电穿孔化疗治疗结直肠癌的研究现状

电穿孔化疗是一种新型的抗肿瘤疗法。本就电穿孔化疗的机理、仪器、治疗方法及其在结直肠癌中的研究现状作一简要综述。     

电穿孔技术辅助眼内基因治疗

电穿孔法可将外源基因有效导入靶组织或器官,简单经济,可应用于多种组织器官上,近年来已成为一种新颖的非病毒基因转染体系,应用于眼内疾病基因治疗的研究屡见报道.本文对电穿孔技术辅助基因转染在眼内疾病治疗中的研究进展做一综述.     

结肠癌细胞总RNA电穿孔法体外转染成熟树突状细胞

目的：探讨结肠癌细胞总RNA电穿孔法转染成熟树突状细胞（mDCs）的转染效率及对树突状细胞(DCs）特征和功能的影响,为DCs核酸肿瘤疫苗的制备及其在临床应用奠定基础。方法： 用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）、重组人白细胞介素4（rhIL-4）将人外周血单核细胞(PBMC)诱导成未成熟树突状细胞（imDCs）,肿瘤细胞坏死因子-α（TNF-α）作用24 h刺激其成熟。实验设为imDCs组和mDCs组。Trizol法提取特异表达癌胚抗原(CEA)的结肠癌细胞SW480总RNA,电穿孔法将总RNA转染mDCs,设为RNA转染DCs组。流式细胞术检测各组细胞表面分子标志变化和转染DCs组的CEA蛋白表达情况。ELISA法检测各组细胞IL-12分泌水平。结果：rhGM-CSF、rhIL-4、TNF-α能将PBMC诱导成具有典型毛刺样突起形态学特征的DCs。imDCs组DCs表面CD1a表达呈阳性,CD80弱阳性,CD83阴性。mDCs组DCs表面CD1a、CD83、CD80表达均呈阳性。RNA转染DCs组DCs表面CD1a、CD83、CD80表达均呈阳性。总RNA转染mDCs后4 h检测到CEA蛋白表达。mDCs组、RNA转染DCs组IL-12分泌量与imDCs组比较均显著升高（P＜0.01), 而mDCs组与RNA转染DCs组比较差异无显著性（P>0.05)。结论：结肠癌细胞总RNA可通过电穿孔法转染mDCs并表达CEA蛋白,电穿孔不改变mDCs的表面分子特征及功能。     

EB病毒潜在膜蛋白对鼻咽癌细胞系CNE1生长及HLA表达的影响

目的研究ＥＢＶ－ＬＭＰ对高分化鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１生长及ＨＬＡ表达的影响。方法以人高分化鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ１）为对象，采用电穿孔基因转染技术，将重组ＥＢＶ－ＬＭＰ表达质粒ｐＣＭＶａ－ＬＭＰ转染ＣＮＥ１细胞。用细胞体外增殖试验、免疫组化和流式细胞术等方法，观察细胞生长及ＨＬＡ表达的变化。结果ＥＢＶ－ＬＭＰ在体外可明显促进ＣＮＥ１细胞的增殖，增殖吸光度（Ａ）比值试验组与空白组及阴性对照组比较有显著性差异（Ｐ＜０．０１）；实验组细胞软琼脂克隆形成率显著高于空白及阴性对照组（Ｐ＜０．０１）；细胞ＤＮＡ含量明显增高（Ｐ＜０．０１／０．０５）；ＦＣＭ法测定细胞角蛋白表达，实验组比空白及阴性对照组阳性率显著降低（Ｐ＜０．０５）；ＨＬＡ免疫组化检测结果表明，ＬＭＰ表达细胞系ＨＬＡⅠ类及Ⅱ类抗原的表达都明显下降（Ｐ＜０．０１）。结论ＥＢＶ－ＬＭＰ对ＣＮＥ１细胞生长有明显的促进作用且可明显抑制细胞分化，ＬＭＰ可致鼻咽癌细胞ＨＬＡ抗原的表达改变。     

双氯芬酸钠经皮电穿孔及电离子导入的研究

目的：考察离子导入和电穿孔对双氯芬酸钠经皮渗透的影响。方法：采用双室扩散池和SD大鼠皮、进行双氯芬酸钠饱和水溶液经皮被动扩散、离子导入（0．5mA/cm^2)和电穿孔导入（130V,740ms或100ms,200个脉冲,方波,占空比1：1）的 研究。结果：电穿孔和离子导入均能显著促进双氯芬酸钠的经皮渗透,其增渗倍数分别为25．1和7．5。延长脉冲7时间将改善电穿孔的促渗效果,初步研究表明本实验条件的电穿孔及离子导入未引起皮肤的损伤。结论：电穿孔技术可用于促进小分子解离型药物的经皮渗透。     

电穿孔法基因转染K562细胞条件的优化

目的以绿色荧光蛋白(GFP)为观察指标优化K562细胞的电穿孔基因转染条件。方法通过改变悬液体积、温度及缓冲液、质粒浓度等转染条件,采用不同条件组合后用电穿孔法将质粒DNA转入K562细胞,通过流式细胞仪和荧光显微镜观察转染效率。结果①在电压250V、电容950μF的条件下.K562细胞得到58.6%的最大转染率。②应用0.4mL细胞悬液体积,当质粒浓度≥20μg/mL时可得到较高的转染效率。③温度和缓冲液中的血清成分对电穿孔效率影响不大。结论电穿孔是一种高效的基因转染法,通过优化条件,可提高转染率。     

应用细菌人工染色体技术体外繁殖人巨细胞病毒

目的体外快速繁殖人巨细胞病毒（ HCMV）。方法用试剂盒抽提、纯化重组HCMV细菌人工染色体（BAC）,以重组HCMV细菌人工染色体（BAC-HCMV）为模板扩增UL82基因,酶切后连接至pcDNA载体,构建pcDNA-pp71重组质粒,转化感受态宿主菌,抽提及鉴定重组质粒。通过电穿孔技术将BAC-HCMV与鉴定成功的pcDNA-pp71重组质粒共转染人包皮成纤维细胞,通过多重PCR法及观察细胞病变效应、绿色荧光蛋白等方法鉴定培养后获得的HCMV。结果（1）获得pcDNA-pp71重组质粒,经PCR及双酶切后,片段大小与预期相符,进一步测序鉴定成功。（2） BAC-HCMV与pcDNA-pp71共转染人包皮成纤维细胞,出现细胞病变效应,经荧光显微镜观察可见绿色荧光。（3）以培养出的病毒DNA为模板进行多重PCR扩增,获得两条与预期大小相符的条带,鉴定HCMV体外繁殖成功。结论应用BAC技术成功在体外快速繁殖HC-MV,为HCMV研究提供实验材料,也为进一步研究HCMV分子机制奠定基础。