双抗体夹心ELISA定量检测血清Cap43蛋白方法的建立与评价

目的建立定量检测血清Cap43蛋白表达双抗体夹心ELISA法。并初步探讨血清Cap43蛋白表达水平在肺癌患者与正常人群间有无差异，以及该蛋白表达水平的高低与肺癌组织学分型间的关系。方法建立双抗体夹心ELISA方法对肺癌患者与正常人群血清中Cap43蛋白的含量进行定量检测。结果双抗夹心ELISA包被Ⅰ抗羊抗人NDRGl多克隆抗体（PcAb）、Ⅰ抗兔抗人Cap43PcAb以及辣根酶（HRP）标记的羊抗兔Ⅱ抗的最佳工作浓度分别为1：750，1：1200，1：350，标准蛋白曲线的回归方程为：y=0．53566＋0．00046x，R2=0．9939，P〈0．0001。应用该方法初步检测结果显示：肺癌组血清标本Cap43蛋白含量明显高于正常对照组（P〈0．01），且肺腺癌组病人血清Cap43含量高于肺鳞癌组（P〈0．01）。该方法的敏感度（SE）为84．51％，特异度（SP）为35．00％。结论建立了一种敏感度高，重复性好的定量检测血清中Cap43蛋白的双抗体夹心ELISA方法；Cap43蛋白在肺癌患者血清中呈现高表达，且在肺腺癌组病人血清中表达水平高于肺鳞癌组。     

三种国产乙型肝炎病毒基因荧光定量试剂检测结果分析

目的:探讨上海复星、深圳匹基、上海科华三种国产乙型肝炎病毒基因(HBV-DNA)荧光定量试剂的临床检测结果相互之间是否存在差异。方法:将相同的标本分别用三种国产HBV-DNA荧光定量试剂进行HBV-DNA荧光定量测定。然后再对检测结果进行对比,分析相互之间是否存在差异。结果:23例已知的慢性乙型肝炎患者标本,3例已知正常标本分别用三种国产HBV-DNA荧光定量试剂进行HBV-DNA定量检测,结果显示三种国产试剂的HBV-DNA定量检测结果相互之间差异小于一个数量级占91.4%,大于一个数量级小于二个数量级的占8.6%,经统计学分析差异无显著意义(P>0.05)。结论:上述三种国产HBV-DNA荧光定量试剂在同一套设备上的检测结果相互之间差异很小,有很好的准确度,它们的检测结果可以相互进行比较。     

早期梅毒实验室检测方法的评价

目的:评价在梅毒早期诊断中,四种梅毒血清学检测方法的比较及在临床诊断中应用价值。方法:应用快速血浆反应素试验(RPR)、梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测182例血清标本。结果:RPR、TPHA、TPPA、ELISA的敏感性分别为88.3%、92.2%、94.8%、98.7%,特异性分别为85.7%、94.3%、96.2%、98.1%,其中RPR、TPHA、TPPA与灵敏性、特异性较好的ELISA比较,RPR、TPHA、TPPA的敏感性较低,差异有显著性(P<0.05),特异性方面,除TPHA、TPPA差异无显著性(P>0.05),RPR低于ELISA,差异有显著性(P<0.05);RPR滴度随治疗时间的增加而逐渐下降。结论:ELISA方法操作简单,结果判断可标准化,特异性高,敏感性高,可作为早期梅毒检测较理想的方法,RPR试验可用于梅毒治疗期间的疗效判定。     

血清中葡萄糖6-磷酸异构酶在类风湿关节炎中的诊断价值

目的探讨血清中葡萄糖6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isomerase,GPI)抗原在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者诊断中的意义。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测70例RA患者,26例其他风湿病患者和30例健康对照血清中GPI抗原的浓度,RA患者同时还检测了类风湿因子(RF)。结果70例RA患者血清中GPI浓度为(2.01±1.01)μg/mL,26例其他风湿性疾病组为(0.41±0.18)μg/mL,30例健康对照组为(0.090±0.030)μg/mL,RA患者血清中GPI浓度显著高于其他风湿病组和健康对照组(P<0.01),在RA活动组和RA非活动组,亦有显著差异(P<0.05)。通过分段回归分析发现GPI的浓度和RA病情活动成正相关。GPI抗原对RA检测的敏感性为61.4%,特异性为93.3%。结论GPI在部分RA患者血清中显著升高,有可能成为诊断RA及判断其疾病活动性的一个新指标。     

四种方法进行HIV抗体筛查的结果分析

目的:对比分析四种方法筛查HIV抗体的检测结果,探索最佳初筛实验方法。方法:用四种方法同时检测我区556例住院患者和HIV自愿咨询检测人员血清并对阳性对照系列稀释血清同时检测。结果:硒标法假阳性率高,敏感性及特异性均低于其它三种方法;PA(明胶颗粒凝集试验)法有较高的灵敏度;ELISA(酶联免疫吸附试验)法第3代、第4代试剂敏感性、特异性均很高。结论:ELISA第3代试剂(双抗原夹心法)仍是实验室进行HIV抗体初筛的首选方法。     

MEIA法与ELISA法检测26例血清HBsAg和HBeAg的比较

目的：比较微粒子酶免疫分析法（MEIA）与酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清HBsAg和HBeAg的差异。方法：选择26例经ELISA法检测已确定乙肝五项中HBsAg阴性而HBeAg和HBcAb阳性（其中7例HBsAb阳性）的患者血清,应用MEIA法再次检测乙肝五项。结果：MEIA法检测结果显示,21例患者血清HBsAg呈现阳性（其中6例HBsAb阳性）,1例患者血清HBsAg仍呈现阴性（其HBsAb阳性）,4例患者血清HBsAg和HBeAg均呈现阴性。结论：MEIA法可减少假阴性、假阳性的发生,优于ELISA法。     

