肾综合征出血热发病机制的研究进展

肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS)是由汉坦病毒感染引起的以发热、休克、出血和肾脏损害为主要特征的急性自然疫源性疾病。汉坦病毒主要感染人血管内皮细胞,引起小血管和毛细血管广泛损伤。血管通透性增加是HFRS临床表现的病理基础。国内外学者尽管在汉坦病毒致病机制方面开展了诸多研究,如病毒诱导的免疫病理反应、宿主遗传与细胞凋亡、血小板减少与功能障碍、血管内皮损伤等,但HFRS发病机制仍未完全阐明,也无特效治疗药物,深入探讨汉坦病毒致病的分子机制,寻找有效治疗药物仍是汉坦病毒/HFRS领域的研究热点。本文结合近年来国内外相关研究,阐述HFRS发病机制的研究进展。     

汉坦病毒汉城型浙37株G1、G2包膜糖蛋白基因重组体的构建及在真核细胞中的表达

目的：构建汉坦病毒浙37（Z37）株包膜糖蛋白基因G1、G2真核表达质粒，并在真核细胞中表达。方法：根据Z37M基因序列设计6条引物，分别以质粒pGEMZ37,pCUMZ37为模板，通过聚合酶链反应（PCR）获得G1及G2片段。将G1、G2片段经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切片插入至真核表达载体pcDNA3.1( ），经酶切鉴定，并测序证实。以磷酸钙沉淀法分别将重组质粒转染COS－7细胞，用间接免疫荧光法（IFA）检测瞬时表达的蛋白。结果：获得分别含有编码汉坦病毒（HV）Z37株包膜糖蛋白G1、G2基因的重组质粒pcDNA3.1-g1,pcDNA3.1-G2；在转染的COS－7细胞内，用IFA可检测到细胞内有特异性荧光。结论：成功地构建了HV Z37株包膜糖蛋白G1、G2基因真核表达载体，并可在COS－7细胞中瞬时表达。     

辽宁地区汉坦病毒分离株的基因分型

目的　分离辽宁地区汉坦病毒并对分离株 (SY 13)进行基因分型 ,以查清辽宁地区汉坦病毒流行株的基因型和基因亚型。方法　采用组织细胞培养法分离汉坦病毒 ;用RT PCR法分别扩增SY 13的M片段G1、G2区和S片段 ;采用邻位相连法 ,通过DNAStar、Clustalx、Phylip等序列分析软件分别对 3个基因片段的序列与从GenBank下载的序列进行同源性分析 ,并构建种系发生树。结果　通过对 3个基因片段进行比较分析 ,SY 13与HTN型同源性较高 ,为 79.3%～ 97.0 % ;通过M片段G2区的比较分析 ,SY 13与BAO 10、BAO 14、JIANG 13、BAO 9、Q 33处于同一分支 ,同源性为 95.0 %～97.0 %。结论　辽宁地区汉坦病毒SY 13株与黑龙江地区分离株属同一亚型 ,为HTN型病毒中的H4亚型     

北京市褐家鼠中汉坦病毒的分离和初步鉴定

肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS)是由鼠类传播的自然疫源性疾病。现已证实我国主要存在汉滩型(HTN)和汉城型(SEO)汉坦病毒。近年来，北京市HFRS发病出现不断上升趋势，流行形势比较严峻。近年的流行病学研究证实北京地区存在鼠间SEO型汉坦病毒感染。为了解近期北京地区HFRS流行毒株的型别和特点，从病原学角度阐明疫情原因，我们在对北京地区宿主动物进行汉坦病毒分子流行病学调查研究的基础上，进行了病毒分离和初步鉴定。     

汉坦病毒疫苗研究进展

汉坦病毒属于布尼亚病毒科的汉坦病毒属，主要引起人的两种疾病：肾综合征出血热和汉坦病毒肺综合征。汉坦病毒基因组包括(LM、S)3个负链RNA片段。分别编码RNA聚合酶、囊膜糖蛋白G1和G2和核心蛋白。汉坦病毒基因工程疫苗研究主要包括亚单位疫苗、活病毒载体疫苗和核酸疫苗；传统的灭活疫苗包括鼠脑来源和细胞培养的灭活疫苗，本文就汉坦病毒这两方面的研究进展进行了综述。     

肾综合征出血热（HFRS）和汉坦病毒（HV）研究的新进展（病原学和流行病学）

肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）和汉坦病毒（ＨＶ）研究的新进展（病原学和流行病学）第三届ＨＦＲＳ及ＨＶ国际会议（１９９５，６，１～３，Ｈｅｌｓｉｎｋｉ）简介中国预防医学科学院病毒学研究所宋干第三届国际ＨＦＲＳ及ＨＶ会议１９９５年６月１～３日在芬兰赫尔辛基召...     

