吲哚胺2,3-双加氧酶在移植免疫中的作用研究进展

目的总结吲哚胺2，3-双加氧酶（indoleamine2，3-dioxygenase，IDO）参与免疫调节的可能机制，以及在移植免疫过程中的作用。方法广泛查阅近年国内外相关文献，对IDO分布、免疫调节机制及其在移植免疫中的作用研究进展进行回顾总结与分析。结果IDO通过降解局部组织微环境中的色氨酸、抑制宿主同种异体T细胞增殖而发挥免疫调节作用。应用转基因技术将IDO基因整合至目的细胞基因中并表达IDO，体内试验表明可明显延长异体移植物的平均存活时间。结论IDO在移植免疫中有广阔的应用前景，为提高异体移植物术后长期存活率提供了新的思路。     

小剂量盐酸水苏碱对过氧化氢所致肾小管上皮细胞凋亡的保护作用

目的：益母草作为一种传统中药常用作多种药剂的组方,其具有抗氧化作用。盐酸水苏碱是益母草的有效成分,本研究旨在探讨盐酸水苏碱对过氧化氢所致肾小管上皮细胞损伤的作用。方法：0.4mmol/L H2O2加入培养的肾小管上皮细胞（NRK52E）,同时观察不同剂量的盐酸水苏碱（14.04mg/L,28.08mg/L,42.12mg/L）对过氧化氢所致肾小管上皮细胞损伤的作用。HE染色观察细胞凋亡与细胞有丝分裂指数及细胞总数。Western blot检测各组细胞Bcl-2、PCNA、HO-1蛋白表达水平。结果：H2O2组细胞其凋亡指数较小剂量盐酸水苏碱＋H2O2组及正常对照组明显升高[（9.57±0.59）vs（5.97±0.68）,P〈0.001;（9.57±0.59）vs（2.6±0.72）,P〈0.001）。H2O2组细胞总数较小剂量盐酸水苏碱＋H2O2组及正常对照组明显减少[（714.33±6）mm^2 vs（929±34.66）mm^2,P〈0.01;（714.33±67）mm^2 vs（978.83±15.89）mm^2,P〈0.01。小剂量盐酸水苏碱对HO-1无影响,中、大剂量盐酸水苏碱可使HO-1表达减少;小剂量盐酸水苏碱可使Bcl-2表达增加。各组PCNA表达及有丝分裂指数无差异。结论：小剂量盐酸水苏碱通过上调Bcl-2蛋白表达保护过氧化氢所致肾小管上皮细胞损伤,减少肾小管上皮细胞凋亡,并非通过减轻氧化应激途径;中大剂量盐酸水苏碱可加重过氧化氢所致的氧化应激状态。     

钴原卟啉诱导血红素氧合酶-1高表达减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤

目的 探讨钴原卟啉(CoPP)诱导血红素氧合酶-1(HO-1)高表达对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)的影响及其机理.方法 以Wistar大鼠为实验对象,CoPP组分别于左肾血流阻断前48 h和24 h腹腔注射CoPP 2.5 mg/kg,然后阻断左肾血流47 min,恢复左肾血流的同时切取大鼠右肾,采用免疫组织化学染色和免疫印迹法检测其HO-1的表达.在再灌注24 h后,处死大鼠,取其下腔静脉血和左肾,测定血肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)浓度,观察肾组织学变化,检测肾组织中HO-1的表达.IRI组除不用CoPP处理外,其余同CoPP组.CoPP组和IRI组另有部分大鼠的血流阻断时间延长至80 min,恢复血流后不处死,观察14 d,记录其存活情况.结果 IRI组血清Cr及BUN分别为(134.37±24.26)μmol/L和(30.10±3.09)mmol/L,明显高于CoPP组的(48.92±12.92)μmol/L和(13.99±5.00)mmol/L(P＜0.05).IRI组肾小管细胞大片坏死,管型形成,与之相比,CoPP组肾小管坏死范围稍小,但肾小管病变范围仍较广泛,肾小管上皮细胞多处于水变性阶段,"缺血样"肾小球减少,管型形成较少.缺血前及再灌注24 h后,CoPP组的肾组织中HO-1均为高表达,主要位于肾间质的毛细血管处,IRI组再灌注24 h后也见肾组织中HO-1为高表达.术后14 d内,IRI组的6只大鼠中有4只死亡,而CoPP组的5只大鼠全部存活,两组大鼠存活率的差异有统计学意义(P＜0.05).结论 缺血前使用CoPP可减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤,该保护作用可能是通过CoPP诱导肾脏高表达HO-1来实现的.     

