27例citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症尿筛查分析

目的探讨citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症（neonatal intrahepatic cholestasis caused by citrin deficiency,NICCD）患儿尿液成分改变特点。方法应用气相色谱质谱法对27例NICCD患儿尿液半乳糖和酪氨酸及其两者代谢产物进行定性、定量分析。结果 27例中13例患儿有半乳糖合并酪氨酸代谢异常,8例患儿只表现为半乳糖代谢异常,1例患儿仅表现为丝苏氨酸比例倒置,5例患儿尿筛查未发现异常。结论①应用气相色谱质谱法分析NICCD患儿尿液成分有助了解患儿机体代谢情况,对疾病的诊断和治疗有重要的意义。②NICCD患儿常伴有半乳糖及酪氨酸代谢异常。     

D-半乳糖对大鼠骨髓间充质干细胞衰老的影响

目的：观察D-半乳糖(D-galactose,D-gal）对骨髓间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells,MSCs）衰老的影响,构建体外MSCs衰老诱导模型。 方法：分离SD 大鼠（7日龄）MSCs,传代培养至第3代后,细胞随机分为4组：分别为正常对照组,1 g/L,10 g/L和50 g/L D-gal衰老诱导组。对照组在正常的DMEM 培养液中继续培养;诱导组MSCs分别在含1 g/L、10 g/L、50 g/L D-gal的DMEM 培养液中培养48 h。各组细胞培养结束后,衰老相关β-半乳糖苷酶染色法观察细胞衰老变化、Western blot法检测衰老相关蛋白p53、p21和p16表达,AO/EB双染法检测细胞凋亡,MTT法检测细胞增殖,超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛(MDA)含量检测细胞内氧化应激水平。 结果：10 g/L和50 g/L D-gal 诱导组衰老相关β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数较对照组显著升高（P<0.01）,衰老相关蛋白p53、p21和p16表达明显增高：AO/EB染色结果显示50 g/L D-gal 诱导组细胞凋亡率较对照组显著升高（P<0.01）;MTT检测结果表明10 g/L和50 g/L D-gal均能抑制MSCs增殖活性,而10 g/L和50 g/L D-gal 诱导组MSCs内SOD活力较对照组明显降低（P<0.01）,MDA含量显著升高(P<0.01)。 结论：10 g/L和50 g/L D-gal均可诱导MSCs发生衰老变化,并促使细胞内衰老相关蛋白p53、p21和p16表达增加,细胞存活能力减弱,增殖能力降低,这可能与D-gal促使MSCs内氧化应激水平升高有关。10 g/L是D-gal诱导MSCs衰老的合适浓度。     

3.5代树枝状聚合物-2-氨基乙基β-D-吡喃半乳糖苷耦联物的制备及其肝实质细胞靶向性的研究

目的:制备一种对肝实质细胞具有靶向性的纳米给药载体用以提高药物对乙肝和肝癌的治疗效果。方法:将3.5代树枝状聚合物(G3.5PAMAM)与异硫氰酸荧光素(fluoresceine isothiocyanate,FITC)耦联,得到G3.5PAMAM-FITC,再将耦联物G3.5PAMAM-FITC连上不同摩尔比(1:5,1:10,1:15,1:20)的2-氨基乙基β-D-吡喃半乳糖苷(2-aminoethylβ-D-galactopyranoside,Dgal),得到不同的Dgaln-G3.5PAMAM-FITC,然后用流式细胞仪检测不同的Dgaln-G3.5PAMAM-FITC对肝实质细胞的靶向性。结果:G3.5PAMAM与FITC成功耦联,G3.5PAMAM-FITC与半乳糖苷可以通过活泼酯反应在二甲基亚砜(dimothyl suhoxide,DMSO),中成功耦联,耦联率达到95%,经流式细胞仪检测,在1:5,1:10,1:15和1:20这4种比例中,PAMAMG3.5-FITC与Dgal肝靶向性的最佳配比(摩尔比)为1:20。结论:Dgal20-G3.5PAMAM-FITC具有一定的肝靶向性,可以作为...     

