腺病毒载体携带人TRAIL基因治疗H446小细胞肺癌的体外实验研究

目的评价携带人TRAIL基因的腺病毒载体对人小细胞肺癌细胞株H446的基因治疗功效。方法构建的携带人TRAIL基因的腺病毒Ad-hTRAIL,感染人小细胞肺癌细胞株H446以及人正常肝细胞株WRL-68,人正常成纤维细胞株MRC-5,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其杀伤肿瘤细胞的效能,流式细胞术(FCM)检测Ad-hTRAIL对细胞早期凋亡的影响,并进行RT-PCR、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TRAIL mRNA和TRAIL蛋白的表达量。结果携带人TRAIL基因的增殖缺陷型腺病毒Ad-hTRAIL对H446细胞的感染效率较高;感染72h后H446、WRL-68、MRC-5细胞培养上清中TRAIL的表达量分别为32.02、17.08、16.89μg.L-1,在MOI=1.0时,Ad-hTRAIL即可引起H446细胞明显凋亡;而在MOI=100时对正常细胞WRL-68、MRC-5也没有明显杀伤作用。结论Ad-hTRAIL能够强烈诱导小细胞肺癌细胞H446凋亡而对正常肝细胞及成纤维细胞无明显抑制作用,Ad-hTRAIL在小细胞肺癌的基因治疗方面有潜在的应用前景。     

2019至2020年天津市住院患儿腺病毒和博卡病毒感染的流行病学特征及分子分型

目的:分析天津市儿童医院急性呼吸道感染的住院患儿中腺病毒和博卡病毒感染的流行病学特征及分子分型。方法:收集2019年3月至2020年2月天津市儿童医院1 171份急性呼吸道感染患儿鼻咽抽吸物,用腺病毒和博卡病毒感染特异性引物进行PCR扩增,对阳性扩增产物进行核苷酸序列测定,将腺病毒和博卡病毒所测序列在GenBank中进...     

腺病毒介导酸性成纤维生长因子对兔角膜内皮细胞感染及促增殖作用的实验研究

目的　观察复制缺陷型重组腺病毒载体介导酸性成纤维生长因子 (aFGF)对体外培养的兔角膜内皮细胞 (RCEC)的感染效率和促增殖作用。方法　 2 93A细胞扩增复制缺陷型重组腺病毒 ,选用细胞半数感染剂量 (TCID50 )法测定病毒滴度。体外培养RCEC ,用携带报告基因 (LacZ)的重组腺病毒 (Ad LacZ)感染RCEC ,二甲基甲酰胺 (X gal)染色估计瞬时感染效率 ,将含aFGF的重组腺病毒 (Ad aFGF)感染RCEC ,RT PCR、Westernblot分别检测aFGF转录及蛋白质表达情况 ,噻唑盐 (MTT)法检测转基因细胞增殖情况。结果　病毒滴度为 2× 10 8pfu/ml;重组腺病毒感染RCEC 2 4h后即可检测到外源基因表达 ,当感染倍数 (MOI)值等于 2 0时 ,Ad LacZ对RCEC的感染效率为 10 0 % ,感染Ad aFGF对RCEC增殖有促进作用 (F =2 17.10 7,P <0 .0 5 )。结论　复制缺陷型重组腺病毒载体介导的外源基因在RCEC中可有效表达 ,感染Ad aFGF对RCEC增殖具有促进作用。     

