Tetanus-induced asynchronous GABA release in cultured hippocampal neurons

Asynchronous GABA release was studied in cultured hippocampal neurons using paired whole-cell recordings. Tetanization of the presynaptic GABAergic neuron was accompanied by a train of IPSCs which showed tetanic depression. Asynchronous IPSCs (asIPSCs) also developed during the train and continued for 1.85±0.3 s after the stimulation. The threshold frequency for evoking asIPSCs was 10 Hz, while maximal asynchronous activity was achieved at 40 Hz. Perfusion with EGTA-AM blocked asIPSCs. The elevation of [Ca²⁺]_i that accompanies presynaptic action potential firing triggers asynchronous release of GABA vesicles, thereby counteracting tetanic depression of synchronous IPSCs.     

羧乙基锗倍半氧化物对正常和异丙基肾上腺素损伤培养乳鼠心肌细胞的影响

羧乙基锗倍半氧化物(Ge—132)能促进培养乳鼠心肌细胞DNA和RNA的合成,提高超氧化物歧化酶(SOD)的活性,维持细胞膜结构的稳定。异丙基肾上腺素可使心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放增加,细胞搏动停止,超微结构显示肌膜和线粒体严重受损。Ge—132可显著减少异两基肾上腺素引起心肌细胞释放LDH,维持细胞的搏动功能和超微结构的完整。     

EGCG联合放疗治疗鼻咽癌裸鼠移植瘤模型

目的 研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对鼻咽癌裸鼠移植瘤放疗的增敏效应及survivin和VEGF的表达及意义.方法 体外培养低分化鼻咽癌CNE-2细胞,接种于20只雄性裸鼠皮下,待肿瘤结节约4～6 mm时,随机分为生理盐水组、EGCG组(30 mg/kg)...     

人诱导多能干细胞向血管内皮细胞分化方法的建立

目的:建立一种新的促进人诱导多能干细胞(iPSc)向血管内皮细胞(VEC)分化的方法.方法:将未分化的人iPSc制备成拟胚体(EBs),分为常氧组(A组)、常氧加血管内皮生长因子(VEGF)组(B组)、常氧加甲基乙二酰氨基乙酸(DMOG)组(C组)、缺氧组(D组)、缺氧加VEGF组(E组)及缺氧加DMOG组(F组),分别给予相应处理;观察各组iPS-EBs分化的VEC形态结构,应用逆转录PCR(RT-PCR)法检测VEC特异基因CD31、CD34、VE-cad、KDR、vWF的表达,免疫荧光细胞法检测以mRNA表达最强组的VEC特异基因在细胞定位情况判断VEC分化情况.结果:RT-PCR结果显示未经诱导iPSc不表达任何VEC相关基因,A组EBs细胞仅表达微弱的VE-cad和KDR;经条件诱导后iPS-EBs细胞表达CD31、CD34、VE-cad、KDR、vWF,C组表达最强,与其他各组比较差异有统计学意义(P＜0.05);免疫荧光结果显示C组中CD31、CD34为膜表达,KDR、vWF为胞浆表达.结论:常氧状态下加入DMOG培养能成功促进人iPSc向VEC分化.     

山楂叶悬钩子水提取物对转化生长因子-β刺激的肝星状细胞活化的抑制作用及其机制

[目的]探讨山楂叶悬钩子水提取物（RC—H）对转化生长因子（TGF—β）刺激的肝星状细胞（HSC）活化的影响及其机制．[方法]采用MTT法测定RC-H对大鼠肝星状细胞（tHSC／C1—6）存活率的影响;采用TGF-β促活化tHSC／C1—6细胞,蛋白印迹分析RC-H对TGF-β刺激HSC信号转导的影响．[结果]0～160mg／LRC-H对tHSC／Cl-6存活率无显著影响（P〉0．05）,320,640,1280mg／LRC-H显著抑制tHSC／C1—6的存活率（P〈0．05）．40,80,160mg／LRC—H可抑制TGF-β活化tHSC／Cl-6细胞中α-SMA蛋白表达,下调TIMP-1蛋白表达,上调MMP-13蛋白表达,降低p-Erk和p-JNK蛋白表达,对p-p38无显著影响．[结论]RC—H可通过介导MAPK信号通路中Erk和JNK磷酸化而抑制TGF-β刺激的肝星状细胞活化．     