重组水蛭素Ⅲ对半乳糖损伤的人晶状体上皮细胞凋亡相关基因表达的影响

背景重组水蛭素Ⅲ（rHV3）对半乳糖损伤的人晶状体上皮细胞（LECs）有较好的保护作用,但其分子机制尚不清楚。目的探讨rHV3对半乳糖损伤的人LECs凋亡相关基因表达的影响。方法用本课题组构建的表达重组水蛭素工程菌,参照Markwardt的凝血酶滴定方法进行水蛭素生物学活性的测定。将培养的人LECs分为3组,培养于含质量分数10％胎牛血清（FBS）的D／F12培养液作为正常组、用含125×10^-3mol／LD一半乳糖的D／F12培养液建立人LECs株SRAOI／04损伤模型为模型组,用2000U／ml（商品单位）rHV3加入部分损伤模型培养液中进行干预作为rHV3组。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测各组人LECs内凋亡相关基因的表达,包括醛糖还原酶（AR）、bcl2、bax、p53基因mRNA的表达水平,各目的基因表达丰度用目的基因的吸光度（A）值与3一磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）A值的比值表达。结果与正常组比较,模型组人LECs中ARmRNA／GAPDHmRNA、baxmRNA／GAPDHmRNA和p53mRNA／GAPDHmRNA值明显高于对照组,差异均有统计学意义（t=3．90E一06、t=8．44E一04、t=5．15E一08,P〈0．叭）,而水蛭素干预组人LECs中ARmRNA／GAPDHmRNA、baxmRNA／GAPDHmRNA和p53mRNA／GAPDHmRNA值明显低于模型组,差异均有统计学意义（t=5．90E一06、t=1．51E．04、t=3．42E一06,P〈0．01）。与正常组比较,模型组人LECs中的bcl2mRNA／GAPDHmRNA值明显降低,差异有统计学意义（t=1．86E一05,P〈O．01）,与模型组相比,水蛭素干预后人LECs中的bcl2mRNA／GAPDHmRNA值显著提高,差异有统计学意义（t=8．56E一05,P〈0．01）。结论D一半乳糖导致人LECs损伤,rHV3可能通过抑制多元醇途径和线粒体介导的凋亡途径对人LECs起保护作用。     

褪黑素对D-半乳糖衰老模型小鼠抗氧化系统作用的实验研究

目的 探讨褪斑黑素消除自由基及抗氧化性。方法 用Ｄ－半乳糖诱导昆明种小鼠形成衰老模型,同时给予模型外源性褪黑素（ＭＴ）,检测小鼠肝组织ＳＯＤ活性、肝及脑组织ＧＳＨ－Ｐｘ活性和ＭＤＡ含量、心脏组织ＬＰＦ水平的变化。结果 模型小鼠肝组织ＳＯＤ活性下降（Ｐ〈０．０５）;肝及脑组织ＧＳＨ－Ｐｘ活力降低（分别为Ｐ〈０．０５;Ｐ〈０．０１）,心脏组织中ＬＰＦ水平增高（Ｐ〈０．０１）。给予外源性ＭＴ（５ｍｇ／ｋ     

升降散加减方治疗IgAN大鼠作用机制探讨

目的 通过探讨疏通三焦、清热利湿理论指导下的升降散加减方对IgA肾病(immunoglobulin a nephropathy,IgAN)大鼠血清转化生长因子 β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、半乳糖缺乏-IgA(ga...     

肝靶向性Gal-PEG-PEI纳米载体介导psiRNA转染HepG2细胞效率的检测

目的 检测肝细胞靶向性Gal-PEG-PEI纳米基因载体介导psiRNA转染HepG2细胞的效率.方法 纳米粒径仪和透射电镜测定Gal-PEG-PEI/psiRNA复合物的粒径和形态,转染HepG2细胞,48 h后用流式细胞仪测定转染效率.转染前加入1 mg半乳糖观察其半乳糖竞争拮抗结果.结果 Gal-PEG-PEI/psiRNA复合物的粒径随N/P的增大而减小,最小粒径为81.1 nm;Gal-PEG-PEI载体的转染效率为(37.34±2.50)%,明显高于PEG-PEI、LipofectamineTM 2000及裸psiR-NA;加入竞争拮抗剂半乳糖后Gal-PEG-PEI的转染效率下降至3.60%.结论 Gal-PEG-PEI纳米基因载体对HepG2细胞有较高的转染效率,具有良好的肝细胞靶向性.     