缺氧诱导因子-1α和BCL-2/腺病毒E1B19 kDa相关蛋白3在中耳胆脂瘤表达及意义

目的　探讨缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1,HIF-1α）和BCL-2/腺病毒E1B19KDa相关蛋白3（Bcl2/adenovirus E1B 19 kD interacting protein 3,BNIP3） 在中耳胆脂瘤中的表达及胆脂瘤上皮的凋亡情况。方法  采用免疫组织化学方法检测30例中耳胆脂瘤标本与18例外耳道皮肤标本中HIF-1α和BNIP3蛋白的表达情况,使用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-endlabeling,Tunel）检测20例中耳胆脂瘤标本和18例外耳道皮肤标本的凋亡情况。使用Pearson相关分析检验HIF-1α和BNIP3蛋白之间的相关性。结果　HIF-1α在胆脂瘤组和对照组的平均光密度分别为0.16±0.07和0.08±0.03,两组比较差异有统计学意义（t =4.279,P＜0.01）;BNIP3在胆脂瘤组和对照组的平均光密度分别为0.16±0.08和0.11±0.06,两组比较差异有统计学意义（t =2.463,P =0.0185）;经pearson相关分析,在胆脂瘤上皮中,HIF-1α和BNIP3之间呈正相关（r =0.418,P =0.003）;Tunel染色中,凋亡指数在胆脂瘤组和对照组分别为（52.8±12.5）%和（9.99±2.97）%,两组比较差异有统计学意义（t =14.166,P＜0.01）。结论　HIF-1α和BNIP3在中耳胆脂瘤中的异常表达可能与胆脂瘤的高凋亡特性有关。     

腺病毒载体在病毒性疫苗中的研究进展

基于腺病毒载体安全性好、诱导体液和细胞免疫效率高、容纳外源基因片段大、易于大规模培养等优点,其为构建新型疫苗提供了新的思路与手段.此文简要综述了腺病毒的生物学特性、腺病毒载体的构建策略、以腺病毒为载体构建病毒性疫苗的研究现状和目前存在的问题等,重点介绍了已经进入临床试验的腺病毒载体病毒性疫苗的研究进展.     

一种腺病毒载体疫苗的体外生物活性和细胞毒性研究

目的探讨一个以腺病毒为载体的人用疫苗(代号LMP-Ad)在传代动物细胞株上的表达能力和细胞毒性,为动物试验提供依据。方法受试物LMP-Ad以不同感染复数(MOI=3000、1000、300、100和30)感染非洲绿猴肾细胞(Vero)、幼仓鼠肾细胞(BHK)、小鼠成纤维细胞(L929)和人胚肺二倍体细胞(KMB17)4种传代细胞株后,用免疫细胞化学染色法检测目的蛋白LMP在细胞膜上的表达情况;在MOI=3×105、3×104、3×103、3×102和30时,用MTT法和FCM检测细胞相对增殖率(RGR)和细胞死亡率。结果在4种细胞中均检测到目的蛋白的表达,其中BHK细胞呈弱阳性,而Vero和KMB17在MOI低至30时仍较好地表达目的蛋白;随着感染剂量的提高,4种细胞的RGR下降而死亡率上升,其中以Vero细胞的变化最为明显。结论受试物对上述细胞均具生物活性,并在高感染剂量时表现出对细胞的生长抑制和一定程度的损伤,4种细胞以Vero和KMB17对受试物最为敏感,更适于作为该类新药的体外研究模型。     

基于毛细电泳的多重PCR方法检测儿童呼吸道腺病毒感染常见血清型的价值

目的建立一种呼吸道腺病毒常见血清型检测方法, 并利用该方法检测温州地区儿童呼吸道人腺病毒(HAdV)感染的主要血清型。方法利用基于毛细电泳的多重PCR法建立呼吸道腺病毒常见12种血清型检测方法, 将2018年1月至2019年12月收治于温州医科大学附属育英儿童医院, 经直接免疫荧光法检测HAdV阳性的1 059例急性呼吸道感染患儿的呼吸道标本作为研究对象, 对其进行回顾性分析, 采用多重PCR方法测定HAdV-1、2、3、4、5、7、14、21、37、40、41和55型等12种血清型, 同时随机抽取部分标本与一代测序法比较检测结果一致性。结果共收集到1 059份HAdV抗原阳性的呼吸道标本, 多重PCR法检测发现, 1种血清型阳性947例(89.4%), 2种血清型混合感染13例(1.2%), 阴性24例(2.3%), 阳性但不能分型75例(7.1%)。947例单种血清型阳性儿童中, B亚群的HAdV-3型415例(43.8%), HAdV-7型318例(33.6%), HAdV-55型12例(1.2%), HAdV-21型2例(0.2%);C亚群的HAdV-2型108例(11.4%)...     

