自然流产组织应用FISH技术的染色体异常遗传因素分析

目的分析兰州地区自然流产组织中的染色体异常发生率,并探讨染色体异常与自然流产的年龄、孕周、次数、胚胎性别的关系。方法应用荧光原位杂交（fluorescent in situ hybridization,FISH）技术检测了299例自然流产的绒毛或胚胎组织。结果我们检测出了119例染色体异常病例,其中16-三体最为常见,占所有异常总数的27．73％,X单体次之,占18．49％。我们还发现自然流产与流产时的妊娠孕周和胚胎性别有关。结论染色体异常是自然流产的一个重要原因,尽早地遗传咨询能够有效的降低出生缺陷的发生率。     

MuSK-mCherry融合荧光蛋白的构建及对重症肌无力患者MuSK抗体的检测

目的：构建肌肉特异性激酶（MuSK）与红色荧光蛋白（mCherry）的重组融合蛋白（MuSK-mCherry）,并作为抗原用于重症肌无力（ MG）患者血清中的MuSK抗体（ MuSKAb）的检测。方法：应用PCR技术,从含有mCherry 基因的载体pRSET-B扩增mCherry基因,经T载体（pGEM-T Easy Vector）克隆至含有MuSK细胞外区第22-452位氨基酸肽段基因的载体pMT/BiP/V5-His（ MuSK）上,构建MuSK-mCherry融合荧光蛋白基因。将重组载体转染果蝇S2细胞,表达产物以共聚焦显微镜检查。以MuSK-mCherry融合蛋白作为抗原,应用荧光免疫沉淀试验检测MG患者MuSKAb。结果：成功地构建了MuSK-mCherry融合蛋白基因,并得到了表达。经对已知MuSKAb阳性的MG患者血清中的MuSKAb的检测证实,构建的MuSK-mCherry融合蛋白在荧光免疫沉淀试验中可以检测到MuSKAb。结论：以MuSK细胞外肽段与mCherry构建的融合荧光蛋白作为抗原,可以用于MG患者血清中的MuSKAb的检测。     

O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒试纸条的研制

目的本研究旨在建立一种准确、快速、简便的O139群霍乱弧菌检测方法。方法以荧光纳米颗粒为标记物,采用双抗体夹心法模式制备O139群霍乱弧菌免疫层析检测试纸条。在紫外灯下观察试纸条上质控线和检测线上的荧光信号强度作为结果判定依据。结果用所制备的O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒检测试纸条对9属20种105株菌进行检测,所有20株O139群霍乱弧菌检测结果呈阳性,其余85株非O139群霍乱弧菌均呈阴性反应;用该试纸条检测人工污染的海鱼样品,灵敏性为3．5×10^4CFU／mL。用自制试纸条和标准法同时检测77份样品（均为水产品）,两种方法的总符合率为85．7％。结论O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒检测试纸条的研制成功为O139群霍乱弧菌的快速检测提供了一个极好的检测方法,便于野外检测的开展,具有广阔的应用前景。     

反应体系对荧光定量PCR检测乙肝核酸结果影响的分析

目的探讨荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒核酸（HBV-DNA）时核酸提取体系中加入样本量的不同和不同反应体系对检测结果的影响。方法选取乙肝检测患者DNA定量结果为低拷贝数（10-103copies/ml）和高拷贝数（105-107copies/ml）样本各10例,分别按2种核酸提取体系及2种反应体系分为4组进行HBV-DNA荧光定量PCR检测。结果 10例低拷贝数样本减少反应体系后只有3例检出有反应,由于反应体系的减小造成结果存在明显差异,P〈0.01;即使增加提取核酸时加入的样本量,结果仍然存在差异,P〈0.01。10例高拷贝数的样本改变提取核酸时加入的样本量及最终的反应体系,各组的算术平均值在0.43-2.31倍之间,数量级变化〈1。结论反应体系过小会造成低拷贝数样本出现假阴性,所以要保证反应体系中加入足够的提取出的核酸以确保样本HBV-DNA的检出率。     

