DCs疫苗治疗原发性胆囊癌研究进展

病例,女,46岁,农民.因为右上腹痛伴畏冷、发热、黄疸8 d入院.10年前曾有胆囊切除及胆总管探查手术史.B超检查:提示胆总管下段异常回声伴肝内外胆管扩张,肝内胴管多发结石,脾脏肿大.入院诊断:(1)阻塞性黄疽;(2)肝胆管结石;(3)胆管炎.入院后保守治疗5 d,病情未见改善,遂在全麻下行胆总管切开取石.术中在胆总管下段取出直径2.0 cm橄榄形结石一枚.继续探查左右肝管见肝内胆管有较多结石.     

HO-1在七氟烷预处理抑制大鼠氧糖剥夺海马神经元凋亡中的作用

目的 探讨血红素氧合酶-1(HO-1)在七氟烷预处理抑制大鼠氧糖剥夺海马神经元凋亡中的作用.方法 出生48 h内的Wistar大鼠,体外培养海马神经元,随机分为6组,每组108孔,正常对照组(C组):不做任何处理;2%七氟烷预处理组(S1组):2%七氟烷预处理60 min后正常培养24 h;OGD组:缺糖缺氧45 min后复糖复氧,再正常培养24 h以制备氧糖剥夺模型;2%七氟烷预处理+OGD 组(S1+OGD组)和4%七氟烷预处理+OGD组(S2+OGD组):分别经2%、4%七氟烷预处理后制备氧糖剥夺模型;4%七氟烷预处理+ZnPPⅨ+OGD(Z组):4%七氟烷预处理同时在培养液中加入ZnPPⅨ(终浓度10 μmol/L),其余处理同S2+OGD组.正常培养24 h时检测神经元存活率、凋亡率和HO-1蛋白及其mRNA的表达水平.结果 与C组比较,OGD组、S1+OGD组、S2+OGD组和Z组海马神经元存活率降低,凋亡率升高,海马神经元HO-1 mRNA及其蛋白表达上调,S1组海马神经元HO-1 mRNA 及其蛋白表达上调(P<0.01),神经元存活率、凋亡率差异无统计学意义(P>0.05);与OGD组比较,S1+OGD组、S2+OGD组海马神经元存活率升高,凋亡率降低,海马神经元HO-1 mRNA及其蛋白表达上调,Z组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与S1+OGD组比较,S2+OGD组海马神经元存活率升高,凋亡率降低,海马神经元HO-1 mRNA及其蛋白表达上调(P<0.01);与S2+OGD组比较,Z组海马神经元存活率降低,凋亡率升高,海马神经元HO-1 mRNA及其蛋白表达下调(P<0.01).结论 HO-1可能参与了七氟烷预处理抑制大鼠氧糖剥夺海马神经元凋亡的机制.     

血红素氧合酶-1基因在大鼠供肝缺血再灌注损伤中的抗炎作用

目的 探讨血红素氧合酶-1(HO-1)基因在大鼠供肝缺血再灌损伤中的抗炎作用.方法 将32只雄性SD大鼠分为实验组(16只)和对照组(16只).将已转染HO-1基因的腺病毒载体和空载体分别注入实验组和对照组供体大鼠腹腔(各8只).36 h后取供肝,冷保存4 h后行大鼠原位肝移植.缺血再灌注6 h后检测血清ALT、AST、TNF-α、肝组织HO-1蛋白的表达以及阳性巨噬细胞计数.采用t检验和秩和检验行统计学分析.结果 (1)实验组血清ALT和AST分别为(439±81)U/L和(1110±73)U/L,对照组分别为(1005±120)U/L和(1583±175)U/L,两组比较,差异有统计学意义(t=11.090,7.050,P<0.05).(2)实验组和对照组血清TNF-α分别为(15±13)μg/L和(52±11)μg/L,两组比较,差异有统计学意义(t=0.009,P<0.05).(3)实验组和对照组肝组织HO-1蛋白的表达分别为0.28±0.07和0.04±0.03,两组比较,差异有统计学意义(T=42.5,P<0.05).(4)实验组中HO-1阳性细胞大量表达于血管区,其阳性巨噬细胞的计数为2±1,显著少于对照组的8±2(t=0.007,P<0.05).结论 HO-1在大鼠供肝缺血再灌注损伤中可能通过抑制肝巨噬细胞的激活,降低TNF-α的释放而发挥抗炎作用.     

