The suppression of cervical cancer ferroptosis by macrophages: The attenuation of ALOX15 in cancer cells by macrophages-derived exosomes

Induction of cancer cell ferroptosis has been proposed as a potential treatment in several cancer types. Tumor-associated macrophages(TAMs) play a key role in promoting tumor malignant progression and therapy resistance. However, the roles and mechanisms of TAMs in regulating tumor ferroptosis is still unexplored and remains enigmatic. This study shows ferroptosis inducers has shown therapeutic outcomes in cervical cancer in vitro and in vivo. TAMs have been found to suppress cervical cancer cel...     

外泌体与生殖细胞生长发育的研究进展

卵母细胞和精子生长发育都受局部微环境中细胞因子的调控。在卵泡局部存在血-卵屏障,睾丸局部存在血-睾屏障,生殖细胞所在微环境是如何与机体进行信号转导和物质交换,这一过程尚不清楚。外泌体作为一种体液中普遍存在的膜性囊泡,可以参与细胞间的信号转导和物质交换,介导免疫耐受和促进肿瘤的发生发展等一系列的生理和病理活动,在卵泡或睾丸局部发挥重要的作用。卵巢来源的外泌体在卵泡的发生发展过程中具有一定的作用。在体外储存期间,精液中的外泌体对于维持精子的功能具有重要的作用。关于外泌体的研究是生殖医学中的一个新的领域,将会为生殖医学带来一个新的契机。     

In vivo identification of an HLA‐G complex as ubiquitinated protein circulating in exosomes

The nonclassical human leukocyte antigen‐G (HLA‐G) is a tolerogenic molecule that can be released to the circulation by expressing cells. This molecule can form dimers but some other complexed HLA‐G forms have been proposed to be present in vivo. Here, we further characterized these other complexed HLA‐G forms in vivo. Ascitic and pleural exudates from patients were selected based on positivity for HLA‐G by ELISA. Complexed HLA‐G was detected in exosomes, which indicates an intracellular origin of these forms. 2D‐PAGE analysis of exudates and isolated exosomes showed that these high molecular weight complexes were more heterogeneous than the HLA‐G1 expressed by cell cultures. Treatment with deglycosylating enzymes did not change the molecular weight of HLA‐G complexes. Immunoblot analysis of exudates and exosomes with an anti‐ubiquitin antibody showed that at least some of these structures correspond to ubiquitinated HLA‐G. HLA‐G ubiquitination could be reproduced in vitro in HLA‐G1‐transfected cell lines, although with a lower modified/nonmodified protein proportion than in exudates. In summary, we demonstrate new circulating HLA‐G forms in vivo that open a new perspective in the study of HLA‐G function and analysis.     

低氧对巨噬细胞外泌体的表达及其对骨肉瘤细胞的化疗抗性影响的体外研究

目的在体外探究低氧对巨噬细胞外泌体分泌的影响及对骨肉瘤细胞顺铂耐药性的改变。方法Transwell侵袭实验检测不同氧浓度(1%O2的低氧与常氧)条件下骨肉瘤细胞MG63对巨噬细胞的趋化能力;在低氧与常氧条件下将MG63与巨噬细胞进行共培养,流式细胞术及RT-PCR检测巨噬细胞的分化;分离纯化来源于不同氧浓度条件下培养的M2型巨噬细胞外泌体,利用透射电镜、纳米粒径、Western blot进行鉴定,双免疫荧光进行示踪MG63对外泌体的摄取;克隆形成实验及流式细胞术检测来源于不同氧浓度下的巨噬细胞外泌体对MG63的增殖、凋亡影响;CCK-8检测来源于不同氧浓度下的巨噬细胞外泌体对MG63顺铂耐药性的影响。结果低氧能够促进骨肉瘤细胞对巨噬细胞的趋化能力,并进一步诱导巨噬细胞向M2型分化;成功分离不同氧浓度下培养的M2巨噬细胞外泌体,且低氧能够显著上调巨噬细胞对外泌体的分泌;低氧能够明显上调巨噬细胞外泌体对骨肉瘤细胞增殖能力的促进作用,抑制骨肉瘤细胞发生凋亡,并上调骨肉细胞对顺铂的耐药性。结论在体外低氧能够促进骨肉瘤细胞对巨噬细胞的趋化能力,并进一步通过诱导巨噬细胞向M2型分化及提高M2型巨噬细胞外泌体的分泌,进而上调骨肉瘤细胞的增殖能力,抑制其凋亡,最终导致骨肉瘤细胞产生顺铂耐药性。     