河北省鼠携带汉坦病毒G2片段基因分型及序列特征分析

目的 了解河北省肾综合征出血热(HFRS)疫源地宿主动物所携带汉坦病毒的基因型和基因亚型.方法 根据76-118株和R22株的保守序列设计型特异性引物,用RT-nested PCR从IFA筛选的阳性鼠肺中扩增部分M片段,经琼脂糖凝胶电泳进行基因分型,并从中选取部分扩增产物纯化回收后进行核苷酸序列测定,用DNAStar软件包进行基因分析.结果 32份经IFA筛选阳性的鼠肺标本经RT-nested PCR扩增出418bp特异性目的 片段,均为SEO型.10份扩增产物测序结果 表明G2片段变异不大,同源性高达98.0%～100%,与R22株和76-118株的同源性分别为93.3%～94.3%和67.7%～69.0%.结论 依据G2片段,河北省HFRS疫源地汉坦病毒基因型以SEO型病毒为主,主要为S3亚型,同亚型病毒基因高度同源,遗传物质相对稳定.不同鼠种可携带同亚型汉坦病毒.     

汉滩病毒G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk细胞内相互作用

目的：研究汉滩病毒（HTNV）G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的细胞内相互作用。方法：构建用于研究Syk和G1ITAM样基序之间相互作用的哺乳动物细胞双杂交系统，验证G1ITAM样基序与Syk之间是否存在细胞内相互作用。结果：哺乳动物细胞双杂交分析证实G1ITAM样基序在哺乳动物细胞内可以与Syk相互作用；而突变体分析表明，这种相互作用依赖于该基序中两个高度保守的酪氨酸残基的存在。结论：HTNVG1蛋白胞质区高度保守ITAM样基序在体外和哺乳动物细胞内可以与Syk相互作用，为进一步探讨G1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用及其与血管内皮损伤的关系奠定了基础。     

深圳市肾综合征出血热患者汉坦病毒基因特征研究

目的 研究深圳市引起肾综合征出血热(HFRS)的汉坦病毒主要型别及分子特征,为该市汉坦病毒的防制提供依据.方法 收集各医院送检HFRS患者急性期血清标本,提取血清中病毒RNA作为模板,采用逆转录-套式PCR扩增汉坦病毒基因组M片段G2区基因并进行序列测定,对汉坦病毒进行基因分型和同源性分析.结果 深圳市HFRS病例男性多于女性,患者发病年龄主要集中在20-60岁,其中20-49岁病例数最多,共发病242例,占发病总数的85.82％.从282例标本中用HTN型特异性引物扩增阳性4例,占1.42％;用SEO型特异性引物扩增阳性50例,占17.73％;总阳性率为19.15％.序列比较分析发现,深圳地区流行的SEO型汉坦病毒核苷酸序列的差异相对较小,其基因的离散度为0％-4.9％.从种系发生树看这些病毒分布在一个分支上,均为S2亚型.HTN型汉坦病毒的变异率较高,其基因的离散度为6.7％-21.0％,二例为H7亚型,二例为H9亚型,均为深圳市首次报道.结论 不同年份引起深圳地区HFRS的汉坦病毒仍以SEO型为主,且病毒变异较小,稳定性较高.首次发现HTN型病例存在.结合流行病学调查资料,证实HTN病例均为输入性病例.     

整合素β_3与汉坦病毒囊膜糖蛋白在RRS系统中的相互作用

目的:采用RRS酵母双杂交系统,研究人整合素β3与汉坦病毒囊膜糖蛋白的相互作用,进一步揭示汉坦病毒入胞机制.方法:大量制备前期构建的β3-pYesM△PolyA、 G1-Met和G2-Met质粒,共转染至酵母温度敏感株cdc25-2,进行双杂交鉴定.结果:双杂交结果表明,β3可与汉坦病毒囊膜糖蛋白G2在酵母菌中相互作用,而不与G1相互作用.结论:在汉坦病毒与整合素β3受体相互作用的过程中,汉坦病毒囊膜糖蛋白G2可能起到主要作用.