腺病毒载体介导的内皮抑素基因治疗小鼠黑素瘤的实验研究

目的　探讨腺病毒载体介导的内皮抑素基因（Ad-mES）在体外和体内的生物学活性。方法　不同感染复度（MOI）的腺病毒体外感染靶细胞;RT-PCR法检测目的基因的表达;MTT法检测Ad-mES对靶细胞生物活性的影响。观察各组小鼠黑素瘤的生长、转移和生存率;免疫组化法鉴定肿瘤组织内内皮抑素蛋白的表达。电子透射电镜观察肿瘤组织内皮细胞、肿瘤细胞的凋亡情况。结果　腺病毒体外能够有效感染靶细胞,MOI为10,20,50,100,200,500时,B16F10细胞和ECV304细胞的腺病毒感染率分别为15.6%、35%、73%、88%、95.2%、97%和19%、35%、80%、90%、97%、98.5%。靶细胞明确表达内皮抑素基因;Ad-mES对B16F10细胞的增殖没有影响;而Ad-mES能抑制ECV304细胞的增殖,且随MOI增大,抑制内皮细胞增殖效果越强。瘤细胞接种后第8天,各组成瘤率100%。开始出现小鼠死亡的最早日：PBS组第16天、Ad-GFP组第18天、Ad-mES单剂、重复治疗组均在第20天。结论 Ad-mES体外和体内均影响靶细胞的生物学活性;Ad-mES治疗组小鼠平均生存时间延长（P < 0.05）,肿瘤体积增长减慢（P < 0.05）。     

超声爆破微泡介导内皮抑素基因抑制兔颈动脉粥样硬化的实验研究

目的 探讨利用超声爆破微泡介导内皮抑素(endostatin,ES)基因转染对兔颈动脉粥样硬化斑块内新生血管及斑块生长的抑制作用.方法 20只颈动脉粥样硬化模型兔随机分为三组:A组,微泡+超声;B组,对照质粒+微泡+超声;C组,ES质粒+微泡+超声.建模2周行超声爆破微泡介导基因转染,间隔3周时重复转染1次.建模14周时行超声及数字减影血管造影(DSA)检查,病理检测病变血管新生内膜、斑块内新生血管及ES表达情况.结果 超声显示A组和B组内膜明显增厚,斑块较大,管腔明显狭窄,收缩期峰值流速(PSV)增加,C组上述指标明显较A组和B组低(P＜0.05).病理检测C组内中膜厚度(IMT)、内膜厚度(IT)、内中膜厚度比(IT/MT)、内膜面积(IA)、内中膜面积比(IA/MA)及新生内膜狭窄率与A组和B组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).C组颈动脉新生血管及血管内皮生长因子(VEGF)表达均较A组和B组低,内膜及胫前肌可见较多ES表达,而A组和B组无明显ES表达.结论 一定超声辐照条件下,超声爆破微泡介导ES基因转染可抑制兔颈动脉粥样硬化病变的发展,有可能为动脉粥样硬化性疾病的基因治疗提供一种安全有效的方法 .

Abstract：

Objective To explore the inhibition effect on angiogenesis and plaque growth of carotid atherosclerosis by transfection of endostatin gene using microbubbles combined with ultrasound exposure.Methods Twenty rabbit models of carotid atherosclerosis were randomly divided into 3 groups:group A,microbubble+ ultrasound; group B, control plasmid + microbubble + ultrsound; group C, ES plasmid +microbubble+ ultrasound. Two weeks after surgery, ultrasound/microbubble mediated gene transfer was performed,and it was performed once again three weeks after the first transfection. Ultrasonography and digital subtraction angiography(DSA) were performed at the time of 14 weeks. The carotid arteries were taken to detect the neointima and angiogenesis, and the expression of endostatin was detected using pathological means. Results The imagings of ultrasound showed that the intima in group A and B were thick significantly with larger plaques, and the lumen became stenosis with the peak systolic velocity increasing,however,in group C,the parameters mentioned above were significantly less than those of group A and B ( P＜0.05). Pathological results displayed that intima-media thickness (IMT), intima thickness (IT), intima thickness/media thickness (IT/MT), intima area (IA), intima area/media area (IA/MA) and neointimal stenosis rates were greater in group A and B, however, they were less in group C ( P＜0.05).The number of neovascularization and vascular endothelial growth factor(VEGF) expression in group A and B were more than those of group C. There was more endostatin positive expression in carotid arteries and anterior tibial muscles of group C, while there was nearly no expression in group A and B. Conclusions Under the conditioned ultrasonic irradiation, ultrasound/microbubble mediated endostatin gene transfection can inhibit the development of carotid atherosclerosis in rabbits, which might provide a safe and effective strategy for gene therapy of atherosclerotic disease in future.     

