SVF细胞影响移植脂肪LPL表达的实验研究

目的 探讨脂肪移植后脂蛋白脂肪酶(Lipoprotein lipase,LPL)在SVF(Stromal vascular fraction)辅助移植脂肪组织中的表达模式。方法 本实验以新鲜分离的自体SVF细胞辅助移植的脂肪组织为实验组,以脂肪组织与等量生理盐水的混合物为对照组,随机在裸鼠背部两侧注射建立动物模型,对两组移植物进行脂周蛋白免疫组化染色分析、LPL免疫组化染色分析和LPL蛋白含量测定。结果 TPL蛋白含量测定及LPL免疫组化染色分析显示,随着移植时间的延长,实验组和对照组LPL表达逐渐下降,在第2周、第3周、第4周时,实验组LPL表达明显高于对照组。脂周蛋白免疫组化染色分析显示,两组脂肪移植后的存活细胞均逐渐减少,但第2周、第3周、第4周实验组存活细胞数高于对照组。结论 SVF促进脂肪组织表达LPL,表达差异在移植后的第2周开始出现,这可能与SVF提高脂肪组织存活率和ASCs(Adipose-derived stromal cells)成脂分化有关。     

辛伐他汀对大鼠平滑肌祖细胞和内皮祖细胞增殖的影响

目的 观察辛伐他汀对平滑肌祖细胞(SPC)和内皮祖细胞(EPC)增殖的影响,筛选新一代包被洗脱支架药物. 方法 采用密度梯度离心法从大鼠骨髓获取单个核细胞,将其接种在纤维连接素包被培养板,加入小同浓度辛伐他汀(0.01～10.00μmol/L)培养6～48 h后,平滑肌肌动脉蛋白免疫荧光染色鉴定骨髓源性SPC,激光共聚焦显微镜鉴定异硫氰酸荧光素结合的植物凝集素(FITC-UEA-I)和DiI结合的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)双染阳性细胞为正在分化的EPC,并在倒置荧光显微镜下计数. 结果 辛伐他汀显著抑制骨髓源SPC增殖,0.01μmol/L辛伐他汀作用24 h,SPC数量减少了(5.8±3.1)%(对照组与0.01μmol/L辛伐他汀组分别为4070±184与3833±126,P<0.05).辛伐他汀可促进EPC增殖,其促进作用随辛伐他汀浓度增加及作用时间延长而增加,1.00μmol/L辛伐他汀作用24 h EPC数量增加(2.0±0.1)倍(对照组与1 μmol/L辛伐他汀组分别为1249±146与3762±138,P<0.01). 结论 辛伐他汀抑制SPC增殖,促进EPC增殖,局部应用有抑制再狭窄和促进损伤血管再内皮化可能.     

内皮细胞凋亡与肺动脉高压

随着肺动脉高压研究的不断深入,肺血管内皮细胞凋亡在肺动脉高压形成过程中的重要作用被逐步认识。多种疾病和环境因素导致肺血管内皮损伤、内皮细胞凋亡增加、功能障碍,从而促进肺动脉平滑肌细胞和成纤维细胞增殖、肺动脉重构和血栓形成;肺血管内皮细胞凋亡还诱导产生凋亡抵抗表型的内皮细胞过度增殖,形成丛样病变和肺血管闭塞,最终导致严重肺动脉高压。因而在肺动脉高压发生发展的不同时期,调控肺血管内皮细胞凋亡可能是预防和治疗肺动脉高压的一种新策略。     

SEA诱导人PBMC对结肠癌Caco-2细胞的杀伤效果观察

目的通过蛋白注入和基因转染两种形式,观察金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA）诱导人外周血单核细胞（PBMC）对结肠癌Caco-2细胞的杀伤效果。方法密度梯度离心法分离PBMC,用不同浓度SEA诱导;MTT法测定PBMC对Caco-2细胞的杀伤率;用阳离子脂质体法将重组质粒pEGFP-N1-SEA转染至Caco-2细胞,检测PB—MC对该细胞的杀伤率。结果在一定范围内,随着SEA浓度的升高,PBMC对Caco-2细胞的杀伤率显著上升,在36h、高效靶比、高SEA浓度的情况下,杀伤率可达57．23％;将pEGFP-N1-SEA转染至Caco-2中,转染效率达55％,同时能显著提高PBMC的杀伤率,转染60h后杀伤率可达54．62％。结论通过蛋白注入和基因转染两种形式,SEA均能诱导并增强PBMC对Caco-2细胞的杀伤效果。     

经冠状动脉移植自体BM-MNCs治疗猪急性心肌梗死的作用

目的探讨冠状动脉内移植自体骨髓单个核细胞（BM—MNCs）治疗猪急性心肌梗死的有效性。方法实验动物分为冠脉内移植MNCs组（n=6）及冠脉对照组（n=5）。冠脉内移植BM—MNCs后4周观察移植细胞归巢情况、小血管密度、心功能变化。结果冠脉内MNCs移植后4周,心肌细胞间可见发蓝色荧光的移植细胞,散在分布,心肌细胞间有较多新生毛细血管并可见新生的心肌样细胞。移植组小血管密度、左室射血分数（LVEF）及短轴缩短率（FS）明显高于对照组（P〈0．01）,左室舒张末期内径（LVEDd）低于对照组（P〈0．05）。结论经冠脉移植的BM—MNCs可归巢到宿主心肌,有促进缺血心肌血管新生、改善左室收缩功能、减轻心室重构的作用。     