不同标本巨细胞病毒检测在诊断小儿人巨细胞病毒感染中的应用

目的：探讨尿液、淋巴细胞和母乳的 HCMV-DNA 检测以及血清 HCMV-IgM 检测在小儿人巨细胞病毒（HCMV）感染诊断中的意义。方法用实时荧光定量 PCR检测189例疑似HCMV感染患儿尿液、淋巴细胞和母乳的HCMV-DNA ,用化学发光法检测其血清HCMV-IgM ,并分年龄分性别对其阳性率进行分析比较。结果新生儿组母乳HCMV-DNA阳性检出率（60.3％）显著高于尿液（5.2％, P〈0.001）和淋巴细胞（12.1％,P〈0.001）,也显著高于血清 HCMV-IgM 阳性率（3.4％,P〈0.001）;婴儿组母乳（48.1％）与尿液（55.0％）HCMV-DNA 阳性率差异无统计学意义（P〉0.05）,但两者均显著高于淋巴细胞 HCMV-DNA 阳性率（22.1％, P〈0.001）和血清 HCMV-IgM 阳性率（24.4％, P〈0.001）;婴儿组的尿液 HCMV-DNA、血清 HCMV-IgM 阳性率均显著高于新生儿组（ P〈0.01）;两组各指标男女阳性率差异均无统计学意义（ P〉0.05）;母乳 HCMV-DNA 阳性率与尿液、淋巴细胞 HCMV-DNA 阳性率及血清 HCMV-IgM 阳性率均呈显著正相关（r ＝0.630,P ＝0.000;r ＝0.413,P ＝0.000;r ＝0.341,P ＝0.000）。结论联合尿液、淋巴细胞HCMV-DNA 和血清HCMV-IgM 检测有助于患儿HCMV 感染的辅助诊断;在无法联合检测的条件下,婴儿首选尿液 HCMV-DNA 检测可获得较高检出率;母乳 HCMV-DNA检测并正确喂养有助于预防HCMV感染。     

Immunological,chemical and clinical aspects of exposure to mixtures of contact allergens

Allergic contact dermatitis is one of the most frequent forms of skin inflammation. Very often, we are exposed to mixtures of allergens with varying potencies, doses/areas, and exposure times. Therefore, improved knowledge about immune responses to combinations of contact allergens is highly relevant. In this article, we provide a general introduction to immune responses to contact allergens, and discuss the literature concerning immune responses to mixtures of allergens. According to the existing evidence, increased responses are induced following sensitization with combinations of allergens as compared with single allergens. The response to a mixture of allergens can be both additive and synergistic, depending on the dose and combination of allergens. Importantly, sensitization with combinations of either fragrance allergens or metal salts can result in increased challenge responses to specific allergens within the mixture. Taken together, the immune responses to mixtures of allergens are complex, and further studies are required to obtain the necessary knowledge to improve consumer safety.     

可体内、外示踪的BMP2真核表达载体的构建和表达

目的 拟构建双顺反子增强型绿色荧光蛋白标记的人骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP2)真核表达载体,为其在真核细胞体内外示踪定位打下基础.方法 以重组质粒pcDNA3.1/CT-hBMP2为模板,结合已设计好的特异性引物,采用PCR方法获得BMP2片段,将其分别与克隆载体pTA2-T-easy和真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS连接,转化入感受态DH5α细胞中,通过筛选得到含有绿色荧光蛋白的重组表达载体pSELECT-GFPzeo-hBMP2,并进行测序鉴定.将质粒转染CHO细胞后Western Blot检测BMP2蛋白表达,用RT-PCR检测BMP2mRNA表达.结果 琼脂糖电泳显示PCR产物为一条长约1216 bp的带,重组表达载体pSELECT-GFP zeo-hBMP2经双酶切可得到约1216 bp的片段,测序证实与Genebank中hBMP2序列完全相符,重组表达载体脂质体法转染CHO细胞48～72 h后荧光显微镜下证实转染成功,经RT-PCR证实CHO细胞中存在BMP2基因表达,采用免疫荧光化学方法证实载体中CHO细胞表达BMP2蛋白.经Western Blotting鉴定重组蛋白为分泌蛋白,相对分子质量在17×103左右.结论 成功构建可体内外示踪增强含双顺反子绿色荧光蛋白人BMP2真核表达载体.     

