孕妇血清CG、TBA、miR-222与妊娠中晚期ICP病情程度的关系及联合预测AFO的ROC分析

目的：探讨孕妇血清CG、TBA、miR-222与妊娠中晚期妊娠期胆汁淤积症(ICP)病情程度的关系及联合预测胎儿不良结局的ROC价值。方法：选择2018年1月—2020年12月在我院就诊的ICP患者73例作为ICP组,按1∶1抽取同期在我院就诊的健康孕妇73例作为对照组。观察2组孕妇血清CG、TBA、miR-222水平,观察CG、TBA、miR-222对胎儿不良结局事件(AFO)的预测价值。结果：ICP组血清CG、TBA、miR-222水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);亚组分析显示,SICP组CG、TBA和miR-222水平均高于MICP组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ICP组AFO发生率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。AFO组患者血清CG、TBA、miR-222水平均高于非AFO组,差异均有统计学意义(P<0.05)。CG、TBA、miR-222预测AFO的灵敏度分别为84.2%、84.2%和78.9%,特异性分别为87.0%、81.5%和94.4%;CG、TBA、miR-222之一阳性预测AFO的灵敏度为94.7...     

环状RNA在调控肠道炎症中的研究进展

环状RNA (circular RNA,circRNA)是一种不具有5’末端帽子和3’末端poly(A)尾巴、并以共价键形成环状闭合单链结构的非编码RNA分子,具有基因调控等生物学功能。研究表明,circRNA分子含有大量的微RNA (micro RNA,miRNA)结合位点,它可与miRNA相互作用,影响着炎症细胞的生长、凋亡等多种生物学行为。近年来,随着对非编码RNA生物学功能研究的不断深入,circRNA在胃肠疾病领域的作用正受到广泛关注,在肠道炎症疾病发生发展过程中发挥着关键作用。本文就circRNA在肠道炎症疾病中的研究进行综述和展示,并对其发展前景进行了展望,以期为临床诊疗新策略提供依据。     

长链非编码RNA NORAD在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖能力的影响

目的 研究长链非编码RNA DNA损伤诱导的非编码RNA (NORAD)在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖的影响。方法 RNA-seq分析肺癌组织中LncRNA及miRNA的表达改变,根据表达量确定候选LncRNA;q RT-PCR检测分析肺癌组织及肺癌细胞中候选NORAD的表达;免疫荧光检测分析肺癌组织中细胞增殖核抗原Ki-67的表达;通过线性回归分析肺癌组织中NORAD与Ki-67的表达相关性。生物在线软件联合miRNA测序结果,并通过荧光素酶检测分析NORAD与miR-26b-5p、miR-654-5p结合情况。将A549细胞分成空白对照组(Control)、si-NORAD组、miR-26b-5p mimics、miR-654-5p mimics、si-NORAD与miR-26b-5p mimics联合组、si-NORAD与miR-654-5p mimics联合组,利用EdU检测细胞增殖能力、Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡、蛋白印迹(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白(Bad、Bcl-2、Cleaved Caspase-3)的表达。结果 NORAD...     

下调TSP1表达抑制宫颈腺癌HeLa细胞生长及促血管生成能力的研究

目的 研究调控血小板反应蛋白1 (TSP1)的表达对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移、凋亡、侵袭及促进内皮细胞成血管能力的影响。方法 构建表达TSP1基因的真核表达载体pcDNA3.1-TSP1及siRNA-TSP1,转染宫颈癌HeLa细胞,实验共分为TSP1基因过表达组(pcDNA3.1-TSP1转染组)、TSP1基因低表达组(siRNA-TSP1转染组)和未转染组(阴性对照组)。Real-time PCR、Western blot检测各组细胞TSP1的表达,CCK-8、划痕实验、流式细胞术、Transwell检测各组细胞生长情况,体外血管形成实验检测各组细胞促血管生成能力。结果 与阴性对照组比较,pcDNA3.1-TSP1组细胞TSP1 mRNA及蛋白表达上调,siRNA-TSP1组细胞TSP1 mRNA及蛋白表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05);pcDNA3.1-TSP1组HeLa细胞的增殖、迁移、侵袭及体外促内皮细胞血管形成能力明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05),但凋亡比例比较差异无统计学意义(P>0.05),而siRNA-TSP1组HeLa细胞...     

