Lipoxin A4受体样蛋白基因转染增强Lipoxin A4拮抗结缔组织生长因子诱导的人肺成纤维细胞增殖

目的克隆Lipoxin A4受体样蛋白(LRLP)基因,并转染人肺成纤维细胞(HLF).观察其增强Lipoxin A4拮抗结缔组织生长因子(CTGF)诱导的细胞增殖作用.方法构建LRLP与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因的真核表达载体pEGFP/LRLP,并转染HLF,用G418筛选稳定表达融合基因的细胞克隆株HLF/LRLP.用10 nmol/L Lipoxin A4预处理HLF和HLF/LRLP细胞30 min后,加入1 μg/mlCTGF诱导细胞增殖.MTT法检测细胞增殖抑制率.流式细胞术检测细胞周期.Western blot检测细胞周期蛋白D1的蛋白表达量.凝胶迁移率改变试验检测信号转导子和转录激活子3(STAT3)的DNA结合力.结果 (1)成功建立稳定表达LRLP和GFP融合基因的HLF/LRLP细胞株.(2) 1 μg/ml CTGF刺激24 h,可显著诱导HLF增殖.Lipoxin A4预处理对其有抑制作用,10 nmol/L Lipoxin A4对HLF/LRLP的细胞增殖抑制率显著高于对HLF细胞的增殖抑制率(P<0.05).(3)与未转染和空载体转染的HLF相比,10 nmol/L Lipoxin A4诱导更多的HLF/LRLP细胞生长停滞在G0/G1期(P<0.05).(4) 10 nmol/L Lipoxin A4拮抗CTGF诱导的细胞周期蛋白D1表达上调,并且对HLF/LRLP细胞的拮抗作用强于对HLF细胞(P<0.05).(5) 10 nmol/L Lipoxin A4拮抗CTGF诱导的STAT3 DNA结合力上调,并且对HLF/LRLP细胞的拮抗作用强于对HLF细胞(P<0.05).结论 LRLP基因转染,增强Lipoxin A4 拮抗CTGF诱导的人肺成纤维细胞增殖.     

U74389G对高氧暴露新生大鼠肺内巨噬细胞聚集和肺发育的影响

目的观察抗氧化剂-U74389G对高氧暴露新生大鼠肺内自由基产物、巨噬细胞聚集、硝基酪氨酸形成以及肺细胞增殖活性的影响,研究高氧性肺损伤发生机制及各种介质的相互关系,探讨抗氧化干预的作用.方法采用Sprague Dawley新生大鼠95%O2暴露7 d建立急性高氧肺损伤模型.应用气相色谱-质谱联用技术测定肺组织羟自由基,酶联免疫法测定脂质过氧化产物8-异前列腺烷,免疫组织化学法测定肺内巨噬细胞聚集和硝基化酪氨酸形成,3H-TdR掺入法(放射自显影)测定肺细胞增殖状况.结果 95%高浓度氧暴露可致新生大鼠严重肺损伤,肺组织羟自由基(2,3-DHBA与2,5-DHBA分别为 49.2±3.5 pmol/mg、55.8±2.3 pmol/mg)及脂质过氧化产物(8-异前列腺烷含量为546.6±32.2 pg/mg) 与空气对照组比较均显著增加 (P＜0.05),肺内巨噬细胞聚集明显,蛋白质酪氨酸发生显著硝基化,肺上皮细胞增殖停滞.抗氧化剂U74389G可降低肺组织自由基及其衍生物产生(2,3-DHBA、2,5-DHBA与8-异前列腺烷水平分别为37.9±2.4 pmol/mg、31.3±1.9 pmol/mg和358.5±24.1 pg/mg,P＜0.05),减少巨噬细胞聚集和蛋白质硝基化,肺上皮细胞增殖部分恢复,但未能显著改善高氧所致的肺实质病理形态学变化,且对正常肺细胞增殖有一定影响.结论高氧暴露通过增加肺内自由基产物及炎性细胞浸润等机制导致肺损伤,抗氧化干预可抑制或阻断其过程而具有治疗应用前景,但应充分考虑抗氧化对正常细胞增殖分化的影响.     