转移性宫颈癌细胞衍生的外泌体miR-21-5p促进宫颈癌侵袭及转移

目的 探讨转移性宫颈癌组织的旁分泌作用对肿瘤细胞扩散的影响。方法 选择22例转移性宫颈鳞癌患者的手术标本（癌组织和癌旁组织）和血清标本,以及22名健康体检者的血清标本,采用逆转录-实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-21-5p在癌组织和癌旁组织中的表达水平;分别转染miR-21-5p模拟物/抑制剂到宫颈癌SiHa细胞,采用RT-qPCR、细胞集落形成实验、Transwell迁移实验、噻唑蓝（MTT）比色法、蛋白免疫印迹法、双荧光素酶报告分析差异;采用高速离心法提取血清外泌体;采用纳米颗粒跟踪分析（NTA）技术、蛋白免疫印迹法、透射电子显微镜（TEM）对外泌体进行表征鉴定;采用RT-qPCR 检测宫颈鳞癌患者和健康体检者血清外泌体中miR-21-5p的表达差异;采用受试者操作特征（ROC）曲线分析血清外泌体中miR-21-5p对肿瘤转移的诊断效能。结果 miR-21-5p在转移性宫颈鳞癌组织中表达上调;miR-21-5p过表达能促进宫颈鳞癌SiHa细胞集落形成以及细胞增殖与迁移（P均< 0.01）;双荧光素酶报告显示,miR-21-5p可以靶向快速发育生长因子同源蛋白2抗体（SPRY2）,对SPYR2的表达水平进行调控;miR-21-5p模拟物转染的SiHa细胞中,磷酸化丝裂原和应激激活的蛋白激酶、磷酸化核糖体S6蛋白激酶、磷酸化原癌基因C-RAF、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）激酶和磷酸化MAPK蛋白的表达均上调（P均< 0.05）。miR-21-5p在宫颈鳞癌患者的血清外泌体中上调（P < 0.05）。血清外泌体评估宫颈癌转移的ROC曲线下面积为0.9375。结论 转移性宫颈鳞癌患者组织中miR-21-5p通过外泌体传递促进肿瘤转移,其机制可能与靶向SPRY2/细胞外调节蛋白激酶/MAPK信号通路有关。     

肠上皮细胞来源整合素αVβ6对树突状细胞功能的影响

目的:研究肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IEC)来源的整合素αVβ6对骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)功能的影响.方法:分离、培养小鼠IEC和DC,IEC经卵清蛋白(ovalbumin,OVA)刺激后,多步离心法制备外泌体(exosome).应用免疫胶体金对外泌体中的整合素αVβ6进行定性,通过免疫磁珠技术,分离获取DC,流式细胞仪检测分离后DC纯度.然后将分离后的DC分5组,分别为空白组、OVA组、外泌体组、外泌体+抗整合素αVβ6抗体组、外泌体+羊抗小鼠IgG组,观察各组对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的反应.ELISA法检测DC在LPS刺激前后IL-12p70的表达.LPS刺激前活性转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)以及总TGF-β1的表达.结果:OVA组与空白组相比,总TGF-β1表达明显增高(226.636±40.355vs176.947±23.072,P<0.05),但活化TGF-β1表达无明显变化(P>0.05).空白组与外泌体+抗整合素αVβ6抗体组相比,活化TGF-β1表达无明显变化(P>0.05),但总TGF-β1表达明显增高(P<0.05).外泌体组和外泌体+羊抗小鼠IgG组与空白组相比,活化TGF-β1和总TGF-β1表达均明显增高(P<0.05).相比空白对照组,LPS刺激48h后外泌体组和外泌体+羊抗小鼠IgG组IL-12p70表达明显降低(P<0.05),OVA组及外泌体+抗整合素αVβ6抗体组IL-12p70表达无明显差异(P>0.05).结论:IEC来源整合素αVβ6能增加DC活性,以及TGF-β1和总TGF-β1的表达量,并拮抗LPS对BMDC的促成熟作用.     

小鼠胰岛微血管内皮细胞外泌体的提取和鉴定方法

目的：建立小鼠胰岛微血管内皮细胞来源的外泌体的提取和鉴定方法,为糖尿病胰岛微血管内皮受损的发病机制研究及重建胰岛微循环完整性的应用提供必要材料。方法选取小鼠胰岛微血管内皮细胞株（MS-1）细胞作为研究对象,取其培养上清液,经多步离心结合蔗糖／D2O垫超速离心方法获取提取物,然后采用透射电镜和Western blotting 法对提取物进行形态和蛋白成分分析,以确定其是否为外泌体。结果提取物呈形态均一的类圆形囊泡,有完整双层膜包绕,内部含有低电子密度物质。囊泡大小约为40～100 nm,可散在分布,也可聚集成团,提取物均阳性表达CD63、CD9和TSG101分子。结论经过形态和蛋白成分分析证实所提取到的物质正是MS-1细胞来源的外泌体,便于后续临床和基础研究工作的开展。     

间充质干细胞外泌体在骨关节炎治疗修复中的研究进展

骨关节炎(OA)是种以关节软骨退变为特征的疾病,其缺乏干预性药物,对于晚期OA患者往往通过关节置换术以维持生活质量。外泌体(exosomes)是一种由不同细胞分泌的细胞外囊泡,可以传递DNA、微小RNA(microRNA,miRNA)、mRNA、蛋白质等多种信息,并以此通过多种方式进行细胞间信号传递和功能调节。间充质干...     

外泌体在甲状腺癌诊治中的研究进展

甲状腺癌(Thyroid Carcinoma,TC)是世界上发病率增长最快的癌症之一,寻找新型高特异性、高灵敏度、无创的早期诊断和术后监测标记物成为当下研究热点。外泌体是细胞间信息物质交流的重要载体,由于其高稳定性、低细胞毒性、低免疫原性和高膜通透性等特征,使其具有成为无创、新型的疾病诊断和治疗手段的潜能。近年来,外泌体在甲状腺癌非侵入性疾病诊断、监测、给药、治疗和预后评估等领域取得了实质性突破。论文综述了TC来源的外泌体在肿瘤中发生和发展、诊断监测以及治疗中的应用前景。