脐血间质干细胞：神经干细胞的新来源

目的：脐血间质干细胞经诱导分化为神经干细胞的方法，已成为近来细胞移植治疗中枢神经系统疾病研究的热点问题。资料来源：应用计算机检索Medlirle 1994-01／2004-08以及NCBI 1994-01／2004-08期间的关于脐血间质干细胞与神经干细胞的章，检索词“human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,neural stem cells”，并限定语言种类为English。同时计算机检索中数据库CNKI 1994-01／2004-08期间的相关章，检索词“脐血，间质干细胞，神经干细胞”。资料选择：对资料进行初审，选取有关中分离脐血间质干细胞，诱导分化为神经细胞的相关实验研究，及脐血细胞移植治疗中枢神经系统疾病方面的论。资料提炼：共收集到关于脐血脐血间质干细胞诱导分化为神经细胞及用于细胞移植治疗中枢神经系统疾病的献37篇，中4篇，英33篇。资料综合：神经干细胞移植已被用于促进神经系统疾病的修复，但神经干细胞的来源十分有限。脐血问质干细胞是中胚层发育的早期细胞，有多向分化潜能，可以通过骨髓、脐血和周围血获得。脐血间质干细胞在适宜的体内或体外环境下，可分化为神经元及神经胶质细胞，并在分化过程中表达神经干细胞特异性标志。加之脐血来源丰富．采集方便，免疫排斥反应低，使脐血间质干细胞成为用于细胞移植治疗神经系统疾患的又一重要来源。结论：虽然目前对脐血骨髓间质干细胞的鉴定标准、诱导分化为神经细胞的分子机制以及诱导分化出的神经细胞是否有生物学功能还不非常清楚，但是这一发现已为寻找神经干细胞的新来源开拓了思路；同时也意味着脐血骨髓间质干细胞在治疗神经系统损伤和退行性病变神经修复中具有潜在的临床应用价值。     

高尿酸血症致肾病的声像图研究

目的探讨高尿酸血症致肾病声像图特征及其相关性。方法高尿酸血症患者368例,正常对照组552例,入组前常规超声检查肾脏均未见异常。随后超声追踪观察5年,追踪率达97.9%,追踪的终点指标为肾脏形态学改变。结果高尿酸血症致肾脏形态学改变相对危险度RR=4.5,总体相对危险度95%可信区间(2.60~7.99),5年内超声显示率13%,高尿酸血症肾病声像图表现大体可分为:(1)尿盐结晶型;(2)尿路结石型;(3)急性肾功衰型;(4)慢性肾功不全型。结论高尿酸血症确系肾脏形态学改变的危险因素,超声可检查高尿酸血症肾病声像图变化情况,从而评价高尿酸血症肾病形态学损害程度,为临床诊断及治疗决策提供一种有价值的影像学信息。     