P38MAPK信号通路在失血性休克复苏诱发急性肺损伤小鼠HO-1表达上调中的作用

目的 探讨p38分裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在失血性休克复苏诱发急性肺损伤小鼠血红素加氧酶1(HO-1)表达上调中的作用.方法 SPF级野生型小鼠C3H/HeN32只32只,10～12周龄,体重20～25 g,随机分为4组(n=8),假手术组(S组):只进行手术操作;失血性休克复苏组(HSR组):股动脉放血,至MAP为40 mm Hg,通过放血和回输血液维持MAP 35～45mmHg,60 min后回输全部血液和等失血量的乳酸钠林格氏液复苏;FR167653组(FR组):静脉注射p38MAPK抑制剂FR167653 5 mg/kg;FR+HSR组:于放血前30 min静脉注射FR167653 5 mg/kg.复苏后6 h处死小鼠,取肺组织,观察病理学结果,并进行病理学评分,计算肺湿/干重比,检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)、IL-10、IL-6和HO-1水平以及p38MAPK的激活水平.结果 与S组比较,HSR组肺组织病理学评分、肺湿/干重比、MPO、IL-6、IL-10、HO-1和p38MAPK的激活水平升高,HSR+FR组肺组织病理学评分、肺湿/干重比和HO-1表达水平升高(P＜0.01),FR组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与HSR组比较,HSR+FR组肺组织病理学评分、肺湿/干重比、MPO、IL-6、IL-10、HO-1和p38 MAPK激活水平降低(P＜0.01).结论 p38MAPK信号通路介导了失血性休克复苏诱发急性肺损伤小鼠HO-1的表达上调.     

小剂量氯胺酮预处理对大鼠肠缺血/再灌注后肝脏血红素加氧酶-1表达的影响

目的 观察小剂量氯胺酮对血红素加氧酶-1 (heme-oxygenase 1,HO-1)在大鼠肠缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)后肝脏中表达的影响,并对其可能的保护机制作一初步探讨. 方法 48只雄性成年SD大鼠按随机数字表法分为A组(氯胺酮10 mg/kg术前30 min腹腔注射+假手术)、B组(盐水0.2 ml术前30 min腹腔注射+假手术)、C组(氯胺酮10 mg/kg术前30 min腹腔注射+小肠I/R)、D组(盐水0.2 ml术前30 min腹腔注射+小肠I/R)、E组(锌原卟啉5 mg/kg、氯胺酮10 mg/kg术前30 min腹腔注射+小肠I/R)、F组(锌原卟啉5 mg/kg、盐水0.2 ml术前30 min腹腔注射+小肠I/R),每组8只.小肠I/R造模组大鼠通过夹闭肠系膜上动脉60 min,然后松血管夹,于再灌注6h后取材,测定肝组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;采用免疫组化法测定肝组织HO-1的表达和定量;光镜下观察肝脏病理学改变;取外周静脉血测血清谷丙转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,GPT)、谷草转氨酶(glutamic-oxaloacetic transaminase,GOT). 结果 A、B两组间各项数据比较差异无统计学意义(P＞0.05);各缺血造模组大鼠肝组织MDA含量:C组[(2.69±0.35) μmol/g]、D组[(4.62±0.36) μmol/g]、E组[(4.35±0.24) μmol/g]、F组[(4.74±0.34) μmol/g]与B组[(1.08±0.26) μmol/g]比较,显著升高;SOD活力:C组[(129±6) μU/L]、D组[(102±5) μU/L]、E组[(99±4)μU/L]、F组[(96±6)μU/L]与B组[(133±7) μU/L]比较,显著下降;血清GOT、GPT含量:C组[GPT(212±21) U/L,GOT(129±16) U/L]、D组[GPT(416±33) U/L,GOT(362±15)U/L]、E组[GPT(407±29) U/L,GOT(359±14) U/L]、F组[GPT(414-±40) U/L,GOT(366±16) U/L]与B组[(GPT(53±9) U/L,GOT(83±7) U/L]比较,显著升高;HO-1表达:C组(0.472±0.126)、D组(0.324±0.078)、E组(0.337±0.092)、F组(0.328±0.083) OD与B组(0.078±0.010) OD比较,显著上调(P＜0.05或P＜0.01);与D组比较,C组血清GPT、GOT、肝组织MDA含量均显著降低,SOD活力显著上升,HO-1表达上调(P＜0.05);与D组比较,E组、F组血清GPT、GOT及MDA、SOD值差异无统计学意义(D0.05);E组和C组比较,血清GPT、GOT,肝组织MDA含量显著升高,SOD活力显著下降,HO-1表达下调(P＜0.05). 结论 小剂量氯胺酮预处理能减轻肠I/R后造成的肝脏损伤,这种作用在一定程度上是通过上调HO-1的表达来实现的.     

