吡那地尔预处理对失血性休克大鼠脏器热休克蛋白70和细胞型磷脂酶A2表达的影响

目的 探讨吡那地尔（Pinacidil)预处理（preconditioning,PC)对失血性休克大鼠保护作用的机制。方法 （1）大鼠90只,随机分为正常组（N组,10只）、对照组（C组,40只）和预处理组（PC组,40只）,PC组大鼠用Pinacidil进行预处理,24h后将对照组和预处理组大鼠复制成失血性休克模型,用Westem blot方法观察不同时相点大鼠心肌组织细胞型磷酯酶A2（cPLA2）的表达变化。（2）大鼠60只,随机分为对照组（C组,30只）和预处理组（PC组,30只）,PC组大鼠用Pinacidil进行方法观察PC对大鼠心肌和肝脏组织热热休克蛋白70（hsp70)表达的影响。结果 （1）PC组心机组织cPLA2的表达较弱,而C组表达很强;（2）C组hsp70表达很弱或检测不到,PC组心肌和肝脏hsp70表达很强,24h达到高峰,48h和72h逐渐减弱。结论 Pinacidil预处理可能通过诱导hsp70过度表达和抑制PLA2的表达保护“休克细胞”,从而保护失血性休克大鼠的心肌和肝脏组织。     

重组融合饰胶蛋白拮抗转化生长因子β1刺激增生性瘢痕成纤维细胞增殖的作用

目的　观察重组谷胱甘肽S -转移酶与饰胶蛋白的融合蛋白 (GST -Decorin)对转化生长因子 β1 刺激增生性瘢痕成纤维细胞的作用 ,探索瘢痕治疗的新方法。　方法　采用RT -PCR技术克隆饰胶蛋白 (Decorin)cDNA并连接到pGEX - 4T - 1载体上 ,大肠杆菌内表达GST -Decorin ;体外分离培养增生性瘢痕成纤维细胞 ,加入 1∶6 .2 5 ,1∶12 .5 0 ,1∶2 5 .0 0 ,1∶5 0 .0 0 ,1∶10 0 .0 0稀释度的GST -Decorin ,经四唑盐 (MTT)比色法测定细胞增殖速度 ;进一步将 2mg L的TGF - β1 或同时与 1∶12 .5 0的GST -Decorin加入培养基内 ,比较细胞增殖速度的变化 ,并应用原位杂交及图像分析观察细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。　结果　稀释度为 1∶6 .2 5～ 1∶2 5的GST -Decorin可有效地抑制瘢痕成纤维细胞的增殖速度 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ;1∶12 .5 0的GST -Decorin能完全拮抗 2mg L的TGF - β1 刺激细胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型前胶原的mRNA表达。　结论　GST -Decorin可抑制体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞增殖并拮抗TGF - β1 ,提示其具有潜在的治疗瘢痕增生的作用     

重组人血清白蛋白在酵母中的表达及分析鉴定

目的：实现重组人白蛋白（rHSA)在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)中的高效表达,方法：将本室构建的rHSA表达载体转化毕赤酵母,用G418筛选抗性克隆,SDS－PAGE与Western印迹检测并鉴定表达产物;采用生化法、电泳扫描及Brodford法、竞争ELISA3种方法测定摇瓶培养条件下rHSA的表达量。结果：Western印迹分析发现转移至膜上的酵母表达产物能与抗人血清白蛋白单克隆抗体结合,相对分子质量与人血白蛋白一致,证明在酵母中成功地表达了rHSA。在甲醇诱导下摇瓶培养,rHSA表达量随诱导表达时间的延长而增加,第8天产量约为3．5g/L。结论：人血清白蛋白表达载体与毕赤酵母基因组整合,获得酵母表达株,摇瓶培养,该株表达量为3．5g/L。     

细胞外基质在肝细胞性肝癌发生发展过程中的作用

肝细胞性肝癌(HCC)是我国常见的恶性肿瘤性疾病.近年来微环境对癌组织的影响受到重视,其中细胞外基质(ECM)作为HCC组织的重要微环境成分,在肿瘤发生发展过程中扮演着重要的角色,涉及肿瘤的生长、凋亡、耐药、侵袭、转移等.纤连蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、胶原蛋白(COL)以及细胞外基质的硬度在H...     