血红素氧合酶1对大鼠心肌细胞急性损伤的保护作用

目的 了解血红素氧合酶1(HO-1)对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞损伤的保护作用及其机制. 方法分离培养SD乳鼠心肌细胞,根据细胞悬液中所加刺激物的不同分为对照组(A组):常规培养;LPS组(B组):培养液中加入终浓度为30 μmol/L的LPS,作用1 h;LPS+氯化血红素(heroin)组(C组):加入终浓度为5 μmol/L的heroin,作用1 h后再加入30 μmol/L的LPS作用1 h;LPS+ZnPP组(D组):加入终浓度为3 μmol/L的ZnPPⅨ,作用1 h后再加入30 μmol/L的LPS作用1 h.硫代巴比妥酸比色法及黄嘌呤氧化酶法测定各组心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量;检测心肌细胞节律、存活率及凋亡率;用反转录-PCR法检测HO-1 mRNA表达;蛋白质印迹法检测心肌细胞HO-1、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子кB(NF-кB)的表达. 结果 B、C、D组LDH和MDA值分别为(113±15)、(79±13)、(154±22)U/L和(1.88±0.36)、(1.16±0.32)、(2.84±0.44)mmol/L,高于A组[(69±10)U/L、(0.87±0.25)mmol/L,P<0.05],而以上3组的SOD值[(17.8±1.8)、(22.5±2.4)、(13.4±1.5)U/mL]却低于A组[(24.3±3.6)U/mL,P<0.05].B、C、D组心肌细胞节律,凋亡率均高于A组(P<0.05),存活率低于A组(P<0.05).B、C、D组心肌细胞HO-1 mRNA表达均高于A组(P<0.05),其中C组最高.B、C、D组心肌细胞HO-1、TNF-α、NF-кB值均高于A组(P<0.05),其中C组的HO-1值最高,D组TNF-α、NF-кB值最高. 结论 LPS对心肌细胞有明显的损伤作用.HO-1可能通过抗炎性反应、减轻氧化应激以及减少细胞凋亡途径,对心肌细胞产生保护作用.     

TAT-血红素氧合酶-1融合蛋白对L-02细胞的转导效果

目的 观察TAT-血红素氧合酶-1(HO-1)融合蛋白对L-02细胞的转导能力,细胞毒性和转导后细胞内HO-1活性,评价其转导效果.方法 L-02细胞与FITC标记的TAT-HO-1融合蛋白孵育4 h后,荧光显微镜下观察TAT-HO-1融合蛋白转导入L-02细胞的情况.L-02细胞与TAT-HO-1融合蛋白孵育4 h后,采用CCK-8方法 测定L-02细胞的活力.采用化学法测定HO-1活性.结果 与FITC标记的TAT-HO-1融合蛋白孵育后,L-02细胞内均匀分布绿色荧光;与TAT-HO-1融合蛋白孵育后,L-02细胞活力无明显改变,HO-1活性明显升高.结论 TAT-HO-1融合蛋白可有效地转导人L-02细胞,可明显提高细胞内HO-1活性,且无细胞毒性.     

肠组织血红素加氧酶-1在失血性休克复苏大鼠肠粘膜损伤中的作用

失血性休克是创伤及外科手术中较常见的并发症，此时发生全身血流再分布，导致肠道血流量减少，绒毛顶部的粘膜细胞缺血、缺氧、坏死和脱落，复苏时的再灌注可加重肠粘膜损伤，导致肠粘膜屏障受损，肠道内大量细菌向肠腔外迁移，此过程称为细菌移位，可触发全身炎性反应和多器官功能衰竭。血红素加氧酶（HO）作为血红素代谢过程中的起始酶和限速酶，包括3种同工酶：HO-1、HO-2和HO-3，其中只有HO-1是诱导型酶。HO-1表达上调可减轻失血复苏大鼠肝损伤。HO-1在失血性休克复苏时肠粘膜损伤中的作用有待进一步探讨。本研究拟评价肠组织HO-1在失血性休克复苏大鼠肠粘膜损伤中的作用。     

