构建人骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子165基因共表达重组腺病毒在兔骨髓基质干细胞中的表达

目的:构建人骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子基因共表达腺病毒并观察其在兔骨髓基质干细胞中的表达。方法:实验于2005-03/12在解放军第四军医大学唐都医院全军骨肿瘤研究所完成。①分别克隆人骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子基因,分别依次亚克隆至穿梭载体构建重组穿梭质粒pAdT-B2V并酶切鉴定;后经PmeI酶切线性化后与骨架质粒感受态细胞AdEasier-1Cells经电穿孔法同源重组得到腺病毒质粒pAdBMP-7并酶切鉴定。②PacI酶切线性化后的pAdBMP-7腺病毒质粒转染293细胞包装后获得复制缺陷型重组腺病毒AdBMP-7,在荧光显微镜下计算表达绿色荧光蛋白细胞个数,测定AdB2V滴度。③将AdBMP-7体外感染兔骨髓基质干细胞后,以荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达及反转录-聚合酶链反应方法鉴定外源基因的表达,以β-肌动蛋白为内参照,未感染细胞为对照。④AdB2V感染兔骨髓基质干细胞后72h以免疫细胞化学染色方法检测外源基因的表达,以未感染组为对照。结果:①酶切鉴定表明外源基因已插入到pAdTrack-CMV穿梭质粒且腺病毒重组质粒pAdBMP-7构建成功。②经293细胞包装3d后可观察到绿色荧光蛋白表达,氯化铯梯度离心法最终获得约3×109efu/L滴度的重组腺病毒。③体外感染兔骨髓基质干细胞后荧光显微镜观察及反转录-聚合酶链反应证实外源基因可在兔骨髓基质干细胞中表达,未感染组为阴性。④AdB2V感染兔骨髓基质干细胞后以免疫细胞化学染色均观察到外源基因的阳性表达,未感染组呈阴性表达。结论:成功构建人骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子165基因共表达重组腺病毒,证实了其在兔骨髓基质干细胞的表达,为骨再生的局部联和基因治疗打下基础。     

骨髓间充质干细胞移植对脑梗死大鼠体感诱发电位的影响

目的：观察接受骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)移植前后脑梗死大鼠体感诱发电位的变化，探讨MSCs移植对神经系统功能客观检查指标的影响。方法：建立大鼠大脑中动脉栓塞模型，将体外分离、培养的大鼠MSCs注射至大鼠脑梗死区，于移植前(MCAO术后1周)及移植后2周、4周行体感诱发电位检查。结果：移植治疗组大鼠体感诱发电位各项指标与移植前相比有明显改善，移植后4周时P1-N1峰峰值为(4．26&;#177;1．53)μV，P1潜伏期为(14．07&;#177;3．01)ma，N1潜伏期为(15．62&;#177;2．93)ms，移植前P1-N1峰峰值为(2．34&;#177;1．62)μV，P1潜伏期为(17．33&;#177;2．35)ms，N1潜伏期为(19．23&;#177;3．16)ms。在各时顶点与对照组相比也有明显好转，统计学分析差异有显著性意义(P&;lt;0.05)。结论：动物实验显示MSCs移植在一定程度上促进了神经系统功能的恢复，为缺血性脑血管病的治疗探索一条新的途径。     

自体骨髓间质干细胞移植治疗急性心肌梗死

目的:将大体动物自体骨髓间质干细胞移植至心肌梗死后的心肌瘢痕组织中,观察细胞在梗死区的存活以及对心功能的改善情况。方法:实验于2003-04/2004-03在徐州医学院第二附属医院介入导管室完成。①选择21只中国小型家猪,三四个月龄,体质量30～40kg。随机分为实验组11只和对照组10只,应用闭胸经股动脉介入的方法制作动物心肌梗死模型。②10余天后实验组将培养的自体骨髓干细胞移植于梗死区,对照组在梗死区植入营养液。③8周后,以心脏彩超及放射性核素心肌扫描观察梗死心肌的恢复及心功能的变化。④最后行组织学分析。结果:①21只家猪,实验过程中死亡3只,1只建模未成功,进入结果分析实验组9只,对照组8只。②心脏彩超显示实验组移植后左室射血分数较移植前增加犤(42.07±2.06)%,(47.00±2.36)%,P<0.05犦。③99Tcm-MIBI显示实验组梗死面积比移植前缩小犤(34±12)%,(21±10)%犦。④实验组微血管密度较对照组显著增加(8.32±1.26)个/0.2mm2,(4.61±1.32)个/0.2mm2,P<0.05犦。结论:自体骨髓间质干细胞移植至梗死区后,可使梗死面积缩小,心脏功能改善。     