一线化疗方案联合血管生成抑制剂治疗四肢成骨肉瘤随机、对照、多中心研究的初步报告

 目的 评价一线化疗方案联合重组人血管内皮抑制素治疗四肢骨肉瘤的疗效及安全性,为寻找骨肉瘤化疗新的药物和评价化疗方案提供依据。方法 采用随机、对照和多中心的研究方法,将63例确诊为骨肉瘤的患者随机分为试验组(32例)和对照组(31例),剔除和脱落9例,有效病例54例(试验组29例、对照组25例)。试验组采用阿霉素、顺铂、氨甲喋呤、异环磷酰胺联合重组人血管内皮抑制素方案,对照组使用阿霉素、顺铂、氨甲喋呤、异环磷酰胺方案。采用中位无进展生存时间、临床受益率、无进展生存率、保肢率、生存率等指标来评价两组疗效。通过比较两组不良事件发生率来评价重组人血管内皮抑制剂的安全性。结果 试验组中位无进展生存时间18.9个月,对照组为13.1个月,两者差异无统计学意义。试验组临床受益率89.7%、无进展生存率37.9%、生存率65.5%、保肢率89.7%,对照组分别为88.0%、36%、68%和96.0%,上述四项指标两组间差异均无统计学意义。结论　在目前随访期内采用重组人血管内皮抑制剂治疗在控制肿瘤进展和患者生存方面与对照组比较尚未见明显差异。使用重组人血管内皮抑制剂未发现相关的毒性反应,也未有因其而增加基础化疗毒性反应的报告。     

血管内皮抑素在喉癌声门上型中的表达

目的检测血管内皮抑素（Endostatin）在喉癌声门上型组织中的表达,分析其与临床病理特征的关系。方法收集40例喉癌声门上型组织,取大于癌旁2 cm以上的正常喉黏膜组织40例作为对照组,采用免疫组化SP法检测Endostatin的表达情况。结果 Endostatin的表达在喉癌组织中明显高于癌旁组织,差异有统计学意义（χ2=10.368,P〈0.05）。无淋巴结转移的癌组织中Endostatin阳性表达率明显高于有淋巴结转移的癌组织,差异有统计学意义（χ2=9.726,P〈0.05）。结论 Endostatin可抑制喉癌的生长和转移,为预测喉癌的预后提供了一定的理论依据。     

促血管生成素-2、内皮抑素在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的 探讨促血管生成素-2(Ang-2)和内皮抑素(ES)在人脑胶质瘤中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学的方法 ,对108例脑胶质瘤和5例正常脑组织标本中ES和Ang-2的表达进行测定.应用原位杂交技术检测ES mRNA在人脑胶质瘤中的表达.结果 Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤中的ES(0.0657±0.0038)和Ang-2(0.0286±0.0042)表达水平明显高于Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤(分别为0.0349±0.0048、0.0084±0.0018)以及正常脑组织(0、0),差异有统计学意义(P<0.01);Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤中的ES mRNA(0.0310±0.0041)明显高于Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤(0.0152±0.0031)和正常脑组织(0)(P<0.01);胶质瘤中Es与Ang-2的比值和胶质瘤病理分级呈负相关(r=-0.810,P<0.01).结论 ES和Ang-2的协同作用可能在人脑胶质瘤细胞侵袭性生长及恶性发展中起重要作用,且与胶质瘤的恶性程度及预后有关.     

重组人内皮抑素提取方法的优化及其对膀胱癌的抑制作用

目的 摸索重组人内皮抑素(rhES)蛋白的最佳表达条件.探索内皮抑素(Es)对膀胱癌实体肿瘤及细胞系的抑制作用.方法 分别从不同异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、加IPTG 时机、表达时间等几个方面对 rhES 的蛋白表达条件进行摸索和优化.活性检测:(1)动物实验:观察内皮抑素对裸鼠皮下移植瘤的生长情况的影响.(2)细胞实验:MTT法、肿瘤细胞生长曲线观察内皮抑素对T-24膀胱癌细胞系的作用.结果 rhES 在大肠杆菌中的表达量占总菌体蛋白的58.65%,纯化后的蛋白纯度为96.22%.动物实验:rhES的抑瘤率为66.8%.细胞实验:MTT实验中rhES的半数抑制浓度IC_(50)=22μg/ml;肿瘤细胞生长曲线表明第7天时rhES组的细胞数比对照组减少了58.75%.结论 本实验所优化的最佳表达条件可获得高表达、高活性的rh Es蛋白,Es不但对裸鼠接种的膀胱癌有抑制作用,对膀胱癌细胞系也有抑制作用.     

