去除移植免疫反应抗原成分脱细胞天然骨基质的制备

背景：同种异体骨来源广泛,便于大量加工贮存,如能去除其免疫排斥反应用于骨支架修复骨缺损,将很好地解决骨源问题,但目前去除免疫排斥的方法不尽理想。目的：运用低渗-脱细胞联合过氧化氢去除骨基质中引起免疫排斥反应的抗原成分。方法：将SD大鼠股骨经低渗-脱细胞、过氧化氢处理制备天然脱细胞基质,再通过苏木精-伊红和甲苯胺蓝染色、扫描电镜与透射电镜观察、有机成分分析、洗脱剂残留量测定和移植免疫分析方法评估处理效果,并与新鲜大鼠股骨标本作比较。结果与结论：组织学观察可见处理后的脱细胞骨基质中胶原纤维排列规则,骨陷窝空虚,未见细胞,纤维连接蛋白和层粘连蛋白多存留在骨陷窝周边部。扫描电镜观察见处理后的骨基质板层连接疏松,板层之间出现大量孔隙;透射电镜见骨陷窝区已无高密度影;高效液相色谱仪检测TritonX-100在脱细胞骨基质中几无残留。光镜及扫描电镜均可见新鲜骨中有大量细胞成分。淋巴细胞刺激实验表明新鲜骨引起的免疫排斥反应明显强于脱细胞骨基质（P 〈 0.01）。说明联合应用低渗-脱细胞和过氧化氢处理基质的方法去除免疫排斥反应较为理想。     

脱钙骨基质与骨髓间充质干细胞共培养关节腔内的成软骨活性

背景：将骨髓间充质干细胞附着到支架材料上再植入关节软骨缺损处,细胞不但不消失,而且可形成新的软骨。目的：观察同种异体脱钙骨基质与骨髓间充质干细胞共培养在关节内的成软骨活性。方法：在54只青紫蓝兔单侧膝关节制作关节软骨全层缺损模型,随机分组：实验组在缺损处植入自体骨髓间充质干细胞与同种异体脱钙骨基质复合物,对照组缺损处仅植入同种异体脱钙骨基质,空白对照组未植入任何物质。结果与结论：植入后12周,实验组缺损处修复组织呈软骨样,表面光滑平坦,与周围软骨整合的软骨细胞更为成熟,修复组织与软骨下骨结合牢固;修复组织的细胞为透明软骨样细胞,柱状排列,Ⅱ型胶原染色阳性,与周围软骨及软骨下骨整合良好,且实验组组织学评分优于对照组和空白对照组（P〈0.01）。对照组缺损处修复组织呈纤维样,与周围软骨未结合,空白对照组缺损区无修复组织,两组均无Ⅱ型胶原染色阳性表达。表明同种异体脱钙骨基质与骨髓间充质干细胞共培养后植入膝关节可形成软骨样组织,有效修复关节软骨缺损。     

枢椎软骨基质融合程度对齿突骨折类型影响的生物力学评估

目的:探讨枢椎软骨基质融合程度对齿突骨折类型的影响。方法:基于正常成人颈椎CT图像建立枢椎精细三维有限元模型。在齿突寰齿关节面上施加前后方向载荷,通过分别降低枢椎松质骨软骨基质融合部位的弹性模量以模拟该部位松质骨不同融合程度,分析枢椎齿突在两种不同约束条件下的应力、应变分布情况,以及枢椎发生骨折的可能类型。结果:两种约束条件下,枢椎有限元计算预测结果发现枢椎软骨基质的融合程度对枢椎高应力集中带分布无明显影响,最大von Mises等效应力值改变亦不明显。结论:枢椎体内软骨基质融合程度对齿突骨折类型无明显影响。     

关节软骨的结构、代谢与颞颌关节疾病的关系

关节软骨主要由软骨细胞和软骨基质构成,是特殊类型的结缔组织,具有特定的功能。颞颌关节结构紊乱和器质性病变的病理实质是关节组织的退行性变。关节软骨的代谢异常可导致一系列酶促反应的发生,软骨基质代谢紊乱、免疫系统异常和凝血—纤溶系统激活等,导致软骨基质崩解、骨的破坏吸收。本文从生物化学和分子生物学角度对关节软骨的正常结构、代谢和功能进行了综述,并对颞颌关节组织退行性变的病理机制进行了回顾。     

hIGF-1促进软骨细胞在脱细胞软骨基质材料中的增殖及黏附

目的探究脱细胞软骨基质(ACM)作为天然细胞支架的可行性及人胰岛素样生长因子1(hIGF-1)对软骨细胞在ACM上的增殖及黏附作用的影响。方法兔耳软骨细胞原代培养,取第3代细胞备用。将脱细胞处理获得的ACM进行HE染色、Masson染色及电镜下观察,用CCK-8法检测支架浸提液的毒性。将软骨细胞接种至ACM中,实验组加入57.14μg/L的hIGF-1,培养7 d后于电镜下观察细胞在ACM上的增殖及黏附。结果 1)ACM疏松多孔,电镜下孔径(3.48±1.39)μm,孔隙率(90.13±2.52)%。2)实验组软骨细胞增殖旺盛,细胞占据绝大部分支架空穴。而对照组软骨细胞增殖较缓慢,且仅有少量细胞进入材料空穴内。结论实验制备的ACM是一种可靠的天然细胞支架。且hIGF-1能促进软骨细胞在ACM上的增殖及黏附。     