转染癌基因的骨髓基质干细胞体外分化特征

目的:观察转染癌基因的骨髓基质干细胞在体外分化情况,为肝细胞癌的细胞源研究提供实验依据。方法:实验于2003-05/2004-06在南方医科大学药理教研室实验室完成。①两步法获取大鼠肝细胞,梯度离心法分离大鼠骨髓基质干细胞。②单基因转染是单独将c-myc或K-ras癌基因瞬时转染大鼠骨髓基质干细胞,6孔培养板中培养,24h后荧光显微镜下观察骨髓基质干细胞转染结果。双基因转染步骤相同,只是将c-myc和K-ras癌基因同时转染大鼠骨髓基质干细胞。③c-myc癌基因转染组、K-ras癌基因转染组、双癌基因转染组常规培养,加入含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM培养基,于37℃、体积分数为0.05的CO2孵箱培养,每24h半量更换培养液。④c-myc癌基因转染 肝细胞组、K-ras癌基因转染 肝细胞组、双癌基因转染 肝细胞组将已转染癌基因的骨髓基质干细胞,置于叠加的培养板半透膜的上方(细胞密度均为1×105个/cm2),再将肝细胞置于半透膜的下方(每孔细胞密度为3×105/cm2)进行共培养,其余步骤同常规培养。⑤通过反转录聚合酶式反应和细胞免疫组化检测骨髓基质干细胞分化情况。结果:①癌基因转染24h骨髓基质干细胞检测结果:单独转染c-myc或K-ras癌基因的细胞,其绿色荧光蛋白呈均匀一致分布;双基因转染的细胞,绿色荧光蛋白呈点片状分布。②各组骨髓基质干细胞向肿瘤细胞分化检测结果:c-myc癌基因转染组、K-ras癌基因转染组、双癌基因转染组的骨髓基质干细胞,均未向肿瘤细胞分化;c-myc癌基因转染 肝细胞组、K-ras癌基因转染 肝细胞组、双癌基因转染 肝细胞组的骨髓基质干细胞,均向肝细胞癌发展;空白对照组骨髓基质干细胞细胞均为阴性。此外,双癌基因转染 肝细胞组的骨髓基质干细胞分化增殖迅速,反转录聚合酶式反应和免疫组化检测发现,培养第7天出现甲胎蛋白表达,并迅速增加,而第7天出现的白蛋白和细胞角蛋白18表达迅速减弱,第14天消失。结论:转染癌基因的骨髓基质干细胞,在向肝细胞诱导的条件下,部分癌基因可以使干细胞分化为肝癌细胞;多癌基因转染时,更易于使干细胞分化为肝癌细胞。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者外周血淋巴细胞增殖、杀瘤活性及其对正常表型骨髓造血细胞的影响

阵发性睡眠性血红蛋白尿症 (PNH)克隆可能由于缺乏GPI锚连蛋白而逃脱免疫攻击 ,形成生长优势。本研究测定PNH患者淋巴细胞增殖反应及对K5 6 2细胞的杀伤作用 ,并与正常对照比较 ,观察其淋巴细胞功能。采用体外液体培养体系 ,应用免疫磁珠技术分选PNH患者骨髓CD34+ 及CD34- 细胞 ,分别向 2组细胞及对照细胞加入自身CD5 9+ 或CD5 9- 淋巴细胞及其培养上清液、外源性IFN γ及IL 2。培养 10天后 ,测定骨髓细胞中PNH细胞 (CD5 9- )百分数 ,观察淋巴细胞对骨髓中CD34+ 及CD34- 细胞中PNH细胞含量的影响。研究结果表明 ,对PHA的增殖反应 ,PNH患者未分选的淋巴细胞与健康对照比较、PNH患者自身CD5 9+ 与CD5 9- 淋巴细胞之间比较均无统计学差异 ,但对K5 6 2细胞的杀伤作用PNH患者未分选的淋巴细胞明显低于健康对照组 ,分别为 (5 0 .0 0± 2 8.6 7) %及 (76 .13± 10 .15 ) % (P <0 .0 5 ) ,而PNH患者CD5 9- 淋巴细胞与CD5 9+ 淋巴细胞之间无显著性差异。PNH患者骨髓细胞中加入自身CD5 9- 淋巴细胞或其培养上清液、CD5 9+ 淋巴细胞或其培养上清液、外源性IFN γ和IL 2培养后 ,CD5 9+ 细胞均有不同程度下降 ,除CD5 9+ 淋巴细胞组外 ,其他各组CD5 9+ 细胞下降与培养前比较有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,IFN γ及IL 2组     

骨髓细胞形态学检查室间质评结果分析

对我室2001～2005年每次由省临检中心提供细胞形态彩图来回报结果总结如下。1 材料和方法 1．1 材料 彩图由省临检中心提供，每年两贞，每页10小幅，5a共100小幅。要求第一份质评在5月下旬回报，第二份在8月下旬。     

临床酵母样真菌实验室检查

酵母样真菌是一类以单细胞形式存在的真菌,临床上重要的酵母样真菌多属于子囊菌门和担子菌门。精准的实验室诊断是实现精准临床诊疗的前提和基础。该文介绍了酵母样真菌的实验室检查方法及临床应用,包括基于培养的检查方法,如菌落形态、镜下形态、显色培养基、芽管形成试验、生化反应、DNA测序和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)菌落鉴定;以及非培养检查方法,包括标本直接镜检、组织病理、抗原检测、核酸检测和MALDI-TOF MS对临床标本的直接检测等,并分析各方法性能特点。     