紫草素对人绒癌耐药细胞株增殖的抑制及凋亡的作用

目的 研究紫草素对体外培养的人绒癌耐药细胞株(JAR/MTX)抑制增殖、促进凋亡及诱导细胞周期停滞的作用.方法 经不同浓度的紫草素分别作用24 h、48 h、72 h后,应用cck-8试剂盒检测其细胞毒性,应用流式细胞仪分析细胞周期分布及凋亡率变化,应用荧光显微镜观察凋亡现象.结果 当紫草素浓度从0.1875 μg/ml增加到3μg/ml时,其48h抑制率从46.48±12.0%升高到92.05±9.2%,0.75μg/ml紫草素分别作用24 h、48 h、72 h,其抑制率分别为43.94±10.1%、68.56±10.2%、84.97 ±18.63%,与对照组相比差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01),可见随着紫草素剂量的增加和作用时间的延长,对绒癌耐药细胞生长的抑制率也明显增加.当紫草素浓度从0.1875 μg/ml增加到3μg/ml时,与细胞作用48h后,凋亡率由12.13±5.67%升高到30.08±7.85%(P＜0.05或P＜0.01),随着药物浓度增加凋亡率亦增加,并可见典型的凋亡细胞核形态学变化.细胞周期分布也呈浓度依赖性改变,一方面增高C,0/G1期细胞比例(P＜0.05),另一方面降低S期和G2/M期细胞比例(P＜0.05).结论 紫草素对JAR/MTX具有明确的抗增殖、促凋亡、阻滞细胞周期进程的作用,值得进一步深入研究与探讨.     

自体骨髓间质干细胞移植治疗急性心肌梗死

目的：将大体动物自体骨髓间质干细胞移植至心肌梗死后的心肌瘢痕组织中，观察细胞在梗死区的存活以及对心功能的改善情况。方法：实验于2003-04／2004—03在徐州医学院第二附属医院介入导管室完成。①选择21只中国小型家猪，三四个月龄，体质量30-40kg。随机分为实验组11只和对照组10只，应用闭胸经股动脉介入的方法制作动物心肌梗死模型。②10余天后实验组将培养的自体骨髓干细胞移植于梗死区，对照组在梗死区植入营养液。（要）8周后，以心脏彩超及放射性核素心肌扫描观察梗死心肌的恢复及心功能的变化。④最后行组织学分析。结果：①21只家猪，实验过程中死亡3只，1只建模未成功，进入结果分析实验组9只，对照组8只。②心脏彩超显示实验组移植后左室射血分数较移植前增加[（42．07&;#177;2.06）％，（47．00&;#177;2．36）％，P〈0．05]。③^99Tc^m-MIBI显示实验组梗死面积比移植前缩小[（34&;#177;12）％，（21&;#177;10）％]。④实验组微血管密度较对照组显著增加（8．32&;#177;1．26）个／0．2mm^2，（4．61&;#177;1．32）个／0．2mm^2，P〈0．05]。结论：自体骨髓间质干细胞移植至梗死区后，可使梗死面积缩小，心脏功能改善。     

SD大鼠角朊细胞体外培养的实验

目的：观察SD大鼠角朊细胞在体外培养的生长特性。方法：采用dispase酶消化法从SD大鼠仔鼠皮肤获得角朊细胞，在体外进行培养并传代，采用倒置显微镜和MTT法观察细胞的形态学变化和生长曲线。结果：通过酶消化法可以获得较纯的角朊细胞，原代培养10d细胞即可以达到融合，传代后细胞部分发生变性，呈成纤维细胞样，传代次数高，成纤维样细胞比例也相应增高。结论：SD大鼠角朊细胞可以在体外培养分裂增殖，但传代后即发生变性。     

