双萘酰亚胺类化合物诱导SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的 观察双萘酰亚胺类化合物(C8)对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的作用. 方法 四甲基偶氮唑盐法检测C8对SMMC 7721细胞的抑制情况;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;Western blot检测Bcl 2蛋白表达量;流式细胞术分析细胞内Bcl 2蛋白量;酶联免疫法检测Caspase9和Caspase 3表达量. 结果 C8抑制SMMC 7721细胞增殖,半数抑制浓度为15 umol/L.C8作用浓度在10,15、20 umol/L时,SMMC 7721细胞的凋亡比例分别为16.8%、29.4%和35.8%,对照组为2.1%,SMMC 7721细胞的凋亡率明显高于对照组,P<0.01.细胞内Bcl-2蛋白表达水平下降.酶联免疫检测结果表明Caspase 9和Caspase 3被活化.结论 C8可诱导人肝癌SMMC 7721细胞的凋亡,为抗肿瘤药物的研究提供新的化合物.     

人肝癌SMMC-7721细胞受体介导内吞高密度脂蛋白-2的逆向胞饮作用

荧光素异硫氰酸酯标记高密度脂蛋白-2保持天然高密度脂蛋白-2的生物活性。人肝癌SMMC-7721细胞与荧光标记无载脂蛋白E-高密度脂蛋白-2在37℃培养3h左右,细胞结合与内吞的荧光强度分别为13.5±0.8和9.2±0.5(±s土)。细胞进一步在37℃培养2h细胞释放的三氯醋酸沉淀和三氯醋酸可溶性荧光强度分别为5.1±0.4和0.67±0.17.4℃培养2h,细胞释放三氯醋酸沉淀荧光强度为0.41±0.16。结果提示:①细胞内吞高密度脂蛋白-2没有经过溶酶体分解途径;②细胞释放高密度脂蛋白-2载脂蛋白是一种取决于温度的逆向胞饮机制。     

绞股蓝总皂甙对原代培养大鼠肝细胞四氯化碳损伤的影响

采用四氯化碳(CCl_4)制成原代培养大鼠肝细胞损伤模型,观察了绞股蓝总皂甙(GPS)对肝细胞损伤的保护作用。结果表明,预先用 GPS 处理肝细胞 lhr,可明显减轻 CCl_4引起的肝细胞 DNA 合成速率降低,减少肝细胞 ALT 逸出,抑制培养上清液中 MDA 含量的升高和 SOD/MDA 比值的缩小,并与 GPS 浓度呈依赖关系。提示 GPS 能减轻 CCl_4对离体培养的大鼠肝细胞损伤,保护肝细胞 DNA 合成,其作用机理与抗脂质过氧化有关。     

胃肝样腺癌的临床与病理关系初步探讨

背景：胃肝样腺癌具有独特的病理形态和临床特点，但临床和病理医师对此尚来引起足够重视。目的：探讨血清甲胎蛋白（APF）阳性的胃肝样腺癌的组织学表现、临床特点及其与预后的关系。方法：2001年1月-2003年12月期间于上海交通大学医学院附属瑞金医院病理证实为胃肝样腺癌者6例，同期随机选取胃低分化腺癌和原发性肝细胞癌（HCC）30例作为埘照，统一行组织学、免疫组织化学检查和临床特点分析。结果：6例胃肝样腺癌患者发病平均年龄66．8岁．发病时血清AFP84-2230ng／ml，6例中2例复发，2例肝转移，平均存活17个月；具有与HCC相似的组织学表现．即多呈实体状，小梁状．大梁状，血管血窦丰富，癌细胞血管淋巴管侵犯多见，免疫组织化学染色AFP均阳性．而HepParl阴性，癌细胞为CD34阳性的血管分割成小梁状。胃低分化腺癌组织学主要表现为实体巢状或弥散分布，免疫组化染色显示癌细胞AFP和HepParl阴性。原发性HCC组织学表现为实体状，小梁状，大梁状以及有丰富的血管血窦．免疫组织化学染色显示癌细胞HepParl阳性。结论：血清AFP阳性的胃肝样腺癌具有发病年龄高、易于复发或肝脏转移、预后差的临床特点。组织学上，胃肝样腺癌与HCC相似，但癌细胞AFP阳性、HepParl阴性可与胃低分化腺癌（AFP和HepParl均阴性）和原发性HCC（HepParl阳性）相鉴别。     

重组人肝再生增强因子的克隆、表达及纯化

目的通过构建原核表达系统，在大肠埃希菌中表达重组人肝再生增强因子（hALR）蛋白，为各种急慢性肝损伤及肝衰竭的治疗提供新的治疗方法奠定基础。方法利用正常人肝组织提取总RNA，经一步法逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）获取hALR cDNA全序列，构建原核表达载体hALR—pET28a（＋）转化大肠埃希菌（BL21），诱导表达重组hALR蛋白，以组氨酸为标签进行蛋白纯化。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western Blot鉴定重组蛋白。结果经双酶切和DNA测序证实hALR cDNA正确插入表达载体pET28a（＋），成功表达并纯化得相对分子质量为23000的重组蛋白，低温诱导表达使可溶蛋白明显增加，与预期结果相符。结论成功表达和纯化获重组hALR蛋白。     

