流式细胞分析技术在中医药防治肿瘤研究中的应用

流式细胞技术是综合单克隆抗体技术、激光技术和电子计算机技术等，利用流式细胞仪(flow Cytometer，FCM)为工具快速测量细胞的物理或化学性质，如大小、内部结构、DNA、蛋白质、抗原等，并可对其分类、收集的高新技术。该技术已成为现代细胞生物学、免疫学、肿瘤学、血液学等领域不可缺少的研究手段。近年来流式细胞术被广泛应用到中医药研究的各个领域，     

贲门腺癌细胞多药耐药性及化疗药物敏感试验的临床应用

选取1999年6月～2000年6月我院和江苏省人民医院胸外科收治的贲门癌患者26例，均经胃镜检查诊断为贲门腺癌后行根治性切除术，手术未能切除者不纳入观察组，切除标本采用免疫组织化学法进行分析。对贲门腺癌手术切除标本中多个耐药基因糖蛋白P-170、谷胱甘肽S-转移酶(GST-π)和DNA拓扑异构酶-Ⅱ(TOPO-Ⅱ)的表达进行比较，并结合临床进行体外药物敏感试验后，给予患者个体化化疗。经3年的观察，现报道如下。     

DNA芯片技术的临床研究应用

DNA芯片技术具有快速、高效、大规模、高容量、高度并行性等特点。随着临床各学科的相关DNA芯片相继问世,为生命科学、医学、化学等领域的研究提供了一个强有力的工具。本文对近年来DNA芯片技术的研究应用进行了综述。     

PCR-RSSO基础上HLA-Ⅰ、Ⅱ基因分型的研究

目的通过对PCR-DNA技术的分析,探讨人类白细胞抗原(HLA)基因分型方法。方法采用PCR反向序列特异性寡核苷酸(polymerase chain reaction-reverse sequence specific oligonucleotide,PCR-RSSO)杂交技术,建立改良半量扩增体系全自动HLA-I、Ⅱ等位基因分型方法,进行了635份血液标本HLA-A、B、C、DR、DQ等位基因分型,其中166份DNA同时采用序列特异性引物技术(PCR-SSP)和手工全量扩增体系PCR-RSSO技术。对全自动半量PCR-RSSO、PCR-SSP、手工PCR-RSSO 3种方法做两两比较。结果全自动半量PCR-RSSO的分型成功率为98.4%(3 124/3 175),PCR-SSP为98.8%(656/664),手工PCR-RSSO为88.3%(733/830)。经χ2检验,全自动半量PCR-RSSO与PCR-SSP的分型成功率无统计学差异,与手工PCR-RSSO有显著差异(P<0.05)。结论PCR-RSSO可识别HLA-Ⅰ,Ⅱ共706个等位基因,覆盖WHO命名委员会2000年公布的936个等位基因的75.43%;对706个HLA等位基因的分型均为中~高分辨率,有分辨纯合子等位基因的能力;易长期保存书面的实验原始资料,即杂交条;具有成本低、劳动强度低、省时和DNA消耗量少等优点。PCR-RSSO适合于造血干细胞移植和建立造血干细胞及脐带血干细胞库的组织配型。     

耐药相关蛋白P-gp、GST-π、TopoⅡ在原发性肝癌中的表达及其临床意义

目的探讨原发性肝癌组织中的P-糖蛋白（P—glycoprotein，P—gP）、谷胱甘肽-S转移酶-π（glutahione-S—transferase-π，GST-π）、DNA拓扑异构酶Ⅱ（DNA—topoismerase，TopoⅡ）耐药基因的表达及其临床意义。方法采用免疫组化方法检测35例肝癌组织、20例癌旁和10例肝硬化组织中P—gP、GST-π、TopoⅡ的表达，并对其组织病理指标及3年生存率进行综合分析。结果①35例肝癌中的P—gp、GST-π、TopoⅡ的阳性表达率分别为85．7％、71．4％、31．4％。②肝癌组织中P—gp、GST-π表达显著高于癌旁组织及肝硬化组织。③P—gp＋GST-π＋TopoⅡ阳性表达率为17．1％，P—gp＋GST-π、P—gp＋TopoⅡ和GST-π＋TopoⅡ阳性率分别为60％、14．3％、2．8％，其中P—gP＋GST-π和GST-π＋TopoⅡ的阳性表达具有相关性（P〈0．01）。④TopoⅡ表达阳性者的3年生存率低于阴性者。结论①原发性肝癌多药耐药与其P—gp、GST-π、TopoⅡ表达有关。②对肝癌患者化疗前进行耐药基因检测，对患者化疗用药具有指导意义，有助于联合用药的合理选择，提高疗效及延长患者生存期。     

应用DHPLC筛查人类mtDNA高变区I的异质性

【目的】检测人类mtDNA HVI区的异质性，建立有效的筛查低水平异质性DNA的技术。【方法】扩增人mtDNA的HVI区内269bp的片段，以不同比例混合相差一个碱基的2种DNA片段的PCR扩增产物，配制异质性DNA模型，用变性高效液相色谱技术(DHPLC)检测，确定最佳检测条件。【结果】应用DHPLC检测HVI区的片段(269bp)，最低可检测出含量为5％的异质性样本。在80例无关个体的mtDNA样本中，共检测到15例具有异质性。【结论】所建立的PCR-DHPLC方法可用于检测mtDNA的异质性。     

抗DNA酶B与ASO联合测定对小儿链球菌感染的诊断价值

目的:探讨抗DNA酶B与抗链球菌溶血素"O"(ASO)联合测定对小儿链球菌感染的诊断价值.方法:分别测定126例小儿链球菌感染患者(分成4组)和50例健康人群抗DNA酶B和ASO水平,计算各组别的阳性率,并进行分析.结果:急性不典型风湿热组、肾炎上感组、急性咽炎组等组别,抗DNA酶B与ASO联合测定阳性率差异无显著性(P>0.05).而肾炎皮损组、肾炎恢复期组差异有极显著性(P<0.01).结论:抗DNA酶B与ASO联合检测可以提高小儿链球菌感染的检出率.     

拉曼光谱技术在肿瘤与DNA损伤研究中的应用进展

拉曼光谱是由分子对入射光产生的频率发生较大变化的非弹性散射现象所形成的发射光谱，1928年由印度物理学家拉曼(Raman)发现。每一种物质(分子)有自己特征的拉曼光谱，因此可以用拉曼光谱表征这一物质，因而拉曼光谱是研究物质结构的重要手段之一。1939年拉曼光谱成为非破坏性的分析方法之一。长期以来由于传统色散型拉曼光谱仪结构复杂，并且有荧光干扰等问题，所以拉曼光谱的应用受到限制。