内皮前体细胞及其与肺疾病关系的研究进展

内皮前体细胞存在于骨髓、外周血和脐带血中,可以分化为成熟的内皮细胞.不仅参与胚胎期的血管发育,也在成年的血管新生中起作用.肺部疾病尤其是炎症性疾病,几乎都存在血管内皮的损伤与修复机制.本文就内皮前体细胞的来源、生物学特征和功能,及其在肺疾病中的研究进展进行概述.     

库普弗细胞条件培养基对原代培养肝细胞的细胞毒性

目的 探讨内毒素血症时库普弗细胞激活对肝细胞损伤的作用机制.方法 用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌流,Percoll密度梯度离心分离、纯化SD大鼠肝细胞和库普弗细胞,制备内毒素(LPS)刺激的库普弗细胞的条件培养基(KCCM)并作用于肝细胞,检测肝细胞培养基丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测KCCM对大鼠原代肝细胞活性的影响.结果 KCCM作用于肝细胞2 h后,肝细胞培养基中ALT、AST及LDH含量均明显升高(P＜0.05),在2～4 h内随时间延长ALT、AST及LDH含量均逐渐增加,呈明显的时间-效应关系;MTT结果显示,KCCM作用后12 h、24 h时间点对肝细胞具有明显损伤作用(P＜0.05).结论 内毒素诱导库普弗细胞释放的可溶性因子作用一定时间后可直接对肝细胞造成损伤.     

菊花总黄酮对转染RSV的A549细胞RANTES及MCP-1表达的影响

【目的】探讨菊花总黄酮对呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus,RSV)转染 A549细胞诱导激活正常 T 细胞表达和分泌因子(regulated upon activation ,normal Tcell expressed and secreted ,RANTES)及单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)释放作用影响。【方法】实验分为正常对照组,病毒对照组,菊花总黄酮组和巴韦林组。在人喉癌上皮细胞(Hep-2细胞)和气道上皮细胞(A549)分别加入菊花总黄酮和巴韦林的含药维持液,测定上述两种药物的最大无毒浓度；RSV 转染 Hep-2细胞,观察药物对 RSV 的病毒抑制作用；RSV 转染 A549细胞,ELISA 法测细胞趋化因子 RANTES 及 MCP-1含量。【结果】菊花总黄酮组50%有效率优于巴韦林组,差异有统计学意义(P <0.05)；菊花总黄酮组 RANTES、MCP-1明显降低,但高于正常细胞组,优于巴韦林组,差异有统计学意义(P <0.05)。【结论】菊花总黄酮能够抑制 RSV 活性,明显降低 A549细胞释放 RANTES、MCP-1,缓解患儿的呼吸道症状。     

2-甲氧基雌二醇对白血病细胞K562增生、凋亡及细胞周期的影响

 目的 探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）对体外培养的慢性粒细胞白血病（CML）急变期细胞系bcr-abl（+）K562细胞增生、凋亡及细胞周期的影响。方法 将不同浓度和作用时间的2-ME与K562细胞共同培养，采用相差显微镜观察细胞的形态学变化；四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测2-ME对K562细胞增生的抑制作用；流式细胞术分析2-ME对K562细胞凋亡及细胞周期的影响。结果 1~ 16μmol／L浓度的2-ME在24、36、48及60 h均可明显抑制K562细胞增生，并在一定范围内呈时间和剂量依赖性；2-ME作用后G0／G1期细胞增加，并伴随细胞凋亡峰和凋亡率的升高。结论 2-ME可抑制K562细胞增生，诱导其凋亡，为2-ME的临床应用提供实验依据。     

白藜芦醇对人食管癌EC109细胞的生长抑制及诱导凋亡作用

背景与目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)抑制人食管癌EC109细胞生长、诱导凋亡的作用机制.材料与方法:不同浓度Res作用EC109细胞后,采用MTF法检测Res对人食管癌EC109细胞生长的抑制作用;Hoechst33258荧光染色和倒置相差显微镜观察EC109细胞的形态学改变;流式细胞术分析细胞周期分布和细胞凋亡.结果:Res(15.62～500 μmol/L)可以抑制人食管癌EC109细胞的生长,且具有时间和剂量依赖性(r=0.918,0.996,P＜0.05、0.01),500 μmol/L Res作用72 h后对细胞的生长抑制率可达87.43%.500 μmol/L Res作用48 h,荧光染色及相差显微镜下可见典型凋亡细胞形态学改变.细胞周期分析显示Res能诱导EC109细胞在S期停滞,抑制细胞DNA的合成并可明显诱导EC109细胞凋亡,凋亡率最高为62.3%.结论:Res可抑制人食管癌EC109细胞生长,引起细胞周期的S期阻滞,并诱导细胞凋亡.