珍香胶囊治疗子宫内膜异位症作用机制的初步研究

目的探索中药珍香胶囊治疗大鼠子宫内膜异位症的机制。方法采用自体子宫移植方法建立大鼠子宫内膜异位症模型。4周后，将大鼠随机分组进行药物治疗（珍香胶囊组、内美通组、空白对照组）。治疗4周后，免疫组化方法检测大鼠异位内膜组织的雌激素（ER）α和β受体、血管内皮生长因子（VEGF）、芳香化酶（Aromatase）。ELISA方法检测大鼠血清、腹腔液中白介素（IL）-6、VEGF、肿瘤坏死因子（TNF）α。结果疗效：珍香胶囊能够抑制、破坏异位内膜的增长，其作用与内美通相似。ER—α、ERβ、VEGF、IL-6、Afomatase在对照组及各用药组大鼠的移植组织中均有表达，各组之间无明显差异（P〉0．05）；ELISA检测各组大鼠血清、腹腔液中VEGF、IL-6、TNF—α水平，均未见阳性表达。结论珍香胶囊治疗大鼠子宫内膜异位症可能并不影响异位病灶组织的雌激素受体、血管内皮生长因子、芳香化酶，不影响大鼠血液、腹腔液的各种因子，其确切治疗机制目前尚不清楚。     

白细胞介素-18在特发性血小板减少性紫癜中作用的研究

目的 探讨白细胞介素-18(IL-18)与特发性血小板减少性紫癜(ITP)发病的关系,研究其在ITP发病中的作用及临床意义.方法 酶联免疫吸附测定(ELISA)测定血浆IL-18,对36例ITP患者和正常对照组血浆IL-18的水平进行分析.结果 ITP组血浆IL-18含量为(538.31±111.33)pg/ml,正常对照组血浆IL-18含量为(489.44±49.07)pg/ml.IL-18含量与血小板数量呈显著性负相关(r=-0.395,P＜0.05).结论 ITP发病时患者血浆中的IL-18水平比正常对照组明显升高,IL-18与ITP发病密切相关.     

基于开放式三明治酶联免疫分析的雌二醇检测方法的建立

目的:通过建立开放式三明治酶联免疫分析方法（OE-ELISA）,对雌二醇进行检测。方法:通过基因拼接构建质粒后在原核表达系统中制备小分子泛素相关修饰物蛋白-大肠杆菌麦芽糖结合蛋白-抗体轻链可变区（sumo-MBP-VL）和碱性磷酸酶-抗体重链可变区（ALP-VH）融合蛋白,并从产量和可溶性角度对两种蛋白的表达条件进行优化。将得到的两种蛋白纯化后分别作为包被抗体和酶标抗体,建立检测雌二醇的OE-ELISA方法。应用竞争ELISA和OE-ELISA测定不同浓度的雌二醇标准品,绘制标准曲线并计算两种方法的敏感性。结果:在质粒中加入sumo标签后,实现了sumo-MBP-VL融合蛋白的可溶性表达。在Rosetta 宿主菌中37℃诱导后得到大量的ALP-VH和sumo-MBP-VL融合蛋白。OE-ELISA测定雌二醇标准品的标准曲线为y=0.029 6x+1.302 9,r2=0.9961,敏感性为532 pg/mL,优于竞争ELISA 803 pg/mL的敏感性。结论:成功建立了检测雌二醇的OE-ELISA方法。     

ELISA(双抗体夹心法)共系统检测抗-HBe与HBeAg结果分析

目的探讨用双抗体夹心法检测HBeAgEIA商品试剂盒共系统检测抗-HBe与HBeAg的可行性及结果判定方法。方法用双抗体夹心法检测HBeAgELISA试剂盒结合配套中和(竞争)抑制法检测抗-HBeELISA试剂盒中的中和试剂(HBeAg)等试剂组分共系统检测1000份随机血清(浆)标本抗-HBe与HBeAg,并分别以常规ELISA检测抗-HBe与HBeAg作平行对照。结果ELISA共系统检测抗-HBe与HBeAg易于目测;它们的比色判定临界值同常规ELISA易于设定(或使用临界值血清,检测HBeAg时也使用抗-HBe阴性对照),与常规ELISA检测比色判定无显著性差异(配对计数资料比较的χ2检验:相关检验均为P<0.005,υ=1,a=0.05;抗-HBe优劣检验(ELISA共系统检测抗-HBe前两项COV与抗-HBe临界值血清)均为P>0.900,υ=1,a=0.05;HBeAg优劣检验依次为HBeAg临界值血清:(1)P>0.900,υ=1,a=0.05,抗-HBe阴性对照;(2)0.100>P>0.050,υ=1,a=0.05,ELISA共系统检测HBeAgCOV;(3)0.100>P>0.050,υ=1,a=0.05,但χ21<χ22<χ23)。结论用双抗体夹心法检测HBeAgELISA试剂盒与配套中和(竞争)抑制法检测抗-HBeELISA试剂盒试剂组分重组共系统检测抗-HBe与HBeAg是可行的,两种试剂盒能够相互替代,在有优质现代酶标仪的实验室,可以省去常规ELISA试剂盒其中之一,实用价廉,值得推广。