电穿孔法基因转染K562细胞条件的优化

目的以绿色荧光蛋白(GFP)为观察指标优化K562细胞的电穿孔基因转染条件。方法通过改变悬液体积、温度及缓冲液、质粒浓度等转染条件,采用不同条件组合后用电穿孔法将质粒DNA转入K562细胞,通过流式细胞仪和荧光显微镜观察转染效率。结果①在电压250V、电容950μF的条件下.K562细胞得到58.6%的最大转染率。②应用0.4mL细胞悬液体积,当质粒浓度≥20μg/mL时可得到较高的转染效率。③温度和缓冲液中的血清成分对电穿孔效率影响不大。结论电穿孔是一种高效的基因转染法,通过优化条件,可提高转染率。     

蓝氏贾第虫病毒体外转录体转染条件的研究

目的 确定蓝氏贾第虫病毒体外转录体电穿孔转染的最佳条件。方法 以不同的电击缓冲液、电压及脉冲时间应用GLV和GFP嵌合体体外转录体电穿孔转染蓝氏贾第虫，测定转染虫体的存活率及GFP表达量。结果 在不同转染条件下GLV和GFP嵌合体体外转录体均能成功转染蓝氏贾第虫，且在cytomix缓冲液、1000V／cm、8ms电击条件下，对虫体损伤最小，GFP表达量最高。结论 本试验确定的蓝氏贾第虫病毒体外转录体电穿孔转染最佳条件是电击缓冲液为cytornix缓冲液，电压为1000V／cm、脉)中时间为8ms。     

心房颤动脉冲电场消融的研究进展

脉冲电场消融与治疗心房颤动的射频消融和冷冻消融相比,具有组织特异性、超快速非热消融、不易损伤邻近组织器官等特点,有望成为心房颤动消融领域的一大进步.现主要介绍心房颤动脉冲电场消融及其进入心房颤动领域之路、机制、特性等方面的研究进展.     

脉冲场消融在房颤中的应用进展

脉冲场消融(pulsed field ablation,PFA)作为一种非热消融技术,是治疗房颤的新型消融方式.这种能量形式采用一系列持续数微秒的高振幅电脉冲,当强脉冲电场使细胞膜通透性增加时,就会发生不可逆电穿孔,从而导致细胞稳态遭到破坏甚至死亡.由于脉冲电场具有独特的非热性和组织特异性,因此与射频和冷冻消融相比,PFA的应用范围更广、安全性更高,且发挥作用更快.本文主要介绍了PFA的原理和特性,阐明了PFA用于房颤治疗的组织特异性和应用局限性.     

应用细菌人工染色体技术体外繁殖人巨细胞病毒

目的体外快速繁殖人巨细胞病毒（ HCMV）。方法用试剂盒抽提、纯化重组HCMV细菌人工染色体（BAC）,以重组HCMV细菌人工染色体（BAC-HCMV）为模板扩增UL82基因,酶切后连接至pcDNA载体,构建pcDNA-pp71重组质粒,转化感受态宿主菌,抽提及鉴定重组质粒。通过电穿孔技术将BAC-HCMV与鉴定成功的pcDNA-pp71重组质粒共转染人包皮成纤维细胞,通过多重PCR法及观察细胞病变效应、绿色荧光蛋白等方法鉴定培养后获得的HCMV。结果（1）获得pcDNA-pp71重组质粒,经PCR及双酶切后,片段大小与预期相符,进一步测序鉴定成功。（2） BAC-HCMV与pcDNA-pp71共转染人包皮成纤维细胞,出现细胞病变效应,经荧光显微镜观察可见绿色荧光。（3）以培养出的病毒DNA为模板进行多重PCR扩增,获得两条与预期大小相符的条带,鉴定HCMV体外繁殖成功。结论应用BAC技术成功在体外快速繁殖HC-MV,为HCMV研究提供实验材料,也为进一步研究HCMV分子机制奠定基础。     