铝对大鼠骨基质明胶诱导性异位骨形成及矿化影响的研究

 采用不脱钙骨切片技术,配合四环素双标记和骨组织形态计量学及铝染色,研究了不同的铝浓度在肾功能正常与肾功能不全时对诱导性异位骨形成及矿化的影响.实验大鼠分为5组:对照组(C);低剂量铝组(LDA);高剂量铝组(HDA);慢性肾功能不全组(CRF);慢性肾功能不全加高剂量铝组(CRF-HDA);实验结果表明:LDA、CRF组与C组之间无明显差异(P>0.05).HDA及CRF-HDA组骨组织内四环素荧光双记线短、少,多为单标线,且粗细不一,增宽融合,表面有较多的类骨质沉积,尤以CRF-HDA组为甚.提示高剂量铝可影响大鼠骨基质明胶诱导性异位骨形成,阻碍其矿化作用,引起骨软化.尤其在慢性肾功能不全时,可加重此变化.     

松质骨基质-骨髓基质成骨细胞复合物的异位成骨作用

目的：观察松质骨基质－ 骨髓基质成骨细胞复合移植皮下成骨作用,以探索松质骨基质作为骨组织工程支架材料的可行性。方法：新生兔骨髓细胞体外培养、诱导后,接种于藻酸盐／松质骨基质中,形成松质骨基质／藻酸盐／骨髓基质成骨细胞复合物,并植入裸鼠背部皮下,对照组单纯植入松质骨基质。植入４、８ 周后行 Ｘ线摄片和组织学检查,观察骨形成情况。结果：松质骨基质／骨髓基质成骨细胞复合物皮下成骨效果明显优于松质骨基质。前者兼有纤维成骨和软骨成骨,以纤维成骨为主;后者仅见少量软骨成骨。结论：松质骨基质可以作为一种良好的骨组织工程支架材料。     

聚乳酸和无活性脱钙骨基质载体对rhBMP-2异位诱导骨形成的比较性研究

目的：为了研究聚乳酸和无活性脱钙骨基质载体对ｒｈＢＭＰ－２异位诱导的骨形成。方法：将重组人骨形态发生蛋白－２（ｒｈＢＭＰ－２）与无活性脱钙骨基质（ＤＢＭ）和聚乳酸（ＰＬＡ）复合,植入小鼠股部外侧肌肉陷窝比较ＰＬＡ和ＤＢＭ载体对ｒｈＢＭＰ－２诱导骨形成的影响。通过组织学检查、碱性磷酸酶（ＡＬＰ）和钙含量测定以及骨钙素（ＢＧＰ）放疫测定,进行对比观察。结果：术后２１天,实验组均可见新生软骨细胞和软骨岛,ｒｈＢＭＰ－２／ＰＬＡ和ＤＢＭ／ｒｈＢＭＰ－２组还可见部分骨组织形成,见骨小梁、板层结构和红骨髓,ｒｈＢＭＰ－２／ＰＬＡ组ＰＬＡ部分吸收,ＤＢＭ／ｒｈＢＭＰ－２组ＤＢＭ无吸收迹象。各实验组与对照组对比,ＡＬＰ、ＢＧＰ水平和Ｃａ量均有显著性差异（Ｐ＜０．０５）,ｒｈＢＭＰ－２／ＰＬＡ与ＤＢＭ／ｒｈＢＭＰ－２组在ＡＬＰ和ＢＧＰ水平上相比无显著差异（Ｐ＞０．０５）,但前组比后组的Ｃａ量为高（Ｐ＜０．０５）,这二组与单独植入ｒｈＢＭＰ－２组相比,定量检测指标均有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论：（１）ＰＬＡ和ＤＢＭ均为ＢＭＰ的良好载体;（２）ｒｈＢＭＰ－２／ＰＬＡ是一种新的有价值的骨修复材料     

同种骨基质明胶加石膏修复骨缺损的实验研究

目的研究骨基质明胶加石膏复合物在骨缺损修复过程中的作用。方法新西兰兔１６只,桡骨干缺损为植骨区,实验组植入骨基质明胶加石膏复合物（１６侧）,对照组分别植入骨基质明胶（８侧）和酒精储存骨（８侧）,观察骨缺损的修复情况。结果实验组成骨活跃,１２周时骨缺损已基本修复。对照组也有成骨现象,但进展不如实验组。结论骨基质明胶加石膏复合物为一种良好的骨移植材料。     

载药骨基质明胶缓释体的研制与实验

目的　研制载药骨基质明胶缓释体 ,为人工关节感染和松动的防治提供新方法。方法　将BMG溶于头孢唑林钠溶液 ,通过真空吸附、冻干等处理 ,制得载药BMG。测定其体内、体外释药浓度及持续时间以及载药BMG的诱导成骨能力。结果　载药BMG体外对金葡菌的抑制作用为 2 2d ,体内为 14d。载药BMG体内释药时 ,局部组织浓度高 ,血浆浓度低 ;局部组织早期浓度高 ,以后为稳定的低浓度释放。载药BMG中掺入抗生素后不影响BMG的诱导成骨能力。结论　载药BMG既能持续释放有效浓度的抗生素 ,又具有强的诱导成骨能力 ,可望成为防治人工关节感染和松动的一种新方法。