BDNF 和 TERT 联合转染 BMSCs 对血管性痴呆大鼠学习记忆功能恢复及海马 CA1 区超微结构的影响

目的：研究脑源性神经营养因子（BDNF）和端粒酶逆转录酶（TERT）联合转染的骨髓基质干细胞（BMSCs）对血管性痴呆（VD）大鼠学习记忆功能恢复的作用,进一步探讨VD的有效治疗途径。方法：经大鼠股骨分离并鉴定BMSCs,构建pLXSN—TERT重组子后转化至BMSCs,软琼脂克隆形成实验检测体外培养的TERT—BMSCs的成瘤性。应用Ad5一BDNF转染TERT—BMSCs,构建BDNF—TERT联合转染的BMSCs。将40只雄性Wistar大鼠随机分为4组：对照组、VD组、BMSCs组、BDNF—TERT—BMSCs组。采用两血管阻断法制备VD模型。采用Morns水迷宫测试方法测试各组大鼠空间学习记忆力。应用RT—PCR和Westemblot方法分别检测各组大鼠海马CA1区BDNF、TrkB、SYN基因mRNA和蛋白表达情况,应用透射电镜观察各组大鼠海马CAl区超微结构变化。结果：行为学实验Mo州s水迷宫测试结果及超微病理透射电镜观察均显示BMSCs和BDNF—TERT—BMSCs对血管性痴呆大鼠有改善作用,且BDNF—TERT—BMSCs较BMSCs的作用更为显著。荧光实时定量RT—PCR和Westernblot结果显示,BMSCs组和BDNF—TERT—BMSCs组中BDNF、TrkB、SYNmRNA及蛋白表达水平均较痴呆模型组增高（P〈0．05）,且BDNF—TERT—BMSCs组较BMSCs组增加更为显著,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：BDNF—TERT联合转染BMSCs较普通的BMSCs对VD有更好的治疗效果,可明显改善VD大鼠的学习记忆功能的恢复。     

红景天苷对百草枯所致PC12细胞凋亡的抑制作用及相关机制

目的探讨红景天苷(salidroside)的神经保护作用及其可能的作用机制。方法采用百草枯(PQ)诱导的具有多巴胺神经元特性的PC12细胞凋亡作为帕金森病的体外模型。实验分对照组、PQ诱导组和红景天苷3个浓度(终浓度10,20和30μmol.L-1)预处理组。用MTT法测定细胞存活率,流式细胞术和Hoechst33258染色法测定细胞凋亡,比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3活性,免疫组化法检测细胞色素c(Cytc)的释放和Bcl-2蛋白的表达。结果PQ(800μmol.L-1)作用于PC12细胞24h后,与正常对照组比较,细胞存活率降低,细胞染色质固缩,细胞核呈致密浓染,细胞凋亡百分率升高;红景天苷3个浓度预处理后,细胞存活率增加,细胞核凝聚明显减少,细胞凋亡率降低,且具有量-效关系。另外,PQ可使PC12细胞caspase-3活性增强,Cytc的释放增加,Bcl-2的表达代偿性升高;红景天苷预处理后,PC12细胞增高的caspase-3活性和Cytc的释放明显降低,Bcl-2的表达进一步升高。结论红景天苷对PQ诱导的细胞凋亡具有浓度依赖性的抑制作用,其作用机制可能是促进Bcl-2的表达,抑制Cytc的释放和caspase-3的激活,提示红景天苷可能具有神经保护作用。     

瑞香狼香水提物小鼠药物血清诱导K562细胞凋亡

目的从细胞凋亡角度探讨瑞香狼毒(SCL)抗肿瘤作用机理.方法用SCL小鼠药物血清处理培养的人白血病K562细胞,MTT比色法观察对细胞生长的抑制作用,荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化,流式细胞仪观察DNA改变.结果SCL(5～20)g*kg-1小鼠药物血清显著抑制K562细胞增殖,明显诱导K562细胞凋亡的形态学改变和DNA变化.凋亡细胞率与小鼠服用SCL水提物的剂量呈正相关.结论SCL水提物可诱导肿瘤细胞凋亡.     

肾康注射液对高糖培养系膜细胞肥大的影响

目的：观察肾康注射液对高糖培养系膜细胞肥大的影响.方法：将体外培养的大鼠肾小球系膜细胞分为空白对照组、甘露醇组、高糖组、高糖＋缬沙坦组及高糖＋肾康注射液高、中、低剂量组.应用流式细胞术观察细胞大小、周期分布,用[3H]胸腺嘧啶核苷（[3H]TdR）及[3H]亮氨酸（[3H]Leu）掺入法反映细胞DNA及蛋白质合成情况.结果：高糖组系膜细胞G1期比例增高,G2期、S期比例下降,蛋白质合成增加,DNA合成减少,细胞体积增大;肾康注射液组与高糖组比较,细胞周期分布趋于正常,蛋白质合成减少,DNA合成增加,细胞体积减小.结论：肾康注射液可抑制高糖培养系膜细胞的肥大反应.     

铜在培养的大鼠心肌细胞上的抗氧化损伤作用

在培养的大鼠心肌细胞的培养基中加入0.42×10~-3 mol/L黄嘌呤及5.3×10~-9 mol/L黄嘌呤氧化酶可使心肌细胞产生氧化损伤,表现为APA、MDP、OS、Vmax减小,SDF增大;膜输入阻抗减小;细胞自由基含量增加;细胞的超微结构被破坏。向培养基中加0.0625ppm,Cu可阻止黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶的氧化损伤作用。铜作为超氧化构歧化酶及细胞色素氧化酶的活性中心成份,可能通过提高这些酶的活性而起抗氧化及清除自由基作用。