1蛋白表达水平的变化,酶学法检测大鼠海马SOD活性、MDA含量、NO水平改变。结果:2-VO组大鼠认知水平下降与SH组比较,差异有统计学意义(P<0.01),2-VOH组比2-VO组逃避潜伏期明显减少,空间探索试验穿过平台次数增多,差异具有统计学意义(P<0.01),2-VOH组HO-1蛋白水平表达与2-VO组对比有统计学差异(P<0.01),2-VOH组与2-VO组对比SOD活性增多、MDA含量和NO水平下降,有统计学差异(P<0.05),2-VOH组与SH组SOD活性、MDA和NO含量无统计学差异(P>0.05)。结论:海马注射重组腺相关病毒介导HO-1基因,能够使慢性脑缺血大鼠海马组织HO-1蛋白水平表达升高,增加SOD活性,降低MDA、NO含量,减少氧化应激损伤,一定程度上改善大鼠空间认知学习能力。     

脓毒血症大鼠肝脏血红素加氧酶的变化及作用

目的 :探讨脓毒血症时肝脏血红素加氧酶 (HO)的变化及作用。方法 :盲肠结扎穿孔法复制大鼠腹膜炎脓毒血症模型 ,术后 9h和 18h测心功能指标及血压 ,取肝脏测 HO活性和 MDA含量 ,NorthernBlot测 HO- 1m RNA表达。腹腔注射锌原卟啉 IX(Zn PPIX)抑制 HO活性。结果 :9h组心功能指标及血压无明显变化 ,MDA含量增加 4 9.2 % (P<0 .0 5 ) ;18h组血压下降、心功能降低 ,MDA含量升高14 1.6% (P<0 .0 1)。 9h组与 18h组 HO- 1m RNA表达分别比对照组增加 78.2 %与 83.1% ,HO活性分别比对照组升高 112 .5 % (P<0 .0 1)与 12 0 .6% (P<0 .0 1) ;应用 Zn PPIX后 ,9h组与 18h组 HO活性比未用抑制剂时分别降低 5 2 .4 % (P<0 .0 1)与 5 1.0 (P<0 .0 1) ,MDA含量分别比未用抑制剂组增高4 8.5 %与 5 6.7% ;结论 :脓毒血症时肝脏 HO- 1m RNA表达增加、HO活性增强 ,在此病理过程中 HO具有抗氧化损伤作用     

血红素加氧酶1与心血管疾病研究进展

血红素加氧酶1及其产物胆红素和一氧化碳具有抗炎、抗氧化、抗内皮细胞凋亡和抑制平滑肌细胞迁移和增殖的作用。这一功能广泛的氧化酶系统在心血管系统的病理生理过程中扮演着重要的角色,它的作用涉及血压的调控、动脉粥样硬化的发生发展和冠状动脉介入治疗后再狭窄的发生。     

血红素氧合酶-1对预防动脉粥样硬化及炎症的影响

目的:探讨血红素氧合酶-1(HO-1)抑制动脉粥样硬化进程的机制。方法:30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组及氯血红素组。3月后观察主动脉形态学变化,ELISA法测定血中C-反应蛋白(CRP)及白介素-6(IL-6)水平,免疫组化法检测斑块内HO-1及巨噬细胞CD68的表达。结果:模型组及氯血红素组与对照组比较,CRPI、L-6、HO-1及CD68升高(P<0.05)。氯血红素组与模型组比较,主动脉内膜斑块面积占内膜面积比(RAAPI)显著减少(P<0.01),HO-1升高(P<0.01),CRPI、L-6及CD68降低(P<0.05)。结论:HO-1对动脉粥样硬化有明显的预防作用,这种作用可能是通过抑制炎症因子及巨噬细胞数量,减少炎症反应来实现的。     

NOS/NO和HO/CO系统及药物干预在实验性兔动脉粥样硬化进程中的作用

目的探讨动脉粥样硬化进程中一氧化氮合酶/一氧化氮（NOS/NO）和血红素加氧酶/一氧化碳（HO/CO）系统的变化、相互关系以及辛伐他汀对该系统的影响。方法16只家兔予以高胆固醇饮食喂养8周,停用高胆固醇饮食后,随机分为辛伐他汀组（n=8）和模型组（n=8）。辛伐他汀组喂饲辛伐他汀进行药物干预,继续给予普通饲料喂养8周;同时设正常对照组（n=8）,给予普通饲料喂养16周。然后取静脉血和主动脉组织,分别用沉淀漂浮酶联法、Chalmers A H、硝酸还原酶法测定各实验组血中TC、TG、LDL、HDL、CO、 NO含量,免疫组织化学方法测定主动脉组织中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和血红素加氧酶 1（HO 1）的表达水平;并比较两组间各项参数的差异。结果8周末与对照组比较,模型组血脂水平明显升高,血清NO含量明显降低,血浆CO水平明显升高（P均＜0.01）。16周末与模型组比较,辛伐他汀组血浆TC、TG、LDL明显下降（P＜0.01）,HDL和血清NO含量明显升高（P＜0.01）,血浆CO水平明显降低（P＜0.01）,HO-1及iNOS表达明显减少（P＜0.01）。结论动脉粥样硬化进程中,HO/CO和NOS/NO系统显示出互补及代偿性调节作用,辛伐他汀可以通过下调HO/CO和NOS/NO系统而延缓动脉粥样硬化进程。