末端标记间日疟寡核苷酸探针在疟疾监测中的应用

本文报道了应用合成间日疟ＤＮＡ片段经同位素末端标记作为探针．检测了２１份经镜检确诊的间日疟病人血样，结果全部阳性．敏感性可测出０．００１３３％的原虫血症，与培养的恶性疟及正常人血没有交叉反应。随后将该探针应用到疟疾监测中，在山东采集的３１０份发热病人血和２４５份流动人口血，应用本探针检测，未出现阳性结果，经镜检复核．结果相符．在安徽省滁州市采集３５２份病灶点人群血，有２８份出现了阳性，阳性率为７．９５％。对以上血样经ＩＦＡ方法进行抗体测定，显示合成间日疟ＤＮＡ探针杂交结果与抗体阳性率具有明显的一致性。结果表明本合成间日疟ＤＮＡ探对可应用于灭疟后期的疟疾监测．特别对流动人口集中检查和传染源检索具有潜在的应用价值。     

恶性疟原虫FCC1/HN株对青蒿琥酯、咯萘啶等药的体外敏感性

抗药性恶性疟的出现与扩散给全球疟防工作带来了严重的困难 ,东南亚地区及中国南部恶性疟原虫不仅对氯喹产生了抗性 ,而且对多种抗疟药的敏感性明显下降[1-3 ] 。为延缓恶性疟原虫对青蒿素类药物产生抗性 ,作者等体外测定了恶性疟原虫抗青蒿琥酯株对青蒿琥酯、本芴醇、氯喹等药的敏感性[4 -7] 。为提供恶性疟原虫青蒿琥酯及氯喹敏感株 (ＦＣＣ1/ＨＮ )对青蒿琥酯、咯萘啶等药体外敏感性的基础数据 ,作者等于 2 0 0 0年开展了本研究。1　材料与方法1.1　虫株　恶性疟原虫ＦＣＣ1/ＨＮ株系从中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所引进。该株…     

多重PCR技术检测恶性疟原虫抗药性相关分子标志的方法研究

目的 建立恶性疟原虫5个主要抗药性相关基因的单管多重PCR扩增方法，用于恶性疟原虫抗药性分子标志检测。 方法 依据各基因参考序列，运用Primer Premier 5.0和Oligo 6.0软件，设计5对特异性引物，采用Hot Start Taq DNA聚合酶，设置递增延伸温度，对恶性疟原虫标准株（3D7、Dd2和HB3）、分离株（FCC1/HN、 CMH/YN）、现场标本（来源于海南、 云南和缅甸）、 近缘虫种对照（间日疟原虫、 伯氏疟原虫、 食蟹猴疟原虫、 杜氏利什曼原虫和牛源隐孢子虫）和空白对照（以H2O为模板）进行5个抗药性相关基因（包括恶性疟原虫氯喹抗性转运蛋白基因Pfcrt、多药抗性基因Pfmdr1、二氢喋酸合成酶基因Pfdhps、二氢叶酸还原酶基因Pfdhfr和三磷酸腺苷酶第6亚基基因PfATPase6）的单管多重PCR扩增，2%琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增结果，测定扩增产物序列，并与参考序列（3D7株）比对。 结果 经电泳，恶性疟原虫标准株、分离株和现场标本的多重PCR扩增产物均可见5条目标条带。测序结果与参考序列比对，高度同源，最低同源性为98.5%。模板DNA量达0.1 ng即满足扩增要求，近缘虫种对照和空白对照未见扩增产物。 结论 多重PCR技术实现了单管1次反应完成5个抗药性相关基因的扩增，该方法灵敏，特异性好，有助于提高恶性疟原虫抗药性分子标志的检测效率。     

间日疟原虫MSP-1 和 CSP 基因遗传多样性的分析

目的比较间日疟原虫两种主要分子标志(MSP-1 和 CSP)的遗传多样性. 方法分别用MSP-1和CSP基因分型方法鉴定间日疟原虫现场分离株,并进行基因多态性比较和分析. 结果共检测32份海南省现场确诊的间日疟病人血样,MSP-1等位基因型混合感染率为18.75%,平均克隆数1.16;CSP基因型混合感染率为35.29%,平均克隆数为1.47.如果同时考虑两种基因型,混合感染率则为50.00%.空间对应分析发现,热带族与Sal-1型关系密切,PvⅡ型与重组Ⅲ型分布靠近,其他基因型则较分散. 结论同时用MSP-1和CSP两种分子标志检测间日疟原虫,其基因型混合感染率高于用单一标志检测,两种标志检测结果存在一定对应关系.     

