Vitek2 Compact AST-P639中国定制药敏卡对金黄色葡萄球菌体外药敏、耐药表型及AES修正能力评估

目的 评估Vitek2 Compact AST-P639中国定制药敏卡(简称中国定制卡)测定金黄色葡萄球菌体外药敏、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、红霉素诱导克林霉素耐药试验及高级专家系统(AES)的修正能力。方法 选取2020年5月至2021年9月绍兴市人民医院临床分离的非重复金黄色葡萄球菌100株,分别采用中国定制卡及微量肉汤稀释法测定万古霉素、替考拉宁、替加环素、利奈唑胺、达托霉素、苯唑西林、红霉素、克林霉素、左氧氟沙星、复方新诺明和利福平的敏感性。分别以微量肉汤稀释法、PCR和D试验为参考方法,评估中国定制卡的可靠性,并对AES修正能力进行评估。结果 中国定制卡对金黄色葡萄球菌体外药敏分类一致性(CA)为95.38%,极大错误(VME)、大错误(ME)、小错误(MIE)分别为0.31%、3.77%、0.54%,其中万古霉素、替考拉宁、替加环素、利奈唑烷、达托霉素CA均为100.00%,苯唑西林、红霉素、克林霉素、左氧氟沙星、复方新诺明、利福平、MRSA、红霉素诱导克林霉素耐药试验的CA分别为95.00%、95.00%、66.00%、94.00%、98.00%、97.00%...     

红细胞在葡萄球菌肠毒素B刺激人PBMC增殖中的辅佐作用

通过葡萄球菌肠毒素B(SEB)刺激人外周血淋巴细胞增殖,对完整红细胞及红细胞膜能否在提呈抗原中起辅佐作用进行了研究,并与单核细胞的辅佐作用进行了对比。结果显示,在SEB刺激去除单核细胞的人外周血淋巴细胞中,分别加入红细胞、红细胞膜碎片或单核细胞后,淋巴细胞增殖均有明显升高(P<0.01)。当同时加入红细胞和单核细胞时,淋巴细胞增殖的幅度略高于单独加入红细胞或单核细胞组。提示红细胞具有与单核细胞作用类似而机理不同的辅佐作用。     

40株MRSA菌消毒剂及抗菌药物耐药基因研究

近年国外学者从金黄色葡萄球菌中检出耐消毒剂的菌株。为了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的耐消毒剂和抗菌药物耐药基因状况 ,我们收集了 2 0 0 3年 12月～ 2 0 0 4年 5月苏州大学医学院附属第三医院分离到的 2 0株MRSA菌和解放军 98医院分离到的 2 0株MRSA菌 ,共 4 0株。对其进行了耐消毒剂基因 (qacA)和 β内酰胺类耐药相关基因 (mecA、TEM)、氨基糖苷类耐药相关基因 [aac(6′) /aph(2″)、aph(3′) Ⅲ、ant(3″) Ⅰ、ant(2″) Ⅰ、ant(6 ) Ⅰ ]、四环素耐药相关基因 (tetM)、红霉素耐药相关基因 (erm )、万古霉素耐药相…     

金黄色葡萄球菌 eap 基因的克隆与表达

 目的 构建携带 eap 基因的原核表达载体，诱导表达具有活性的重组 EAP 融合蛋白。 方法 PCR 法扩增金黄色葡萄球菌基因组 DNA，回收、 纯化的扩增产物与 pMD18-T 载体相连接得重组质粒 pMD18-T-EAP，转化 E.coli BL21（DE3）感受态细胞，酶切鉴定；未酶切组作为对照组重组质粒 pMD18-T-EAP 和 pET28a（+）表达载体分别用 Nde I 和 Xho I 限制性内切酶双酶切、连接，转化 E.coli BL21（DE3）感受态细胞，酶切鉴定；空载体作为对照组。用不同浓度（终浓度 1、2、4、8 mmol/L）和不同诱导时间（1、2、3、4、5、6 h）的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）对阳性重组菌进行表达优化，分别取 E.coli上清液和沉淀做电泳分析。应用 MagneHis^TM 蛋白纯化系统纯化重组 EAP 融合蛋白，并通过薄层扫描测定蛋白质的浓度。 结果 所获 eap 基因与 GeneBank 的基因序列同源性 > 99%；氨基酸同源性达 100%。重组质粒经 IPTG 诱导，阳性重组菌转化子均有表达；当吸光度（A ）值等于 0.6 ~ 0.8 时，相对分子质量约 70 000 处出现目的蛋白条带。破碎的重组菌 pET28a-EAP上清液中目的蛋白条带较清楚，沉淀中几乎看不到。终浓度 1 mmol/L 为最佳蛋白表达工作浓度。IPTG 诱导 1 h 重组 EAP 融合蛋白有一定量的表达，随着时间的延长，表达量增加不明显，3 h 时的表达量达最高，之后，蛋白表达量变化不明显。表达的重组 EAP 融合蛋白含量占全菌体蛋白的 29.6%。 结论 成功地克隆和表达了金黄色葡萄球菌重组 EAP 融合蛋白，为进一步研究以 EAP 蛋白作为免疫原预防和治疗由金黄色葡萄球菌引起的疾病奠定基础。     