结肠、直肠、肛门

结肠抗原特异性T细胞克隆回输治疗大鼠溃疡性结肠炎的研究；腹腔镜与开腹右半结肠癌根治术同期临床对比的研究；经升结肠回肠置管造口预防术后吻合口漏；小儿急性肠套叠误施手术问题的探讨；结直肠癌细胞胀亡与肿瘤组织微血管密度的关系；梗阻性大肠癌一期切除吻合术后并发症的防治；尿核苷检测对结直肠癌诊断价值的临床研究；原发性结直肠非霍奇金淋巴瘤的诊治和预后分析；电穿孔化疗对结肠癌裸鼠移植瘤模型的疗效及免疫机制初探；28例低位直肠绒毛状腺瘤癌变局部切除治疗经验；     

影像学引导下不可逆电穿孔治疗局部进展期胰腺癌

胰腺癌是一种起病隐匿,恶性程度较高的一种肿瘤性疾病.临床上大多数病人在确诊时已处于不可手术切除的阶段.局部治疗,控制肿瘤生长,延长患者的生存时间是这阶段治疗的主要目的.不可逆电穿孔作为肿瘤的一种微创消融技术,引起消融区细胞凋亡,同时可以很好的保护周围血管、胆管及胰管等细胞基质的完整性,在治疗进展期胰腺癌方面逐渐显示出优...     

电击缓冲液对哺乳动物细胞电穿孔效率的影响

目的：提高哺乳动物细胞转染率,使非贴壁细胞和难转染细胞得到转染。方法：比较囝８种不同电击缓冲液条件下３种细胞的电穿孔效率。电击缓冲液包括细胞培养基如ＲＰＭＩ１６４０、ＤＭＥＭ、ＤＭＥＭ／Ｆ１２、磷酸缓冲液Ｋ－ＰＢＳ、ＨＢＳ、ＨｅＢｓ、ＰＢＳ及ｃｙｔｏｍｉｘ,３种细胞分别是贴壁生长的Ｖｅｒｏ细胞、半贴壁生长的Ｓｐ２／０细胞及悬浮生长的Ｎａｍａｌｗａ细胞。通过Ｘ－Ｇａｌ染色确定细胞转染率,通过锥虫蓝染     

电脉冲化疗治疗人前列腺癌裸鼠移植瘤

目的　探讨平阳霉素（ＰＹＭ） 与电脉冲（ＥＰ） 相结合的电脉冲化疗对人前列腺癌细胞系ＰＣ３ｍ 裸鼠皮下移植瘤的作用。方法　将左右侧颈背部荷有ＰＣ３ｍ 肿瘤的裸鼠随机分为５ 组：按左右不同分别给予如下治疗：（１）Ｐ－ Ｅ－ ｜Ｐ＋ Ｅ－ ,（２）Ｐ－ Ｅ－ ｜Ｐ－ Ｅ＋ ,（３）Ｐ－ Ｅ－ ,｜Ｐ＋ Ｅ＋ ,（４）Ｐ＋ Ｅ－｜Ｐ＋ Ｅ＋ ,（５）Ｐ－ Ｅ＋ ｜Ｐ＋ Ｅ＋ 。Ｐ－ Ｅ－ 代表未治疗,Ｐ＋ Ｅ－ 代表肿瘤内注射平阳霉素,Ｐ－ Ｅ＋ 代表单给电脉冲,Ｐ＋ Ｅ＋ 代表电脉冲化疗,即肿瘤内注射平阳霉素后给予电脉冲。结果　亚治疗量的平阳霉素肿瘤内注射后给予电脉冲,１００％ 有效,其中６２．５ ％ 部分缓解、３７．５％ 完全缓解,即Ｐ＋ Ｅ＋ 有效,而其他组合无效。结论　平阳霉素介导的电脉冲为前列腺肿瘤及其他肿瘤的局部治疗提供了新思路。