益生菌VSL#3对实验性结肠炎大鼠结肠黏膜Claudins蛋白表达的影响

目的 观察益生菌VSL#3对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的大鼠急性结肠炎的保护作用,以及对紧密连接蛋白Claudins（Claudin-1,-2,-3）在结肠黏膜上表达的影响。方法 24只健康雌性SD大鼠采用TNBS一次性灌肠法建立大鼠结肠炎模型,造模完成后第2天开始,8只大鼠每日给予2ml0.9％ NaC1溶液灌胃（TNBS组）,8只给予100 mg VSL#3（VSL#3组）,另8只给予200 mg 5-氨基水杨酸(5-ASA)灌胃（5-ASA组）。5只同级别未造模大鼠作为对照组每日给予0.9％ NaCl溶液灌胃,均持续1周并处死。处死时留取粪便标本并做细菌培养以检测肠道菌群的变化。通过观察腹泻、便血和体重情况计算疾病活动指数(DAI)。取结肠组织做HE染色,观察病理学改变;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肠组织髓过氧化物酶(MPO)的变化;量子点免疫荧光标记法检测Claudins在结肠黏膜的表达和分布。结果 与TNBS组比较,益生菌VSL#3和5-ASA治疗均能降低结肠炎大鼠明显升高的DAI和肠组织MPO水平,减轻结肠炎性反应评分。与对照组比较,结肠炎大鼠的肠道细菌计数发生改变,Claudin-1,-2,-3蛋白表达均明显增加（平均荧光强度分别为66.200±5.737、71.780±6.670、61:300土5.199,t值分别＝17.237、27.909和21.788;P值均＜0.01）;而与TNBS组和5-ASA组比较,VSL#3可调节肠道菌群平衡,增加Claudin-1,-3的表达（Claudin-1:75.550±8.717比66.200±5.737和67.080±5.401;t＝9.348,8.469;P值均＜0.05;Claudin-3:68.820±7.443比61.300土5.199和59.830±5.930;t＝7.519,8.988,P值均＜0.05),降低Claudin-2的表达(58.740±6.457比71.780±6.670和66.870±5.791;t＝13.033,P＜0.01;t＝8.123,P＜0.05)。结论 益生菌VSL#3可能通过改变Claudins蛋白的表达,增强肠黏膜屏障功能,从而发挥缓解急性结肠炎性反应的作用。     

慢性鼻窦炎鼻窦黏膜中表皮生长因子及其受体的表达

目的 观察表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)及其配体表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)在慢性鼻窦炎患者鼻窦黏膜中的表达及分布,探讨EGFR信号通路与慢性鼻窦炎的关系.方法 取慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者上颔窦窦口黏膜20例(Ⅰ型和Ⅱ型各10例),另以10例正常鼻窦黏膜作为对照,应用HE染色和免疫荧光技术观察EGF和EGFR在各组鼻窦黏膜中的表达,比较阳性细胞面积比在各组间的差异.结果 EGF和EGFR在Ⅰ型和Ⅱ型慢性鼻窦炎鼻窦黏膜中均有表达,其中EGF主要表达于上皮细胞,炎性细胞和部分黏膜下腺体亦有表达;而EGFR主要表达于杯状细胞,上皮细胞和基底细胞亦有表达,两组间阳性细胞面积比差异均无统计学意义(P＞0.05).正常鼻窦黏膜中上述部位仅有弱表达或无表达,阳性细胞面积比与两病变组差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 EGFR及其配体EGF在慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者鼻窦黏膜中均有明显表达,EGFR信号通路可能在慢性鼻窦炎的病理机制中发挥重要作用.