缺血性卒中患者血浆磷酸化α-突触核蛋白水平及磷酸化形成比例的改变

目的分析缺血性卒中患者血浆磷酸化α-突触核蛋白(α-Syn)水平以及α-Syn磷酸化形成比例的改变。方法回顾性分析2013年5—9月武警后勤学院附属医院神经内科急性缺血性卒中住院患者45的临床资料,另收集同期年龄和性别相匹配的45名健康者为对照组。利用双抗体夹心的酶联免疫吸附(ELISA)法测定血浆中的磷酸化α-Syn水平。另将基因重组α-Syn加入血浆,计算磷酸化α-Syn占总α-Syn的比例。结果缺血性卒中患者血浆磷酸化α-Syn水平明显高于对照组[(0.0472±0.0042)μmol/L比(0.0312±0.0043)μmol/L];缺血性卒中患者血浆α-Syn磷酸化形成比例高于对照组[(0.1170±0.0176)μmol/(100μmol·h)比(0.0364±0.0098)μmol/(100μmol·h)]。受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,血浆磷酸化α-Syn水平变化判定缺血卒中的特异度和敏感度分别为0.88和0.81,曲线下面积(AUC)为0.91,cut-off值为0.060 mol/L,AUC 95%CI:0.889~0.961;血浆α-Syn磷酸化形成比例改变判定缺血卒中的特异度和敏感度分别为0.84和0.81,AUC为0.90,cut-off值为0.055mol/L,AUC 95%CI:0.898~0.971。结论缺血性卒中患者血浆磷酸化α-Syn水平和血浆α-Syn磷酸化形成比例较健康者增高。     

hnRNP B1特异性小干扰RNA对肺癌细胞及p53表达影响的研究进展

核内不均一核糖核蛋白(hnRNP)B1的高表达是肺癌频发早期事件,可能与细胞分化失调控有关. p53是目前公认的一种抑癌基因,当细胞受到各种信号刺激引起基因应激反应时,p53蛋白被磷酸化而变构从而被活化,抑制细胞的分裂、增殖和诱导细胞凋亡,防止细胞的恶性转化.应用RNA干扰技术中的小干扰RNA使hnRNP B1基因沉默,能使p53基因的活性增强,从而抑制细胞的恶性转化.本文就hnRNP B1特异性小干扰RNA对肺癌细胞p53基因表达影响的研究进展作一综述.     

一种狂犬病实验室诊断用单克隆抗体制备新路线的探索

目的 探索采用合成肽作为免疫原制备狂犬病实验室诊断用单克隆抗体的可行性.方法 以狂犬病病毒CVS-11核蛋白355-369位B细胞线性抗原表位合成肽与钥孔戚血蓝蛋白（Keyhole Limpe hemocyanin,KLH）大分子耦联后免疫BALB/c小鼠,利用经典杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体.采用间接酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）和间接荧光试验（indirect fluorescent assay,IFA）筛选和鉴定杂交瘤细胞株.结果 经过对杂交瘤细胞株上清的间接ELISA和IFA筛选获得阳性杂交瘤细胞株2B1D11,该杂交瘤细胞株产生的抗体经纯化后在IFA中可以有效检出感染犬脑组织和BHK-21细胞的狂犬病病毒.结论 采用合成肽作为免疫原制备狂犬病实验室诊断用抗体在技术上是可行的.     