肺泡灌洗液同时查见超鞭毛虫及泡沫样巨噬细胞形态学分析

肺泡灌洗液中查见超鞭毛虫或泡沫样巨噬细胞甚为少见．两者同时查见更为罕见。现通过临床资料及实验室检查，特别对其形态学特点与同行一起进行分析探讨。     

人骨髓间充质干细胞的分离和体外培养

目的:分离培养人骨髓间充质干细胞,研究其在体外生长增殖的生物特性。方法:冲洗手术弃骨骨髓,获取骨髓间充质干细胞进行培养,倒置相差显微镜观察细胞生长情况,绘制生长曲线,免疫细胞化学法鉴定细胞表面抗原,进行染色体核型分析。观察冷冻保存细胞复苏后的生长状况。在地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C的作用下,进行成骨诱导分化。结果:原代和传代培养的细胞呈现梭形外观,具有较强的生长增殖能力;细胞CD44,CD54抗原表达阳性,CD34表达阴性。进行染色体核型分析表明是正常的人二倍体细胞。复苏细胞生物学特性无明显改变。分化细胞表现成骨细胞特性,合成碱性磷酸酶能力增强,矿化结节逐渐出现。结论:建立分离培养人骨髓间充质干细胞和研究其体外培养生物特性的方法,为通过组织工程学方法修复组织损伤奠定基础。     

骨髓间充质干细胞移植大鼠脑梗死区的超微结构变化

背景近来的研究发现骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对缺血性脑血管病有治疗作用,接受细胞移植的脑梗死区超微结构的观察可进一步证实该作用.目的观察接受MSCs局部注射移植的大鼠脑梗死区超微结构的变化,以了解MSCs移植对梗死区超微结构的影响.设计随机对照实验研究.单位解放军第三军医大学西南医院神经病学中心.材料实验于2002-04/2002-09在解放军第三军医大学动物所及中心实验室完成.实验动物为健康幼年及成年Wistar大鼠12只,雌雄不限.随机分为移植组6只和对照组6只.干预建立大鼠大脑中动脉栓塞模型,将体外分离培养的大鼠MSCs注射至大鼠脑梗死区,两组大鼠于移植后第4周电镜观察大鼠脑梗死区超微结构变化.主要观察指标移植组及对照组大鼠脑梗死区超微结构变化.结果接受移植的梗死区可见外形幼稚的细胞存活,并围绕在神经元周围,梗死区神经元胞浆中出现了丰富的游离核糖体,而对照组大鼠梗死区神经元胞核固缩,并有嗜神经细胞现象.结论大鼠MSCs移植对缺血性脑损伤具有一定修复作用.     

人骨髓基质细胞分化为神经元样细胞的研究

目的:探讨人骨髓源性神经干细胞分化为神经细胞的可行性,为中枢神经组织损伤修复寻找种子细胞的理想来源。方法:无菌取成人髂骨骨髓,密度梯度离心分离后获得骨髓基质细胞(bonemarrowstroualcells,BMSCs);在神经干细胞培养液及细胞因子等条件下诱导为神经元样细胞,通过免疫细胞化学方法对诱导后细胞进行鉴定;通过高效液相色谱法(HPLC)检测诱导后细胞合成分泌神经递质去甲肾上腺素(NE)的能力。结果:分离得到的成人BMSCs培养10～14d后,细胞呈半贴壁状,胞体饱满,Nestin抗原染色阳性。培养20d后,在诱导因子作用下进一步分化为神经元样细胞(NLCs),具有细长双极或多极突起,神经核蛋白(NeuN)抗原表达阳性。HPLC检测BMSCs、空白神经干细胞培养液未测到NE,经体外诱导培养8,11d的神经干细胞、体外诱导分化20d的NLCs均可检测到NE,神经干细胞(8,11d)的NE含量为(10.4146±1.0425),(28.3359±3.8371)μg/L小于NLCs(20d)组(52.1342±3.9136)μg/L,差异有非常显著性意义(F=126.64,P=0.0000)。而且随着BMSCs培养天数的增加,其所含的NE浓度也渐增加(P<0.05)。结论:在适宜培养条件及诱导因子联合作用下,人BMSCs可被成功诱导为神经细胞,并具有合成分泌神经递质成分的能力。