结合炎性细胞因子构建原发性肝癌术后复发的Nomogram模型

目的收集临床指标及相关炎性细胞因子数据,构建肝细胞癌(HCC)术后复发的Nomogram模型。方法选取2014年1月～2016年1月在武汉中心医院行首次行肝切除术治疗的314例HCC患者,根据随访结果分为无复发组与复发组。收集患者一般资料,检测肝功能及炎性细胞因子水平。计数资料2组间比较采用χ2检验,等级资料2组间比较采用Mann-Whitney U检验。采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)获得计量资料的最佳截断值。复发的独立危险因素采用多因素Cox比例风险模型分析;根据多因素Cox比例风险模型的结果构建Nomogram模型,进行内部数据验证并计算一致性指数(C-index)。结果术后随访1～40个月,中位随访期13个月,无复发患者140例,复发患者174例,中位无复发生存期为19个月,半年无复发生存率68. 2%,1年无复发生存率57. 3%,2年无复发生存率45. 9%。复发组患者的年龄、肿瘤最大直径、BMI、IL-2、IL-6、IL-8、IL-17、NLR、TNFα、CRP、ALT、AST、TBil与无复发组比较,差异均有统计学意义(P值均0. 05)。Cox模型分析结果显示年龄 63岁[风险比(HR)=2. 391]、肿瘤最大直径 6 cm(HR=1. 851)、BMI 27. 17 kg/m~2(HR=1. 546)、IL-17 10. 8 pg/m1(HR=1. 556)、TNFα 11. 8 ng/L(HR=1.562)、ALT42 U/L(HR=1.624)、TBil15.6μmol/L(HR=1. 534)是HCC患者术后复发的独立危险因素(P值均0. 05)。采用内部数据进行验证,C-index为0. 724(95%CI:0. 668～0. 824)。结论本研究构建的Nomogram模型能较为准确的预测首次肝切除术的HCC患者复发情况,其临床价值有待更多的研究证实。     

bax、bcl-w基因在肝细胞癌中表达及其临床意义

采用免疫组织化学方法检测石蜡包埋的人肝细胞癌（HCC）标本中凋亡相关基因bax,bcl-w的表达。bax在HCC中阳性率（18／40）低于肝硬变（11／15），而bcl-w在HCC中阳性率（22／40）高于肝硬变（3／15），P均＜0．05。高、中分化型者,bax表达高于低分化者，bcl-w表达低于分化者。临床分期为I、Ⅱ期者，bax表达高于临床Ⅲ期者，bcl-w表达低于临床Ⅲ期者。胎甲球蛋白（AFP）≤400μg/L患者，bax表达高于胎甲球蛋白（AFP）＞400μg/L患者，bcl-w表达低于胎甲球蛋白（AFP）＞400μg/L患者（P＜0．05或P＜0．01）。但两者在不同 性别和不同年龄组（＞60岁与≤60岁）之间则无显著性差异（P＞0．05）。结果提示凋亡相关基因bax、bcl-w在HCC中表达对肝癌细胞的凋亡起调节作用，并与分化程度、临床分期、AFP水平有关。     

Baseline characterization of patients aged 70 years and above with hepatocellular carcinoma

AIM: To characterize the baseline profiles of patients aged 70 years and above with hepatocellular carcinoma (HCC). METHODS: A series of 127 consecutive patients with HCC were enrolled between 2000 and 2004, and none of them had been diagnosed as having HCC previously. Baseline profiles, including parameters of hepatic function such as serum transaminase and prothrombin time [PT (% activity)] were compared between patients aged ≥70 and <70 years. RESULTS: Patients ≥70 years old showed significantly lower levels of aspartate aminotransferase (P=0.04) and alanine aminotransferase (P= 0.01), and significantly higher PTs (P = 0.04) and platelet counts (P = 0.02). Concomitantly, among ≥70-year-old patients, HCC was more common in non-cirrhotics, whereas among patients <70 years old, HCC was more common in cirrhotics. There was no significant difference between the groups in the number or size of tumors. CONCLUSION: Older HCC patients showed less inflammation and better preservation of hepatic function, indicating that not only cirrhotic patients but also non-cirrhotic patients should be considered as a high-risk group among the elderly.     

N糖基化对SMMC7721移植瘤生长及FAS,NM23,ICAM-1表达的调控

目的观察N糖基化抑制剂swainsonine对人肝癌细胞株SMMC7721体内生长的影响及探讨其可能的作用机制.方法将SMMC7721接种于裸鼠,对比研究饮用含1 mg/Lswainsonine饮用水的荷瘤裸鼠和对照组裸鼠的生存期及肿瘤大小指数,运用免疫组织化学的方法观察两组瘤组织标本的FAS,NM23,ICAM-1的表达情况.结果 swainsonine能延长实验组荷瘤裸鼠的生存期,抑制SMMC7721在荷瘤小鼠上的生长,其肿瘤生长抑制率为36%.FAS,NM23,ICAM-1的表达在实验组明显增强.结论 N糖基化抑制剂swainsonine能抑制人肝癌细胞株SMMC7721在裸鼠体内的生长,其对肿瘤组织fas,nm23 ICAM-1表达的调控可能与其作用机制有关.     

Fas及其配体诱导非酒精性脂肪性肝炎肝细胞凋亡

脂肪肝的发病日趋增多，在常规行肝穿刺活检患者中1．2％～9％患有非酒精性脂肪性肝炎（NASH），15％～50％的肝硬化与NASH有关。目前，NASH的发病机制尚不清楚。有研究报道NASH肝组织中肝细胞凋亡突出，但关于肝细胞凋亡在NASH发病中的作用及其调节机制有待研究。因此，我们采用高脂、胆碱一甲硫氨酸缺乏饮食（high fat，methionine and choline deficient diet，MCD）方法建立小鼠NASH模型，以探讨凋亡相关基因Fas及其配体（FasL）在NASH中与细胞凋亡及病情进展的关系。