4种常见清热燥湿类中药对肠道菌群及粪便胆汁酸和短链脂肪酸代谢的影响

  目的  探究在长期临床等效剂量下4种清热燥湿类中药对正常小鼠肠道菌群、胆汁酸及短链脂肪酸的影响。  方法  30只Balb/c雄性小鼠被随机分为对照组、苦参组、黄连组、黄柏组和黄芩组, 每组各6只。除对照组外, 苦参组、黄柏组、黄连组和黄芩组给药剂量分别为2.34、3.12、1.3 g·kg-1和2.6 g·kg-1, 连续灌胃2周, 采用液相色谱-串联质谱法检测粪便中短链脂肪酸和胆汁酸含量, 利用16S rRNA高通量基因测序技术分析肠道内容物中菌群结构变化。  结果  清热燥湿类中药对正常小鼠粪便中6种短链脂肪酸无明显影响。在常见的23种胆汁酸中, 与正常组相比, 黄芩组、苦参组、黄连组和黄柏组分别有4、3、2、1种胆汁酸显著变化。从肠道菌群丰度变化上看, 与对照组相比, 除苦参组外, 黄连组、黄芩组和黄柏组小鼠厚壁菌门均呈现下降趋势, 拟杆菌门均呈现上升趋势, 其中黄连组变化更显著。  结论  苦参、黄柏、黄连和黄芩对正常小鼠长期药效剂量下短链脂肪酸影响较小, 但可以通过改变肠道菌群结构影响胆汁酸含量的变化。      

miR-24靶向调控CARMA3抑制人结肠癌细胞系SW620增殖

目的探讨miR-24对人结肠癌SW620细胞CARMA3(含半胱天冬酶募集结构域的膜相关乌苷酸激酶蛋白3)的靶向调控作用及对细胞增殖的影响。方法培养SW620细胞,用生物信息学预测miR-24和CARMA3的靶向匹配关系,并用双荧光素酶报告基因系统鉴定。Lipo3000转染miR-24模拟物后,real-time PCR检测miR-24和CARMA3 m RNA表达; Western blot检测CARMA3蛋白表达; CCK8法检测SW620细胞增殖。结果 miR-24和CARMA3匹配良好,miR-24能够结合CARMA3 m RNA 3'UTR,并有效抑制其表达(P 0. 05)。miR-24能够负向调控CARMA3表达和SW620细胞增殖(P0. 05)。结论 miR-24通过靶向作用于CARMA3 m RNA 3'UTR能够负向调控CARMA3基因的表达及负向调控SW620细胞的增殖。     

API2-MALT1融合基因变异体在粘膜相关淋巴组织结外边缘区B细胞淋巴瘤中的分布及凋亡的关系

目的探讨API2-MALT1融合基因变异体在粘膜相关淋巴组织结外边缘区B细胞淋巴瘤(extranodal marginal zone B—cell lymphoma of mucosa—associated lymphoid tissue，MALT)中的分布特点及其转录与肿瘤凋亡的关系。方法将逆转录-聚合酶链反应和巢式聚合酶链式反应结合，检测62例不同部位MALT淋巴瘤中API2-MALT1融合基因的多种变异体；通过TdT介导脱氧核苷酸缺口末端标记技术进行肿瘤细胞的原位凋亡检测；通过逆转录-聚合酶链反应和免疫组化染色检测API2的mRNA和蛋白水平。结果62例MALT淋巴瘤中28例检出API2-MALT1融合基因(45．16％)，为变异体A1446-M1123或A1446-M814，但未检出A1446-M541和A1446-M1150。A1446-M1123(18／28)的检出明显多于A1446-M814(10／28)。融和基因转录在甲状腺MALT淋巴瘤中检出最低，在其它部位的分布无差异。在API2-MALT1^ 组(API2-MALT1mRNA表达阳性组)肿瘤凋亡水平明显高于API2-MALT1^-组(API2-MALT1mRNA表达阴性组)，API2的mRNA和蛋白水平低于阴性组。A1446-M1123^ 与A1446-M814^ 病例之间凋亡和API2的变化无差异。结论MALT淋巴瘤中t(11；18)(q21；q21)的发生有部位差异，A1446-M1123可能是中国人MALT淋巴瘤中API2-MALT1融合基因变异体的主要类型。API2-MALT1融合基因转录与MALT淋巴瘤的凋亡水平和API2的变化有关。     

核Run—off转录活性测定

本文介绍一种在真核基因转录调控研究中,十分重要的检测技术——核Run-off转录活性的分析,并详细叙述了操作的具体步骤,特别强调了因各实验室选择样品材料的不同,需首先确定核转录的最适条件,如核染色体DNA模板数量,掺入同位素量和反应最适时间等,以便能成功地应用此项技术。     

黄芩汤通过Nrf2信号通路对Caco-2细胞抗氧化应激作用的机制

目的：以Caco-2细胞为载体,结合基因干扰(RNAi)技术,通过体外实验进一步验证黄芩汤基于核因子E2相关因子2(Nrf2)通路发挥的抗氧化应激作用。方法：将处于对数生长期的Caco-2细胞,经siRNA转染,构建siRNA Caco-2细胞;将正常Caco-2细胞和siRNA Caco-2细胞与不同浓度的黄芩汤共同孵育后,提取RNA和蛋白,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)技术检测血红素氧合酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)、接头蛋白Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)及Nrf2 mRNA和蛋白的表达;同时,采用比色法和探针法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力及丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)的表达水平。结果：与空白组比较,仅有黄芩汤400 mg·L^-1组与萝卜硫素(SFN)组可降低正常Caco-2细胞内ROS、MDA含量(P<0.01);而黄芩汤各剂量组与SFN组细胞内SOD与GSH-Px...