磷脂酰肌醇3-激酶p110α/β在甲状腺乳头状癌组织中的表达及与预后的相关性

目的 检测甲状腺乳头状癌病人癌组织中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)p110α、PI3Kp110β表达水平及其与预后的关系.方法 2008年1月～2013年7月我院收治的甲状腺乳头状癌病人60例(甲状腺乳头状癌组),结节性甲状腺肿60例(结节性甲状腺肿组),其他...     

重组人血小板源性生长因子增加细胞外信号调节激酶磷酸化促进糖尿病大鼠全层皮肤缺损创面愈合

目的 在体观察重组人血小板源性生长因子（recombinant human platelet—derived growth factor，rhPDGF）促进糖尿病大鼠全层皮肤缺损创面修复可能涉及的细胞和分子机制，研究其可能涉及的信号通路。方法 26只糖尿病大鼠，每只动物背部制备4个全层皮肤缺损创面，选取其中52个创面，随机分成3组，即对照组，创面自然愈合；rhPDGF治疗组，创面rhPDGF用量为7．0μg／cm^2；赋形剂组，创面用等量赋形剂凝胶。观察治疗后3、7和14d创面肉芽形成、胶原沉积、再上皮化速率以及炎性细胞浸润情况，并采用免疫荧光和免疫组织化学技术观察创面周围和创面修复细胞内细胞外信号调节激酶1／2（extracellular signal—regulated kinase1／2，ERK1／2）磷酸化和增殖细胞核抗原（proliferative cell nuclear antigen，PCNA）的表达。结果 组织学观察，rhPDGF治疗组创面可见大量炎性细胞浸润，毛细血管胚芽及成纤维细胞明显多于另两组（P〈0．05）；胶原沉积明显，肉芽组织生长活跃，创面收缩显著，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫学研究显示，应用rhPDGF7～14d后，rhPDGF治疗组ERK1／2明显强于对照组和赋形剂组（P〈0．05）；且损伤后3～7d rhPDGF治疗组修复细胞PCNA的表达明显高于对照组和赋形剂组（P〈0．05）。结论 rhPDGF促糖尿病大鼠刨面愈合的作用部分是通过ERK1／2信号通路的磷酸化来完成的。     

骨髓干细胞参与小鼠急性肾小管坏死修复的实验研究

【摘要】 目的 观察在生理和病理情况下,骨髓来源的干细胞(BMSC)能否分化成肾小管上皮细胞。 方法 绿色荧光蛋白(GFP)标记的C57BL/6转基因小鼠提供骨髓细胞。同种无荧光标记的C57BL/6小鼠100只分为正常对照组、全身照射组、缺血再灌注组、骨髓移植组、骨髓移植+缺血再灌注组。受体鼠的骨髓重建经血液常规检查和流式细胞仪检测确认,并采用荧光组织化学、免疫组织化学等方法观察绿色荧光标记的BMSC在受体鼠肾脏的分布及数量。 结果 全身致死剂量γ射线照射未造成小鼠肾脏组织结构和生理功能的明显改变。骨髓移植后第56、84天的受体鼠肾小管中有少量GFP阳性细胞的存在[(78.75±5.99)%、(79.58±4.60)%],激光共聚焦显微镜进一步证实这些细胞位于肾小管,并表达肾小管上皮细胞特异性的功能蛋白megalin。 结论 在生理和病理情况下,骨髓干细胞均可以向肾小管上皮细胞转分化,参与肾小管上皮细胞的更新,并且在急性肾小管坏死的病理条件下,骨髓干细胞的肾向转化率与肾脏受损程度有关。     

骨膜微环境下脂肪脱细胞基质再生和分化的研究

目的:观察骨膜微环境下,脂肪脱细胞基质(DAM)在体内向成脂或成骨方向分化的情况。方法:2020年6—12月,将人体吸脂术获取的脂肪组织在全军整形外科研究所制备为DAM,选取6只4～6周雄性SD大鼠,按照同等初始体积植入到大鼠顶骨骨膜下。术后84 d取材,通过大体观察、组织学染色、免疫荧光染色观察DAM支架材料成脂和成...     