JNK信号通路对NaAsO2诱导NIH3T3细胞中hnRNP K蛋白聚集体形成的影响

 目的：观察核不均一核糖核蛋白(hnRNP)K的表达与定位以及亚砷酸钠（NaAsO2）刺激NIH3T3细胞的反应情况及氧化应激变化,探讨JNK信号通路在hnRNP K蛋白聚集体形成中的作用。方法：构建重组载体pcDNA3-hnRNP K-HA,转染NIH3T3细胞,荧光显微镜观察内源性hnRNP K在细胞中的表达与定位,以及在NaAsO2不同刺激时间该蛋白聚集体的形成情况,并利用活性氧（ROS）检测试剂盒测定胞内ROS水平;给予JNK、MEK、PI3K/Akt、NF-κB和核转运等5种信号通路的抑制剂预处理后,观察聚集体的变化情况。结果：重组质粒构建正确,荧光显微镜观察显示hnRNP K主要定位于胞核中,而重组质粒转染NIH3T3细胞后,可见胞内有蛋白聚集体形成并随NaAsO2刺激时间的延长而递增,且过表达hnRNP K可抑制NaAsO2刺激细胞生成ROS;JNK信号通路抑制剂SP600125明显抑制聚集体的形成。结论：hnRNP K主要定位在NIH3T3细胞的胞核中,胞浆少量分布;NaAsO2可诱导NIH3T3细胞形成hnRNP K蛋白聚集体,此聚集体可抑制胞内ROS生成,且该聚集体的形成有赖于JNK介导的信号通路。     

人异质性胞核核糖核蛋白I(hnRNP I)原核表达及初步应用

目的:克隆人异质性胞核核糖核蛋白I(hnRNP I)基因并构建原核表达载体,用纯化的重组蛋白进行系统性硬化症(SSc)体外诊断应用研究.方法:从体外培养的HeLa细胞中提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增hnRNP I基因,构建原核表达载体pET-30a-hnRNP I,在原核表达系统E.coli BL21(DE3)中表达重组蛋白.重组蛋白纯化后作为抗原对包括系统性硬化症(SSc)、系统性红斑狼疮(SLE)、干燥综合征(SS)、混合型结缔组织病(MCTD)、未分化型结缔组织病(UCTD)、类风湿性关节炎(RA)、正常对照(control)在内的血清相应抗体进行ELISA检测.结果:成功构建了原核表达载体pET-30a-hnRNP I,在IPTG诱导下在E.coli BL21(DE3)中高效表达相对分子质量(M_r)为59 600的重组hnRNP I蛋白,重组蛋白可以可溶蛋白和包涵体蛋白两种形式存在.hnRNP I蛋白抗体在SSc中阳性率(48.72%)明显高于其他各组(P<0.05).结论:利用构建的原核表达载体成功表达出hnRNP I蛋白,此重组蛋白可用于SSc的临床诊断检测. UCTD) 类风湿性关节炎(RA)、正常对照(control)在内的血清相应抗体进行ELISA检测.结果:成功构建了原核表达载体pET-30a-hnRNP I,在IPTG诱导下在E.coli BL21(DE3)中高效表达相对分子质量(Mr)为59 600的重组hnRNP I蛋白,重组蛋白可以可溶蛋白和包涵体蛋白两种形式存在.hnRNP I蛋白抗体在SSc中阳性率(48.72%)明显高于其他各组(P<0.05).结论:利用构建的原核表达载体成功表达出hnRNP I蛋白,此重组蛋白可用于SSc的临床诊断检测. UCTD) 类风湿性关节炎(RA)、正常对照(control)     

康复训练对脑出血大鼠神经细胞再生的影响

目的 探讨康复训练对大鼠脑出血后神经细胞再生的影响.方法 将75只SD大鼠分为康复组、制动组和假手术组,每组25只.康复组和制动组应用胶原酶Ⅶ注射入苍白球诱导脑出血模型,假手术组用生理盐水替代胶原酶.康复组每天予以抓握、平衡、旋转等训练,制动组置于网状笼内固定.各组分成脑出血后第1,4,7,14,28天共5个时间点,每...     