更昔洛韦和黄芪对巨细胞病毒感染所致造血祖细胞增殖抑制的影响

目的　探讨更昔洛韦 (GCV)和黄芪对巨细胞病毒 (CMV)感染所致脐血粒 巨噬系祖细胞 (CFU GM)、红系早、晚期祖细胞 (CFU E、BFU E)、多向造血祖细胞 (CFU Mix)及巨核系祖细胞(CFU Mk)体外增殖抑制的影响。方法　采用造血祖细胞培养技术 ,培养、观察、计数巨细胞病毒AD169株 (CMV AD169)感染CFU GM、CFU E、BFU E、CFU Mix和CFU Mk后各祖细胞集落、峰期及维持时间 ;用聚合酶链反应 (PCR)检测集落细胞内CMV DNA ;根据细胞毒性实验结果 ,将GCV和黄芪作用于CMV感染的CFU GM、CFU E、BFU E、CFU Mix及CFU Mk祖细胞 ,再分别计数集落、峰期及维持时间。结果 ( 1)CMV感染组CFU GM、CFU E、BFU E、CFU Mix及CFU Mk集落数较对照组明显减少 (P <0 0 1) ;集落维持时间CMV感染组较对照组明显缩短 ;( 2 )用PCR在感染组集落细胞内检测到CMV DNA的存在 ;( 3)黄芪和 (或 )GCV作用于CMV感染的祖细胞后 ,与病毒组比较集落维持时间明显延长 ,集落数和集落增殖率明显提高 (P <0 0 1) ,黄芪组集落增殖率分别为 2 7 2 %、4 5 2 %、4 9 1%、39 0 %、11 9% ;GCV组分别为 37 4 %、74 2 %、71 7%、6 7 4 %、38 9% ;GCV 黄芪组分别为 5 3 6 %、83 8%、88 7%、87 8%、6 1 5 %。结论　CMV AD169在体外能明显抑制CFU GM、CFU E、BFU     

新生儿高胰岛素血症性低血糖症一例

患儿男,14d ,因间歇抽搐12d入院。系第二胎第二产,足月剖宫产,其姐体健。于生后第二天开始抖动,第三天出现抽搐,表现双眼上翻、大汗、头后仰、四肢抖动,持续2～3min自行缓解,之后每日均有频繁抽搐,最多时1日抽搐10余次,不发热、吃奶可、无吐泻。查体:T 36 8℃,体重3 8kg,头围34cm ,发育营养可,精神反应差,面色苍灰,双眼凝视,前囟2cm×2cm ,平坦,心肺(- ) ,腹软,肝脾不大,四肢肌张力低。实验室检查:血糖0 7mmol/L、钙2 4 0mmol/L、镁0 9mmol/L、磷1 4 1mmol/L、二氧化碳结合力2 3 9mmol/L、钾4 2 7mmol/L、钠133 7mmol/L、氯化物10 …     

The signal transduction pathway in the proliferation of airway smooth muscle cells induced by urotensin Ⅱ

Background Human urotensin Ⅱ (UⅡ) is the most potent mammalian vasoconstrictor identified so far. Our previous study showed that UⅡ is a potent mitogen of airway smooth muscle cells (ASMC) inducing ASMC proliferation in a dose-dependent manner. The signal transduction pathway of UⅡ mitogenic effect remains to be clarified. This study was conducted to investigate the signal transduction pathway in the proliferation of ASMC induced by UⅡ. Methods In primary cultures of rat ASMCs, activities of protein kinase C (PKC), mitogen-activated protein kinase (MAPK) and calcineurin (CaN) induced by UⅡ were measured. The effect of CaN on PKC and MAPK was studied by adding cyclosporin A (CsA), a specific inhibitor of CaN. Using H7 and PD98059, inhibitors of PKC and MAPK, respectively, to study the effect of PKC and MAPK on CaN. The cytosolic free calcium concentration induced by UⅡ was measured using Fura-2/AM. Results UⅡ 10-7 mol/L stimulated ASMC PKC and MAPK activities by 44% and 24% (P&lt;0.01), respectively, after incubating for 20 minutes. It increased CaN activity in a time-dependent manner, being 1.68 times as that of control for 24 hours (P&lt;0.01). It promoted the cytosolic free calcium concentration increase of 18% (P&lt;0.01). CsA 10-6 mol/L and H7 50 μmol/L inhibited UⅡ-stimulated CaN activity by 45% (P&lt;0.01) and 21% (P&lt;0.05), respectively, while PD98059 50 μmol/L had no effect on CaN activity (P&gt;0.05). CsA 10-6 mol/L inhibited UⅡ-stimulated PKC activity by 14% (P&lt;0.05), while having no effect on MAPK activity (P&gt;0.05). Conclusions UⅡ increases cytosolic free calcium concentration and activates PKC, MAPK and CaN. The signal transduction pathway between PKC and CaN has cross-talk.     