氯高铁血红素预先给药对感染性休克大鼠心肌损伤的影响

目的 探讨氯高铁血红素预先给药对感染性休克大鼠心肌损伤的影响.方法 健康清洁级SD大鼠20只,雌雄不拘,2～2.5月龄,体重160～185 g,随机分为2组(n=10),感染性休克组(S组)单次腹腔注射0.9%NaCl溶液1 ml,氯高铁血红素预先给药组(H组)单次腹腔注射氯高铁血红素100 mg/kg(1 ml).2组均于给药后24 h采用静脉注射脂多糖(LPS)10 mg/kg(0.5 ml)制备感染性休克模型.于静脉注射LPS前、注射LPS后30、60和90 min时,记录左心室收缩压(LVSP)和左心室压力最大上升和下降速率(±dp/dtmax).于静脉注射LPS后6 h经颈总动脉采集血标本,放血处死大鼠,取左心室心肌组织,测定血浆乳酸脱氢酶(DH)和肌酸激酶(CK)活性、全血一氧化碳血红蛋白(COHb)浓度及心肌血红素氧合酶(HO)-1 mRNA、HO-2 mRNA及其蛋白的表达.结果 与S组比较,H组静脉注射LPS前LVSP和±dp/dtmax差异无统计学意义(P＞0.05);注射LPS后各时点LVSP和±dp/dtmax升高,血浆LDH和CK活性降低,全血COHb浓度升高,心肌HO-1 mRNA及其蛋白表达上调(P＜0.05),HO-2mRNA及其蛋白表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 氯高铁血红素100 mg/kg预先给药可通过诱导HO-1生成减轻感染性休克大鼠心肌损伤.     

低氧诱导因子1α高表达对小鼠急性缺血性肾损伤的影响

目的 探讨低氧预处理诱导低氧诱导因子1α（HIF-1α）高表达对小鼠肾缺血再灌注损伤（IRI）的影响及其可能机制。 方法 雄性C57BL/6N小鼠35只，随机分为健康对照组、氯化钴（CoCl2）组和8%O2组，每组10只；预处理12 h后，以上3组各取5只，分为缺血再灌注（IR）组、CoCl2＋IR组、8%O2＋IR组；另设5只作为假手术对照组。采用夹闭双侧肾蒂30 min的方法建立肾缺血动物模型，观察CoCl2和8％O2预处理对小鼠IR 24 h后肾功能、肾组织病理和相关肾损伤指标的影响及与CoCl2和8％O2诱导HIF-1α及其保护性靶基因血红素氧化酶1（HO-1）表达之间的关系。 结果 CoCl2＋IR组小鼠的肾功能[BUN (35.2±12.2) mmol/L，Scr (34.0±9.7) μmol/L]和8%O2＋IR组小鼠的肾功能[BUN (31.8±9.1) mmol/L，Scr (41.6±10.6) μmol/L]均较IR组[BUN (65.8±2.6) mmol/L，Scr (229.5±11.2) μmol/L]显著改善（P < 0.01）；与此相一致，CoCl2＋IR组和8%O2＋IR组的病理学改变、细胞凋亡程度和波形蛋白的表达均明显低于IR组。另外，CoCl2组和8%O2组中HIF-1α及其靶基因HO-1的表达明显高于健康对照组。 结论 低氧预处理可上调体内HIF-1α表达，对小鼠IRI肾脏具有良好保护效果     

血红素氧合酶-1在临床肝移植中肝脏保护作用的研究

目的 研究移植肝脏血红素氧合酶(HO-1)表达水平与缺血再灌注损伤和移植术后肝脏功能的关系.方法 研究28例人类临床原位肝脏移植,根据供肝血红素氧合酶(HO-1)表达的平均值将供肝分为两组:移植前供肝HO-1高表达组和移植前供肝HO-1低表达组.比较两组移植术后血浆AST、ALT水平、胆汁中胆盐含量以及术前术后HO-1 mRNA和蛋白表达情况.结果 再灌注后移植术前HO-1低表达组的HO-1 mRNA表达显著增加,而高表达组HO-1 mRNA表达却有所下降.肝脏移植后,术前HO-1低表达组与高表达组相比,血浆转氨酶显著降低,胆汁中胆盐含量明显高于后者.结论 移植术前HO-1低表达组供肝在再灌注过程中能够进一步诱导HO-1表达,与高表达组供肝相比其所遭受的缺血再灌注损伤较轻,移植术后肝脏功能较好.移植过程中HO-1表达的增强要比移植前HO-1高表达更具有细胞保护作用.免疫荧光染色证实枯否细胞是人类肝脏表达HO-1的主要部位.