左卡尼汀对肾缺血再灌注损伤的抗氧化作用及其机制

目的研究左卡尼汀对大鼠肾缺血再灌注损伤的抗氧化作用并探讨其机制。方法将大鼠随机分为3组：对照组（C组）,缺血再灌注组（IR组）,左卡尼汀组（LC组）。C组不予缺血再灌注处理,IR组及LC组建立肾脏IR模型。再灌注6h后检测各组血清肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）水平;测定肾组织超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量;RT-PCR检测肾组织核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素氧化酶-1（HO-1）mRNA含量;Western-blot检测各组肾组织Nrf2及HO-1蛋白表达水平。结果 LC组血清Cr、BUN水平低于IR组[（74.17±12.80）μmol/L、（24.28±2.58）mmol/L vs.（112.83±17.45）μmol/L、（35.13±6.01）mmol/L],差异具有统计学意义（P〈0.01）。LC组肾组织SOD活性高于IR组[（39.55±6.61）kU/g vs.（28.05±4.37）kU/g],差异具有统计学意义（P〈0.01）;MDA显著降低于IR组[（4.15±0.69）μmol/g vs.（6.12±1.08）μmol/g],差异具有统计学意义（P〈0.01）。IR组Nrf2、HO-1mRNA及蛋白表达水平高于C组（P〈0.01）,低于LC组（P〈0.01）。结论左卡尼汀对肾脏缺血再灌注损伤具有明显保护作用,其机制可能为激活Keapl-Nrf2-ARE通路进而诱导HO-1的表达。     

调控血红素加氧酶1的信号转导通路的研究进展

血红素加氧酶是一种降解血红素的限速酶,血红素加氧酶1是血红素加氧酶的诱导亚型,与多种疾病的发生发展有着密切关系,目前成为诸多医学研究领域的热点.血红素加氧酶1是机体重要的内源性保护系统,多种理化因素通过不同的细胞内信号转导通路诱导血红素加氧酶1表达,这些信号通路包括促分裂原活化蛋白激酶、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶途径,Janus蛋白酪氨酸激酶/信号转导和转录活化蛋白途径及蛋白激酶类途径.     