清热抗感冲剂体外抗病毒作用的实验研究

上呼吸道感染的发生约90由病毒引起。呼吸道合胞病毒(RSV)和腺病毒(ADV3)是引起本病的重要病原[1]。我们研制的清热抗感冲剂主要由银花、连翘、浙贝、大黄等中药组成,具有辛凉解表、清热解毒、宣降蕴热等功效,临床用于治疗上呼吸道感染疗效显著。以往的研究证实本冲剂具有抗炎、退热等作用[2]。为探讨该药在抗病毒方面的作用机制,随之进行了体外抗病毒实验。1材料1.1实验材料1.1.1清热抗感冲剂由山西中医学院附属医院制剂室提供。1.1.2含药血清的制备[3-5]:取健康Wistar大鼠20只,灌服清热抗感冲剂,大鼠日灌服量采用人鼠体表面积计算,取临…     

BNIP3 HIF-1α在食管鳞癌中的表达及其临床病理意义

  目的   初步探讨BCL-2/腺病毒E1B 19 kDa相关蛋白3(BCL2/adenovirus E1B19 kd-interacting protein3, BNIP3)和乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)在食管鳞癌(ESCC)中表达及其与临床病理之间的关系和意义。   方法   采用免疫组织化学S-P方法分别测定食管鳞癌组织和切端正常食管黏膜组织芯片的BNIP3、HIF-1α的表达水平。运用统计学方法对比分析BNIP3和HIF-1α在食管鳞癌组织和切端正常黏膜组织中的表达以及BNIP3和HIF-1α与肿瘤原发病灶部位、肿瘤浸润深度(T分期)、TNM分期、淋巴结转移(含淋巴侵犯)、肿瘤组织分化程度(分级)等临床病理特征之间的关系。   结果   BNIP3表达在细胞质中, HIF-1α表达在细胞核和细胞质中。食管鳞癌组织中BNIP3蛋白表达阳性率37.5%(27/72), 明显低于正常切端组织的60%(18/30)(P=0.037);HIF-1α蛋白表达阳性率52.7%(38/72), 明显高于正常切端组织的13.3%(4/30)(P < 0.001)。BNIP3蛋白表达与食管癌的肿瘤浸润深度、TNM分期、淋巴结转移相关(P=0.035、P=0.048、P=0.033)。HIF-1α蛋白表达亦与肿瘤浸润深度、TNM分期、淋巴结转移相关(P=0.023、P=0.004、P=0.002)。并且, BNIP3表达与HIF-α表达呈负相关(r=-0.274, P=0.020)。   结论   在食管鳞癌中, BNIP3与HIF-1α的表达密切相关, 且均与肿瘤的浸润深度、TNM分期、淋巴结转移密切相关。因此, 联合检测BNIP3和HIF-1α, 有助于食管鳞癌的辅助诊断、病期评价及预后判断。      

柯萨奇腺病毒受体在前列腺癌细胞中的表达及分析

目的:讨论柯萨奇腺病毒受体(CAR)在前列腺癌恶性进展中的作用。方法:Western-Blot鉴定CAR在LNCaP、C4、C4-2、C4-2B、DU145与PC-3等6种前列腺癌细胞株中的表达情况。结果:CAR在低恶性的LNCaP细胞中表达最高,在高度恶性、有较强远处转移能力的C4、C4-2、C4-2B、DU145与PC-3细胞中的表达呈依次下降趋势,在恶性程度最高的PC-3细胞中最低。结论:CAR在恶性程度不一的前列腺癌细胞中存在表达差异,可能在前列腺癌的恶性进展过程中发挥了重要作用。