大鼠肝硬化形成过程中胃黏膜微循环内皮素A受体mRNA的表达及其意义

目的观察大鼠肝硬化门静脉高压形成过程中内皮素A受体mRNA在胃黏膜微循环血管上的表达 ,探讨内皮素及其受体对肝硬化门静脉高压大鼠胃黏膜微循环的调节机制。方法应用mRNA原位杂交确定内皮素A受体的部位 ,并进行半定量分析。结果大鼠肝硬化门静脉高压形成过程中门静脉及外周血浆内皮素水平随门静脉压力升高而降低。胃黏膜内皮素A受体mR NA主要在黏膜基底部的微循环前微动脉和后微静脉血管壁表达 ,其中动脉表达明显强于静脉。其表达与门静脉压力呈正相关 (r =0 86 9,P <0 0 5 ) ,与门静脉及外周血内皮素水平呈负相关 (r =-0 797、- 0 74 1,P <0 0 5 )。结论大鼠肝硬化门静脉高压形成过程中外周及门静脉血浆内皮素水平进行性降低 ;胃黏膜微循环内皮素A受体mRNA表达量增加 ,呈现上调趋势 ;内皮素及其受体mR NA表达变化可能与胃黏膜微循环功能障碍有关。     

生物信息学在控制SARS中的应用

目的 快速准确地对可疑病人进行筛选，早期诊断传染性疾病SARS。方法 运用生物信息学这一门数学、统计学、计算机学和生物医学相交融的学科作为研究工具。结果 破解SARS的病原一变异冠状病毒的DNA序列，从而获得SARS冠状病毒全基因组芯片。结论 生物信息学是新世纪跨专业的一门前沿学科。     

心血管疾病基因治疗的基础研究Ⅵ．一种新的体内基因转移方法

将医用缝合线浸泡在质粒ＤＮＡ溶液中，然后缝合在大鼠股四头肌上，可以观察到外源基因在肌肉组织中高效、稳定地表达，其表达量高于磷酸钙共沉淀和ＤＮＡ沉淀块埋植法，较肌肉直接注射法表达量高１０倍左右。     

Adipose tissues differentiated by adipose-derived stem cells harvested from transgenic mice

Objective: To induce adipocyte differentiation in vitro by adipose-derived stromal cells (ASCs) harvested from transgenic mice with green fluorescent protein (GFP) and assess the possibility of constructing adipose tissues via attachment of ASCs to typeⅡcollagen scaffolds. Methods: Inguinal fat pads from GFP transgenic mice were digested by enzymes for isolation of ASCs (primary culture). After expansion to three passages of ASCs, the cells were incubated in an adipogenic medium for two weeks, and the adipocyte differentiation by ASCs in vitro was assessed by morphological observation and Oil Red O staining. Then they were attached to collagen scaffolds and co-cultured for 12 hours, followed by hypodermic implantation to the dorsal skin of nude mice for 2 months. The newly-formed tissues were detected by HE staining. Results: The cultured primary stem cells were fibroblast-like and showed active proliferation. After being incubated in an adipocyte differentiation medium, the lipid droplets in the cytoplasm accumulated gradually and finally developed into mature adipocytes, which showed positive in Oil Red O staining. A 0. 5-cm3 new tissue clot was found under the dorsal skin of the nude mice and it was confirmed as mature adipose tissues by fluorescent observation and HE staining. Conclusions: ASCs can successfully differentiate adipose tissues into mature adipocytes, which exhibit an adipocyte-like morphology and express as intracytoplasmic lipid droplets. It is an efficient model of adipose tissues engineered with ASCs and type I collagen scaffolds.     

P物质对肉芽组织成纤维细胞表皮生长因子的表达调控及其意义

目的 探讨感觉神经肽P物质(SP)对离体培养的肉芽组织成纤维细胞表皮生长因子(EGF)表达的调控作用及特点。方法 采用甲醛注射的方法造成Wistar大鼠局部无菌性炎性反应，提取肉芽组织进行成纤维细胞原代培养；采用逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)方法检测SP对肉芽组织成纤维细胞EGF基因表达的调控作用，观察时间及剂量—效应关系；采用Western-blotting方法检测EGF蛋白表达情况，观察时间及剂量—效应关系。结果 10^-7mol/L SP可诱导成纤维细胞EGF mRNA的表达，在作用后6h与对照组比，差异有显著性(P＜0．01)；SP在10^-8-10^-6mol/L范围内可以显著促进成纤维细胞EGF mRNA表达，在10^-7mol/L达到峰值，10^-5mol/L时与对照组差异无显著性(P＞0．05)。10^-7mol/L SP作用12h后可检测到EGF蛋白明显表达增强(P＜0．01)，24h达高峰，48h后逐渐有所回落。SP在在10^-8--10^-5mol/L范围可诱导EGF蛋白的表达，均在10^-7mol/L剂量点达到峰值(P＜0．01)。结论 SP可诱导肉芽组织成纤维细胞EGF基因和蛋白的表达，且呈现出一定的时间和剂量特点，在SP调控创伤愈合的作用中具有重要意义。     