关节假体周围感染患者血清学指标未达诊断阈值的影响因素分析

目的探讨关节假体周围感染(periprosthetic joint infection,PJI)患者血清C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)和红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)不符合2011版美国肌肉骨骼感染协会(Musculoskeletal Infection Society,MSIS)诊断标准的影响因素。方法2011年12月至2019年12月因PJI住院治疗的患者328例,男152例、女176例,年龄(62.10±13.74)岁(范围24~87岁);膝关节172例(52.4%),髋关节151例(46.0%),肘关节4例(1.2%),肩关节1例(0.3%)。所有患者均于术前或应用抗生素前行CRP和ESR检测,PJI的诊断采用2011版MSIS诊断标准:CRP≥10 mg/L且ESR≥30 mm/1 h。将患者根据Tsukayama分型、病原体类型及免疫状态等进行分组,比较不同组别患者CRP和ESR不符合MSIS标准(即未达诊断阈值)的发生率。结果119例(36.3%,119/328)CRP或ESR实测值不符合MSIS诊断标准。Tsukayama分型组间不符合率的差异无统计学意义(χ^2=7.224,P=0.065);培养结果阴性组不符合率为46.4%,高于培养阳性组的27.4%(χ^2=12.276,P<0.001);免疫A级组不符合率为42.9%,高于免疫B级组的30.6%和C级组的23.8%(χ^2=6.586,P=0.037)。Logistic回归分析结果提示,培养结果阳性患者发生不符合标准的风险是培养阴性患者的0.420倍(P=0.001);免疫B级患者出现不符合标准现象的风险是免疫A级患者的0.578倍(P=0.040)。结论免疫状态好及培养结果阴性的PJI患者更容易出现血清学指标未达诊断阈值的现象,诊断时应特别注意综合其他指标,以防漏诊。     

低氧环境对椎间盘自发性吸收的影响及其作用机制

目的探讨低氧环境对椎间盘自发性吸收的影响及其作用机制。方法取SPF级成年日本大耳兔9只,雌雄不限,平均体质量2 kg。将兔处死后取脊柱髓核组织,经消化、分离、培养后获得传代髓核细胞,将生长良好的髓核细胞制成细胞悬液。根据不同时效的低氧环境将细胞分为5组对照组(常氧浓度下培养6 h)、低氧6 h组(2%O2浓度下培养6 h)、低氧12 h组(2%O2浓度下培养12 h)、低氧24 h组(2%O2浓度下培养24 h)和低氧48 h组(2%O2浓度下培养48 h)。采用实时聚合酶链反应法检测缺氧诱导因子(HIF)-1α、3型酸敏感离子通道(ASIC3)及水通道蛋白3(AQP3)mRNA表达水平,采用流式细胞仪检测各组髓核细胞凋亡情况。采用SPSS 24.0软件对数据进行分析。结果与对照组比较,低氧各组细胞凋亡率均明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.01);与低氧12、24和48 h组比较,低氧6 h组细胞凋亡率最高,差异均有统计学意义(均P<0.01)。与对照组比较,低氧各组细胞HIF-1α和ASIC3 mRNA表达水平均明显上升,AQP3 mRNA表达水平均明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.01);与低氧12、24和48 h组比较,低氧6 h组HIF-1α和ASIC3 mRNA表达水平最高,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论短时间低氧环境可以促进髓核细胞凋亡,从而加速椎间盘突出组织自发性吸收进程,其机制可能与HIF-1α和ASIC3的表达增加及AQP3的表达下降有关。