Brain inositol monophosphatase identified as a galactose 1-phosphatase

During the course of our analysis of myo-inositol monophosphatase (IMPase), a key enzyme of brain inositol signaling, we found it also hydrolyzes galactose 1-phosphate (Gal 1-P), an intermediate of galactose metabolism. Electrophoretically homogeneous IMPase was prepared from three different sources: (i) bovine brain, (ii) rat brain, and (iii) human brain (recombinant), which demonstrated similar ability to hydrolyze inositol monophosphates and galactose 1-phosphate. The ability of IMPase to use both inositol 1-phosphates and galactose 1-phosphate equally as substrates is of considerable importance in determining lithium's mechanism of action. Our current results suggest that during lithium therapy, both galactose and inositol metabolic pathways can be simultaneously modulated through lithium inhibition of IMPase. Enzyme studies with Mg²⁺ ions as activators and with Li⁺, Ca²⁺, Mn²⁺, Ba²⁺ ions as inhibitors demonstrate that IMPase is a single enzyme possessing the ability to hydrolyze both inositol monophosphates and Gal-1-P with equal efficiency. In addition, gel-filtration chromatographic analysis demonstrated that IMPase and galactose 1-phosphatase activities co-purify in our eletrophoretically homogeneous enzyme preparations. Our results indicate that lithium inhibition of IMPases at clinically relevant concentrations, may modulate both inositol and galactose metabolism, and identifies yet another carbohydrate pathway utilizing IMPase.     

三七皂苷单体Rg1对D-半乳糖模型鼠学习记忆和免疫功能的影响

目的 :探讨三七皂苷单体 Rg1对 D-半乳糖 ( D- gal)所致衰老模型鼠学习记忆行为和免疫功能的影响。方法 :Balb/c小鼠随机分为 4组 :衰老模型组、正常对照组、实验 组和实验 组。应用跳台和 Y-型迷路方法测定 D-半乳糖衰老模型鼠学习记忆行为 ;采用 3 H- Td R掺入法测定小鼠胸腺、脾细胞的增殖能力 ;生物活性检测法测定 IL- 2和 TNF- α水平的变化。结果 :三七皂苷单体 Rg1能明显提高衰老模型鼠对电刺激的逃避能力 ,改善 D- gal所致学习记忆能力下降。同时三七皂苷Rg1能明显增强衰老模型鼠胸腺和脾细胞增殖能力 ,对 IL- 2水平有所提高 ,血清 TNF- α的细胞毒作用较模型组降低。结论 :三七皂苷单体 Rg1能改善衰老模型鼠学习记忆能力并调节免疫功能。     

半乳糖对小鼠胚胎发育的影响

目的研究半乳糖对妊娠小鼠胎盘组织脂质过氧化和抗氧化酶的影响，探讨半乳糖对小鼠胚胎发育的影响及其机理。方法将75只妊娠小鼠随机分为4组，即半乳糖低、中、高浓度组（20％、35％和50％）和正常对照组，分别从妊娠第1d开始喂不同浓度半乳糖（20％、35％、50％）及正常食物，观察妊娠结局，记录总胎鼠数、活胎数、吸收胎数和死胎数。测定35％半乳糖组孕鼠胎盘组织中超氧化物歧化酶（SOD）的活性及脂质过氧化产物丙二醛（MDA）含量。采用放免法（RIA）测定35％半乳糖组孕鼠及对照组孕d5、d9、d13和d15血清孕酮（P）和雌二醇（E2）水平。结果（1）35％半乳糖可使妊娠小鼠血清孕酮和雌二醇水平较对照组显著下降（P〈0．05）（2）35％半乳糖使妊娠小鼠胎盘组织中SOD活性较对照组显著降低，MDA含量较对照组显著升高（P〈0．01）（3）随着半乳糖浓度增高，妊娠小鼠活胎率明显下降，吸收胎率和死胎率明显升高（P〈0.05）。结论半乳糖致妊娠小鼠胎盘组织中抗氧化能力下降，氧化水平增强，破坏胎盘的抗氧化系统的平衡状态，造成胎盘组织氧化损伤，使发育中的胚胎失去血液供应和营养，最终导致胚胎发育受阻，孕体被排出或吸收。