癫痫患儿血清α-突触核蛋白和热休克蛋白70的表达及临床意义

目的探讨癫痫患儿血清α-突触核蛋白(α-Syn)、热休克蛋白70(HSP70)的变化,分析二者与认知功能、事件相关电位、血清炎症细胞因子的关系。方法选取该院2016年8月至2019年8月收治的癫痫患儿105例作为癫痫组,根据癫痫类型进一步分为癫痫1组(癫痫频发)、癫痫2组(癫痫持续状态)、癫痫3组(非频发非持续状态)。另选取同期体检的健康儿童68例为健康对照组。检测并比较各组血清α-Syn、HSP70、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。观察各组中国韦氏儿童智力量表(C-WISC)评分及事件相关电位P300。分析血清α-Syn、HSP70水平与认知功能、事件相关电位P300潜伏期、炎症因子的相关性。结果癫痫组血清α-Syn、HSP70、IL-1β、IL-6、CRP、TNF-α水平高于健康对照组,P300潜伏期较健康对照组延长,而C-WISC评分低于健康对照组,差异有统计学意义(P0.05)。癫痫1组、癫痫2组的血清α-Syn、HSP70、IL-1β、IL-6、CRP、TNF-α水平均高于癫痫3组,且P300潜伏期长于癫痫3组,而癫痫1组、癫痫2组的C-WISC评分低于癫痫3组,差异有统计学意义(P0.05)。Pearson线性相关分析显示,血清α-Syn、HSP70水平与C-WISC评分呈负相关,而与P300潜伏期及血清IL-1β、IL-6、CRP、TNF-α水平呈正相关(P0.05)。结论与健康儿童相比,癫痫患儿血清α-Syn、HSP70水平明显增高,二者水平变化与认知功能、P300潜伏期及机体炎症密切相关。     

α-Synuclein磷酸化修饰提高MN9D细胞内TH的活性

目的观察突触核蛋白(α-Synuclein,α-SYN)第129位丝氨酸(Ser129)磷酸化修饰对酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)活性的影响。方法应用重叠延伸PCR定点突变法将129位丝氨酸编码碱基TCT突变为天冬氨酸(Asp,D)编码碱基GAT,获得编码模拟磷酸化α-Syn(S129D α-SYN)的DNA序列,插入逆转录病毒真核表达载体(pLNCX2)。包装逆转录病毒颗粒并感染多巴胺能神经细胞MN9D。通过实时定量RT-PCR鉴定α-SYN基因表达,Western blot检测TH磷酸化水平。结果pLNCX2-α-SYN(wild type/S129D)质粒测序结果正确,并在MN9D细胞中均过表达。野生型α-SYN过表达组同正常对照组相比TH磷酸化水平降低(P<0.01),而S129D α-SYN组TH的磷酸化水平同正常对照组相比明显升高(P<0.05)。结论在MN9D细胞中,野生型α-SYN抑制TH的活性,而α-SYN Ser129磷酸化后TH活性明显升高。     

X盒结合蛋白1转染神经干细胞移植帕金森大鼠黑质中相关递质及核蛋白的表达

背景：既往研究发现,X盒结合蛋白1基因可以转染至神经干细胞中并稳定过表达X盒结合蛋白1,转染后的神经干细胞移植对脑梗死的治疗作用优于普通神经干细胞。目的：通过测定转染后神经干细胞移植对帕金森大鼠模型黑质内单胺类递质和α-突触核蛋白水平的影响,研究转染后的神经干细胞移植对帕金森病的治疗作用。方法：将27只帕金森病大鼠随机数字表法均分为3组。对照组侧脑室内移植PBS,神经干细胞组移植空白神经干细胞悬液,转染组移植X盒结合蛋白1基因修饰神经干细胞悬液。分别于移植后7,14,21,28d对各组大鼠进行诱导旋转实验观察神经功能：Westernblot检测α-突触核蛋白水平;黑质切片后免疫组化染色测酪氨酸羟化酶（＋）神经细胞。结果与结论：转染组大鼠黑质内α-突触核蛋白表达量降低,酪氨酸羟化酶（＋）神经细胞数高于神经干细胞组和对照组,且大鼠旋转实验中旋转行为改善。表明在帕金森病中,X盒结合蛋白1转染的神经干细胞分化为多巴胺能神经元的分化率高,转染后可降低α-突触核蛋白的聚集,从而改善帕金森症状起到治疗目的。     

肌萎缩侧索硬化中病理性TDP-43蛋白研究进展

肌萎缩侧索硬化(ALS)是一种神经系统变性疾病(neu-rological degenerative diseases)。变性疾病大部分是异质性的,而基因突变造成神经元或胶质细胞内的异常蛋白表达和聚集却常常是共性的。如阿尔茨海默病时的β样淀粉样蛋白变性及微管相关蛋白(tau)病理即为老年斑及神经原纤维缠结主要组成成分即淀粉样原纤维蛋白聚集物[1],路易体(Lewy)中的a-共核蛋白也是构成帕金森病的病理基础。近