重组人血管内皮抑素抗白血病作用的初步研究

目的 探索重组人血管内皮抑素(rhES,商品名恩度)体外对急性白血病细胞生长的抑制作用.方法 应用锥虫蓝拒染法、MTT法、透射电子显微镜(电镜)及Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术等方法 检测rhES体外对正常人及急性白血病患者骨髓原代细胞增殖和凋亡的影响.结果 50、100和200μg/ml rhEs作用HL-60细胞72 h,细胞增殖抑制率分别为11.6%、30.4%和33.5%;100和200μg/ml rhES作用NB4细胞72 h,细胞增殖抑制率分别为12.4%和16.4%,其抑制急性白血病细胞株增殖作用呈浓度及时间依赖性;rhES体外浓度0～400μg/ml对正常人骨髓单个核细胞的生长活性无明显抑制作用;50～200 μg/ml rhES对急性白血病患者原代细胞有抑制生长活性的作用,并且其抑制作用呈浓度及时间依赖性.rhES在体外浓度为100 μg/ml时,与HL-60和NB4细胞作用72 h,透射电镜观察可见典型的细胞凋亡的表现,流式细胞术检测凋亡率分别为19.6%和20.8%.结论 rhES在体外有抑制急性白血病细胞增殖和诱导凋亡的作用,是治疗急性白血病潜在的有效药物.     

四联检测在结核性与恶性胸腔积液中的临床价值

目的探讨腺苷脱氨酶(ADA)、C反应蛋白(CRP)、癌胚抗原(CEA)和内皮抑素(Endostatin)对恶性及结核性胸腔积液鉴别诊断的价值。方法分别采用酶比色法测定ADA值;采用速率散射比浊法测定CRP浓度;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定CEA和内皮抑素水平。并根据临床资料进行回顾性分析,对各组的ADA、CRP、CEA、内皮抑素水平进行比较。结果在结核性胸腔积液中,ADA[(54.73±20.17)U/L]和CRP[(32.48±19.17)mg/L]均明显高于癌性胸腔积液(P0.01);相反,在癌性胸腔积液中,CEA[(55.45±37.66)μg/L]与内皮抑素[(138.09±81.11)μg/L]的均值都显著高于结核性胸腔积液(P0.01)。结论ADA、CRP、CEA和内皮抑素四联检测在结核性与恶性胸腔积液中的鉴别诊断中具有显著的临床意义。     

一氧化氮/环鸟苷酸信号传导通路对高葡萄糖环境中人脐静脉内皮细胞内皮抑素表达的影响

目的 研究一氧化氮/环鸟苷酸信号传导通路对高葡萄糖时人脐静脉内皮细胞表达内皮抑素的调控.方法 采用5.6、11.2、22.4 mmol/L葡萄糖培养人脐静脉内皮细胞72 h,硝酸还原酶法测定培养上清液中一氧化氮含量,Western blot法检测内皮抑素蛋白表达水平.在11.2 mmol/L葡萄糖作用72 h(对照组)...     

转内皮抑素基因抑制黑色素瘤细胞的高转移能力

目的验证转内皮抑素基因抑制高转移性黑色素瘤细胞的转移能力。方法将含胰岛素信号肽序列的pcDNA3．1-Endo真核表达载体转染小鼠黑色素瘤高转移细胞株B16,运用RT-PCR和Western-blot验证Endo的表达后,进行黑色素瘤细胞的粘附实验、体外侵袭和运动实验以及C57BL／6小鼠的肺转移试验。结果转内皮抑素基因能明显抑制黑色素瘤细胞的粘附、体外侵袭和运动以及肺转移能力,其中粘附抑制率36．4％,体外侵袭抑制率48．4％,细胞运动功能抑制率52．1％,肺转移抑制率67．3％。结论转内皮抑素基因能明显抑制黑色素瘤细胞的高转移能力。