单克隆抗体在形态学分类不明白血病中的鉴别意义

目的 判断免疫分型在形态学分类困难的白血病中的鉴别作用.方法 应用一组敏感及特异的单克隆抗体,采用闻接免疫荧光法测定白血痛细胞表面标志.结果 检测的白细胞表面均有明显的细胞系列特异性标志表达,其中急性髓细胞白血病(髓系组细胞)2例,其细胞分别表达CD13、CD33、和CD33、;前B-ALL1例(前B细胞),表达CD19、HLA-DR;B-CLL1例,表达CD9、CD10、CD19、CD20、Kappa,Ig轻链呈克隆性改变(Kappa ,Lamda-);3例杂合性急性白血病分别表达CD7、CD9、CD10、CD19、CD13、CD33;CD10、CD19、CD9、CD20、CD13、CD14、CD15、CD33、CD41b和CD7、CD9、CD10、CD19、CD13、CD15、CD33.结论 免疫分型可提高白血病的诊断分型准确性,特殊类型的白血病的诊断必须依赖免疫分型.     

共转染EGFP和hMnSOD基因对猴骨髓源神经干细胞抗氧化能力的影响

目的：人正义、反义MnSOD基因和EGFP共转染恒河猴骨髓源神经干细胞，观察MnSOD基因对猴骨髓源神经干细胞抗氧化能力和报告基因表达的影响。方法：应用NucleofectorTM核转染仪将人正义、反义MnSOD基因和荧光真核表达载体共转染体外培养的恒河猴骨髓源神经干细胞，荧光显微镜下观察荧光蛋白在细胞内的表达，并检测转染细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果：①转染24h后，共转染细胞可见荧光蛋白在骨髓源神经干细胞内有效表达，荧光显微镜下发强绿色荧光，其转染率约为80％。②转染人正义MnSOD基因的细胞的总SOD活性[(8．03&;#177;0.74)NU／mg]与转染人反义MnSOD基因细胞的总SOD活性[7．19&;#177;0．86)NU／mg]差异无显著性意义，但MnSOD活性前者明显高于后者1．89倍。结论：MnSOD基因与EGFP基因共转染骨髓源神经干细胞，均有效表达，提高了细胞内MnSOD活性，为多基因联合治疗帕金森病提供了可行的技术平台。     

肺老化的HRCT评价

目的 探讨利用高分辨率CT(HRCT)扫描来评价肺老化进程的可能性。方法 对54例正常志愿者(年龄19～84岁)的右肺在深吸气末与深呼气末进行上、中、下三个固定层面HRCT扫描。并对其CT值、层面面积变化率、空气滞留区及肺内微小结构改变进行观察，分析其是否随年龄变化。结果 呼气相平均CT值与吸气相平均CT值的差值随年龄增长其变化具有显著性差异(P=0．045)。结论 HRCT能够提供肺老化的某些信息，可以做为肺老化的评价手段之一。     

急性髓细胞白血病(M_2b)与染色体8;21易位——附45例报告

为了更加准确诊断急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）的Ｍ２ｂ型，本文联合常规的细胞形态学、细胞化学、细胞遗传学和分子生物学方法对４５例伴ｔ（８；２１）易位的ＡＭＬ患者进行诊断。结果显示：①染色体ｔ（８；２１）易位与Ｍ２ｂ两者关系密切。本组４５例ｔ（８；２１）ＡＭＬ中Ｍ２ｂ占９７．７％。ｔ（８；２１）常伴性染色体丢失，以Ｙ染色体丢失尤为易见。②异常中幼粒特征性改变主要是高度核浆发育不平衡（不成熟的核与成熟的胞浆），占６％～６６％，中位数３３％。３２例可见Ａｕｅｒ小体，６例骨髓嗜酸细胞明显增多（＞５％）。③用逆转录酶／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）技术检测２９例患者的ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合基因来自ｔ（８；２１）染色体。１例在完全缓解（ＣＲ）后５个月复查ＡＭＬ－ＥＴＯ转阴性，另１例ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合基因持续存在，３个月后复发。因此认为检测ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合基因对无ｔ（８；２１）的ＡＭＬ的诊断及微量残留白血病的监测等方面有重要意义。