p38MAPK信号通路在内毒素性休克诱发急性肺损伤大鼠肺组织HO-1表达上调中的作用

目的 评价p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在内毒素性休克诱发急性肺损伤大鼠肺组织血红素加氧酶-1(HO-1)表达上调中的作用.方法 雄性SD大鼠48只,8周龄,体重180～ 200g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=12):对照组(C组)、内毒素性休克组(LS组)、内毒素性休克+ p38MAPK特异性抑制剂SB203580组(LSS组)和SB203580组(SB组).C组和SB组股静脉注射生理盐水0.5 ml;LS和LSS组股静脉注射LPS 10 mg/kg(溶于0.5ml生理盐水);2h内MAP下降至基础值的75％时,C组和IS组股静脉输注10％二甲基亚砜0.1ml;LSS组和SB组股静脉输注SB203580 5 μmol/kg(溶于0.1 ml 10％二甲基亚砜),输注速率0.01 ml/min.给予LPS或生理盐水后6h时采集动脉血样,进行血气分析,计算氧合指数(PaO2/FiO2);然后处死大鼠取肺组织,光镜下观察病理学结果,并进行病理学损伤评分,计算肺含水率,测定SOD活性、MDA含量、HO-1 mRNA及其蛋白、p38MAPK蛋白和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白的表达.结果 与C组比较,IS组和LSS组氧合指数和SOD活性降低,病理学损伤评分、肺含水率和MDA含量升高,肺组织HO-1 mRNA及其蛋白和p-p38MAPK蛋白的表达上调(P＜0.05),p38MAPK蛋白表达差异无统计学意义,SB组各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与LS组比较,LSS组氧合指数和SOD活性升高,病理学损伤评分、肺含水率和MDA含量降低,肺组织HO-1 mRNA及其蛋白表达上调,p-p38MAPK蛋白表达下调(P＜0.05),p38MAPK蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 抑制p38MAPK信号通路可导致内毒素性休克诱发急性肺损伤大鼠肺组织HO-1表达上调.     

血红素加氧酶-1通过调控bHLH亮氨酸拉链转录因子E3/高尔基体应激反应减轻小鼠内毒素性急性肺损伤

目的探讨在小鼠内毒素性急性肺损伤(ALI)中血红素加氧酶-1(HO-1)对bHLH亮氨酸拉链转录因子E3(TFE3)表达与核转位以及高尔基体应激反应的影响。方法将24只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为4组(每组6只):空白对照组(Ctrl组)、内毒素[脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)]急性肺损伤组(LPS组)、内毒素性急性肺损伤+HO-1激动剂氯高铁血红素(Hemin)组(LPS+Hemin组)和Hemin组。Ctrl组尾静脉注射生理盐水0.5 ml;LPS组尾静脉注射LPS 10 mg/kg建立小鼠内毒素性ALI模型;LPS+Hemin组腹腔注射Hemin 50 mg/kg, 1 h后尾静脉注射LPS 10 mg/kg建立内毒素性ALI模型;Hemin组腹腔注射Hemin 50 mg/kg。造模12 h后对小鼠进行断颈处死, 收取肺组织。苏木精-伊红染色(H-E染色)观察小鼠肺组织病理学变化并行肺损伤评分;计算肺组织湿重/干重(W/D)值;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测肺组织细胞凋亡指数;酶联免疫吸附测定(ELISA)法...     

缺氧诱导因子-1调控血红素氧化酶-1在急性肾损伤的作用机制

目的探究缺氧诱导因子-1(HIF-1)在肾缺血再灌注损伤中引起急性肾损伤(AKI)的作用及机制的研究。方法 C57小鼠20只(6～8周龄, 体重20～25 g), 其中10只为野生型(WT)鼠, 10只为纯合子肾小管上皮细胞特异敲低HIF-1(cKO)小鼠。按照简单随机法进行分组, 将WT小鼠随机分为假手术(Sham)组和缺血再灌注(IR)组, 每组各5只;cKO小鼠分随机为Sham组与IR组, 每组各5只。用1%戊巴比妥钠注射小鼠尾静脉, 手术组分离两侧肾动静脉结扎60 min后解除夹闭, 24 h后切除肾脏, 构建肾缺血再灌注模型。通过苏木精-伊红(HE)染色判断肾小管损伤情况;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肾脏组织中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和铁含量;蛋白质印迹法(Western blot)检测血红素氧化酶1(HO-1)及铁死亡相关指标的蛋白表达水平;免疫组织化学染色(IHC)检测HIF-1、HO-1、铁死亡相关组织的表达。两组间差异比较采用单样本t检验。结果 HE染色结果显示, WT小鼠中IR组肾小管上皮细胞受损程度高于Sham组(9.78±1.07比2.43±0...