Smad7基因沉默对细胞增殖的影响

TGF—β是一种多功能的细胞因子,可调节细胞的分化、增殖和凋亡。它对多种上皮细胞尤其是支气管上皮细胞的生长、增殖有很强的抑制作用。Smad7作为TGF—β信号转导通路的抑制分子,可以抑制TGF—β信号在胞浆内的传导。我们以永生化人支气管上皮细胞BEP2D,及恶性转化的BERP35T2细胞为基础所做的研究表明：Smad7基因的表达随细胞恶性度增高而增高,     

肝星状细胞中药血清药理学实验研究概况

中药血清药理学研究方法是针对中药及其复方复杂多样的化学成分特点,用含药血清代替煎剂或粗提物进行实验研究的新方法,其可信性和科学性更强。肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)在肝纤维化病理过程中起着十分关键的作用,近年来,国内学者采用中药血清药理学研究方法对肝星状细胞进行了大量     

曲尼司特对青光眼患者体外培养的眼部Tenon囊成纤维细胞增殖和移行的影响

目的 探讨曲尼司特(tranilast)对青光眼患者体外培养的眼部Tenon囊成纤维细胞增殖及移行的影响。方法 取青光眼患者滤过术中剪下的Tenon囊组织,在体外进行成纤维细胞原代及传代培养。分别采用MTT法、细胞计数法、免疫组化加图像分析法及划线法,研究不同浓度的曲尼司特对体外培养的成纤维细胞增殖及移行的影响及其与蛋白激酶C(PKC)表达的关系。结果 当浓度在12．5～100．0mg／L之间变化时,曲尼司特能明显抑制成纤维细胞的增殖,强度呈剂量依赖性;50．0mg／L和100．0mg／L的曲尼司特能明显抑制成纤维细胞的移行,并下调细胞内PKC的表达。结论 曲尼司特能抑制成纤维细胞的增殖及移行,这种作用可能与下调细胞内PKC的表达有关。     

人非小细胞肺癌中蛋白激酶C βⅡ的表达与细胞凋亡的相关性研究

目的探讨人非小细胞肺癌(NSCLC)中蛋白激酶C(PKC)βⅡ的表达及细胞凋亡在肺癌发生、发展中的作用.方法应用免疫组织化学LSAB法和TUNEL法检测了119例人NSCLC组织、癌旁肺组织和32例肺良性疾病肺组织中PKC-βⅡ的表达和凋亡细胞.结果(1)NSCLC组织中PKC-βⅡ表达水平(85.39%)显著高于癌旁肺组织(65.69%)和肺良性病变肺组织(53.22%)(P<0.05),癌旁肺组织中PKC-βⅡ表达水平显著高于肺良性疾病肺组织(P<0.05).NSCLC组织中凋亡指数(5.27%)显著低于肺良性疾病肺组织(15.84%)(P<0.05).(2)NSCLC组织中PKC-βⅡ的表达水平与临床病理生理特征无明显关系(P>0.05).NSCLC组织的细胞凋亡水平与肺癌P-TNM分期、原发肿瘤大小(T)及淋巴结转移状态(N)有密切关系(P<0.05),而与细胞分化程度、组织学类型,患者性别和年龄等均无明显关系(P>0.05).(3)PKC-βⅡ的表达水平与细胞凋亡水平呈显著负相关(P<0.01).结论 NSCLC中PKC-βⅡ的异常激活和细胞凋亡受抑制在NSCLC发生、发展中可能起重要作用.PKC-βⅡ介导的细胞增殖过度和凋亡受抑可能是NSCLC发生、发展的重要机理之一.     

细胞黏附、多药耐药及细胞增殖在T1G3型浅表膀胱癌近期复发中的作用

目的　研究细胞黏附、多药耐药及细胞增殖在浅表膀胱癌近期复发中的作用 ,探讨三者的临床预测价值。　方法　对 10 0例浅表膀胱癌患者进行回顾性随访 ,同时用免疫组化法检测首次术后标本中E cad、P gp、Ki 6 7的表达情况。　结果　E cad、P gp的阳性表达率分别为 4 3 2 %和14 4 % ,而PI的平均值为 2 2 1%。E cad表达随复发次数增加而减弱 (P <0 0 5 ) ,P gp表达和PI值随复发次数增加而增高 (P <0 0 5 )。T1G3 型患者与非T1G3 型患者间 ,E cad表达、P gp表达及PI值差异均有显著性 (P <0 0 5 )。E cad表达与P gp表达、PI值之间均呈显著性负相关。　结论　黏附性低、耐药性强和增殖旺盛是促使T1G3 型浅表膀胱癌近期复发的主要因素 ,同时也是导致T1G3 肿瘤易复发、高恶性度的内在原因。在上述过程中 ,三者可能相互影响。