1990～2005年松阳县疟疾监测结果分析

1990～2005年松阳县累计血检三热病人9 760例,检出疟原虫阳性124例,报告疟疾126例,均为本地居民,其中以输入性病例(本地居民外出感染发病)为主,占91.27%(115/126);疟疾年平均发病率3.45/10万,带虫发病率(API)3.39/10万,呈下降趋势且持续维持在较低水平.     

约氏疟原虫感染小鼠白细胞介素—2的观察

用非致死性约氏疟原虫对C57BL/6J、NIH和ICR小鼠进行初次感染和对初次感染阴转后的NIH小鼠再次感染,观察其原虫血症并测定小鼠感染过程中其脾脏淋巴细胞在Con A或约氏疟原虫抗原诱生的白细胞介素-2(IL-2)水平。结果:(1)C57BL/6J、NIH和ICR小鼠感染前Con A诱生的IL-2水平(SI的X±SE)分别为223.71±19.32、122.13±28.91和72.76±30.60,初次感染后最高原虫血症(％的X±SE)分别为2.70±0.29、14.50±2.75和31.30±1.80;提示,这3种小鼠感染前固有的Con A诱生的IL-2水平高低可能影响其对约氏疟原虫初次感染的易感性。(2)NIH小鼠初次接种约氏疟原虫后34d,抗原诱生的IL-2才出现;而再次接种后d_3、d_(19)IL-2水平升高,并使这些小鼠对再次感染有明显的抵抗力。这提示抗原诱生的IL-2与鼠疟保护性免疫的调节有关。     

恶性疟原虫氯喹抗药性基因pfcrt研究进展

自从1959年第1例抗氯喹的恶性疟病人出现以来,恶性疟原虫氯喹抗药性(chloroquineresistance,CQR)已经遍及所有恶性疟流行地区,在东南亚地区CQR引发了更为严重的公共卫生问题,在我国云南、海南等省也有CQR恶性疟的流行。因此,对恶性疟原虫氯喹抗药性的研究已经成为当前疟疾防治研究中的一个重点。随着恶性疟原虫基因组研究的进展,抗药性基因已经成为CQR研究的热点。国外研究     

云南东南部地区恶性疟原虫对氯喹敏感性纵向观察

目的了解恶性疟原虫对氯喹的敏感性变化趋势,指导合理用药。方法采用WHO推荐的恶性疟原虫对抗疟药敏感性体内临床观察法,进行纵向监测。结果1981～1983年共观察恶性疟病人78例,其中对氯喹敏感(S)2例,抗性(R)76例,包括Ⅰ级抗性(RⅠ)34例、Ⅱ级抗性(RⅡ)12例、Ⅲ级抗性(RⅢ)30例,抗性率为97.44%。2005～2006年共观察32例,其中S19例,S或RⅠ2例,抗性11例(RⅠ8例、RⅡ1例、RⅢ2例),抗性率为36.67%(11/30)。两组病例对氯喹的抗性率和抗性程度差异均有统计学意义(P<0.01)。结论云南省南部地区恶性疟原虫对氯喹的抗性较1983年明显下降,但仍有34.38%(11/32)的抗性病例,且存在着RⅢ抗性病例,提示当前氯喹仍不能用于当地恶性疟现症病人的治疗。     

分子技术在疟疾诊断及其抗药性检测领域的应用

疟疾是目前威胁人类健康最严重的传染性疾病之一.早期诊断和及时有效治疗是缩短其感染期及防治并发症、降低死亡率的重要手段.缺乏快速、准确的诊断方法和疟原虫产生的抗药性是当今世界各地疟疾防治工作面临的主要问题.该文就疟疾诊断及抗药性检测方面的进展,特别是分子生物学技术在这一领域的应用进行综述.     

恶性疟原虫氯喹敏感株与抗性株对青蒿素类药物体外敏感性的研究

目的 测定恶性疟原虫氯喹敏感株与抗性株对青蒿素类药物的体外敏感性. 方法 运用体外微量法与酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定青蒿琥酯、蒿甲醚及双氢青蒿素等3种青蒿素类抗疟药物对体外培养的恶性疟原虫氯喹敏感株与氯喹抗性株的体外敏感性,并比较两种方法测定的IC50值. 结果 体外微量法测定的3种药物对恶性疟原虫氯喹敏感株的IC50值依次为3.12 nmol/L、4.30 nmol/L、2.18 nmol/L,对恶性疟原虫氯喹抗性株的IC50值依次为4.31nmol/L、3.90 nmol/L、3.17 nmol/L;同时,将体外微量法与ELISA法所获的结果进行相关性分析,两种方法结果基本一致(r2=0.93,P＜0.001). 结论 恶性疟原虫氯喹抗性株对青蒿素类药物无明显的交叉抗性;ELISA法可用于恶性疟原虫对抗疟药物的体外敏感性检测.