超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素基因B的原核表达

目的构建重组pET-30a-SEB原核表达载体,转化感受态大肠杆菌BL-21(DE3),诱导表达超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcalenterotoxinB,SEB)。方法利用PCR技术从产SEB的金黄色葡萄球菌标准菌株CMCC-26075基因组DNA中克隆SEB全长序列,将其克隆到pGEM-TEasy载体中并进行测序。构建pET-30a-SEB原核表达质粒,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代β-D半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,经镍离子螯合亲和层析纯化后免疫鉴定。结果PCR获得超抗原SEB基因片段,与克隆载体连接后经测序与文献报道的基本一致;成功构建了pET-30a-SEB原核表达质粒且成功诱导表达出相对分子质量(Mr)约31×103的蛋白。结论成功克隆了seb基因序列,并进行了原核表达和鉴定,获得了SEB蛋白,为后续对超抗原SEB的进一步研究奠定了基础。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec基因型及耐药谱研究

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus ，MRSA）常引起医院感染的暴发流行。MRSA由于获得了外源性甲氧西林耐药决定子A（methicillin resistance determinant A，mecA），该基因编码青霉素结合蛋白2a，造成对所有β内酰胺类药物耐药。mec基因存在于葡萄球菌盒式染色体（Staphylococcal cassene chromosome mec，SCCmec）中，SCCmec是一种新型的可移动元件，不同于噬菌体和转座子，而且该元件还携带除mecA基因外的其他抗生素耐药基因，造成多重耐药。     

Lack of Association between fbe Gene with Adherence and Biofilm Forrr：ation in Staphylococcus epidermidis Clinical Isolates

Biofilm formation plays a major role in the pathogenesis of nosocomial infections caused by Staphylococcus epidermidis (S. epidermidis). It has been suggested that protein encoded by the foe (fibrinogen binding protein) gene of S. epidermidis enhances bacterial adherence to medical devices and biofilm formation by binding to host fibrinogen (Fg). In this study, a 1.7 kbfoe gene fragment was amplified in 111 of 115 strains of S. epidermidis chnical isolates using PCR. Contrary to expectations, only 14 strains showed marginally increased adherence to Fg-coated polystyrene wells compared with BSA coated wells. Quantitative real-time PCR revealed no statistically significant difference in Fbe expression between Fg binding strains and Fg non-binding strains. Fttahermore, in the presence of soluble Fg, S. epidermdis biofilm formation decreased in a dose-dependent manner. In contrast, the Staphylococcus aureus ( S. aureus ) strain Cowan I and other 5 S. aureus clinical isolates showed a substantial increase in both adherence and biofilm formation in the presence of Fg. The resuits suggest that in S. epidermidis the foe gene may not be associated with bacterial adherence and biofilm formation.     

家兔葡萄球菌性发热及其热限的探讨

采用加热杀死的白色葡萄球菌菌体作激活物,给家兔耳缘静脉注射,观察剂量-发热效应,血浆EP的活性以及血浆和脑脊液中cAMP含量变化。结果表明,在一定的范围内,随剂量递增,发热效应相应加强,但达到一定浓度,可出现热限;发热时,血浆可检出循环EP;血浆致热活性,脑脊液cAMP含量随发热效应增强而升高,出现热限时,则不再升高。作者推论:cAMP可能是葡萄球菌性发热的重要中枢介质;EP的产生释放受限和体温调节中枢内cAMP的产生受限可能是构成葡萄球菌性热限的重要因素。     

耐甲氧西林的金黄葡萄球菌(MRSA)起源和分子进化的研究进展

金黄葡萄球菌（简称金葡菌）目前已经成为世界范围内引起人类感染性疾病的首要病原菌，可以引起从皮肤软组织感染到危急人类生命的一系列疾病，如心内膜炎、肺炎、毒素休克综合征（TSS）等。耐甲氧西林的金黄葡萄球菌（MRSA）多重耐药严重，通常对β-内酰胺类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类、四环素类、大环内酯类、林可霉素等多种抗菌药物耐药，