小鼠原位脂肪肝移植模型的建立

目的　建立了ob/ob小鼠脂肪肝移植模型 ,探讨保证建模成功的关键因素。方法　采用小鼠非动脉化肝移植技术 ,5～ 7周肥胖小鼠为供体 ,正常小鼠为受体 ,双袖套法行原位肝移植。受体肝组织行HE染色和油红O染色 ,血清ALT、AST水平检测采用常规生化分析法。结果非脂肪肝移植组 (lean to lean)受体长期存活率 (n =10 )为 70 % ,脂肪肝移植组 (ob/obtoagematchedlean)受体存活率为 0 (n =10 ) ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。脂肪肝移植给体积相当的正常小鼠 ,其短期存活率为 3 0 % (n =10 ) ,所有小鼠术后存活并苏醒 ,但均未超过 2 4h。脂肪肝移植受体ALT水平为 (62 85± 2 93 7)U /L ,AST为 (5 812± 2 942 )U /L ;而正常小鼠移植组ALT与AST水平分别为 (5 96± 114 )U /L ,(1796± 870 )U/L ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,组织学检测显示大量胆管中央凝固性坏死伴出血。结论　该模型的成功建立为我们提供了一种新的肝原发性肝无功能移植模型 ,为脂肪肝移植后脂肪肝细胞受损的机制研究奠定了基础。     

rhTPO在大肠杆菌中的表达、纯化及生物活性分析

目的：探讨人促血小板生成素(human thromlbopoietin，hTPO)在大肠杆菌中表达、分离纯化及生物学活性初步鉴定。方法：利用RT-PCR法从人胎肝细胞中扩增目的基因片段，将其定向插入pQE30表达质粒T5启动子下游的多克隆区，转化大肠杆菌M15，得到pQE30-TPO的工程菌，诱导目的蛋白表达、纯化。将表达产物给血小板减少模型小鼠尾静脉注射，观察注射后不同时间血小板量的改变。结果：经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galactoside IPTG)诱导培养，该工程菌可以产生单一特异性的高表达蛋白条带。将纯化后的表达蛋白注射小鼠，结果显示对实验性小鼠血小板减少症具有一定的治疗作用。结论：在大肠杆菌中成功地高效表达了重组hTPO，该产物具有促血小板生成的活性。     

实时荧光定量PCR检测PML-RARα融合基因的临床应用研究

目的 利用PML-RARα融合基因作为标志物,应用实时荧光定量PCR技术,监测急性早幼粒细胞白血病(APL)微小残留病(minimal residual disease,MRD)患者体内病毒的状态,探讨预测APL复发风险的方法.方法 利用本实验室建立的定量检测APL患者PML-RARα融合基因的方法,对25例处于初诊、完全缓解(complete remission,CR)、复发等不同阶段的APL患者进行了PML-RARα融合基因的定量检测,并对其中6例患者的MRD状态进行了动态监测.结果 应用荧光定量PCR技术分析患者初诊、CR和复发状态的PML-RARα基因对数值(lg)水平,结果 显示有统计学意义(x2=6.847,P＜0.05);随访期患者的PML-RARα对数值(lg)水平变化较大:初诊时较高(-0.61±0.79),CR时下降(-1.31±0.62),复发时又出现上升(-0.57±0.44),提示若该患者在CR时的对数值呈现上升趋势,患者复发的机率大.结论 应用实时荧光定量(RQ)-PCR技术定量检测PML-RARα融合基因,对监测APL患者MRD状态具有临床适用性,随访期的MRD动态追踪监测具有预后价值.     

Rb基因对人视网膜母细胞瘤株SO-Rb50的影响

目的：探讨视网膜母细胞瘤（Rb）的发生与Rb基因（Rb1）缺失、失活等异常的关系。方法：用逆转录病毒载体pDOR与全长4．7kb野生型Rb1cDNA构建逆转录病毒表达载体pDOR－Rb1+。用脂质体介导法将pDOR－Rb1+转入CRIP包装细胞系。结果：实验产生了0．5X105Cfu具有一次感染能力的重组逆转病毒。利用该病毒感染SO-Rb50，经G418筛选，获得了抗G418细胞群体。运用PCR及Southern杂交技术对转染细胞进行检测，结果表明该抗G418细胞中有完整的外源Rb1存在。Northern杂交发现其Rb1mRNA表达水平有所提高。对细胞群体生长速率、软琼脂集落形成能力的测定表明，外源Rb1的表达使SO-Rb50在软琼脂中集落形成能力降低，而群体生长速率无明显影响。结论：外源Rb1对SO-Rb50恶性表型有一定影响。     

四种可溶性载体对骨形态发生蛋白在小鼠体内诱导成骨活性的影响

以四种可溶性物质作为牛骨形态发生蛋白（ｂＢＭＰ）的载体，通过实验观察哪种物质是ｂＢＭＰ的有效缓释载体。将聚乙烯吡咯烷酮（ＰＶＰ）、葡聚糖、羟乙基淀粉（ＨＥＳ）、甘露醇分别与等量ｂＢＭＰ复合后，注射入小鼠股部肌肉，观察组织学成骨及测定标本内钙含量。结果，ｂＢＭＰ／ＰＶＰ有良好成骨，吸收较快，未见炎症及排斥反应，其混悬液较稳定，具有良好的适针性及可注射性，ｂＢＭＰ／甘露醇只有很低成骨率。其余各组未见成骨。ＰＶＰ对ｂＢＭＰ具有满意助溶、助悬及缓释载体作用，对ｂＢＭＰ活性无损害，生物相容性好。