TNF—α对新生大鼠成骨细胞产生一氧化氮的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子α（TNF－α）对体外培养成骨细胞产生一氧化氮（NO）的影响。方法 体外培养新生大鼠成骨细胞内加入不同浓度的TNF－α（20、30、40ng/ml),培养24、48h,用亚硝酸盐法测量培养液内NO的变化。结果 在30．40ng/ml浓度的TNF－α作用48h,NO产生较对照组明显升高（P＜0．05）。结论 TNF－α可刺激成骨细胞产生NO,而NO作为一高效细胞毒效应分子与骨丢失有关。     

鼠牙乳头细胞核心结合因子cDNA片段的克隆与序列测定

目的 从培养大鼠牙头细胞中克隆核心结合因子（cbfal）的cDNA片段。方法 原代培养大鼠牙乳头细胞,提取培养细胞的总RNA,逆转录合成cDNA,用PCR的方法扩增cbfal基因片段。将获得的预期大小的PCR产物插入pUC18克隆载体中,转化TOP10感受态细胞,蓝白筛选白色克隆,进行体外扩增,提取质粒进行酶切鉴定,含目的插段的克隆在PE317-A自动测序仪上进行序列测定。结果 从培养的鼠牙乳头细胞提取的总RNA中成功克隆出691bp cbfal基因片段,测序结果和GenBank报道序列完全一致。结论 从鼠牙乳头细胞中成功克隆到cbfal基因片段,确切的证实了核心结合因子（cbfal）基因在鼠牙乳头细胞中的表达。     

Ⅰ型胶原-整合素α2β1系统对成骨细胞生物学特性的调控

为进一步探讨I型胶原及其受体系统是否为成骨细胞功能活动所必需, 使用Ⅰ型胶原和整合素α2β1的一抗阻断Ⅰ型胶原整合素α2β1系统,以细胞计数法比较成骨细胞的增殖能力,流式细胞仪分析成骨细胞的凋亡情况,RTPCR技术研究I型胶原、整合素α2β1 及骨钙素的mRNA表达情况。结果发现阻断I型胶原整合素α2β1系统后,成骨细胞的增殖能力减弱,凋亡率增高,Ⅰ型胶原、整合素α2β1 及骨钙素的mRNA表达减少,其中I型胶原一抗的阻断作用大于整合素α2β1的一抗,这种阻断作用具有可复性,随抗体的去除可部分恢复,表明Ⅰ型胶原整合素α2β1系统为成骨细胞功能活动所必需,构建骨组织工程的支架材料时要考虑到骨组织的基质成份,应为成骨细胞提供相对正常的胞外基质环境。     

丹参对人成骨细胞缺血-再灌注损伤的保护作用

观察丹参对成骨细胞缺血－再灌注损伤的保护作用。方法：以人髂骨骨膜为材料进行成骨细胞的体外培养,经丹参预处理后,行模拟缺血－再灌注采用唑蓝比色法测定细胞的夏活率。结果：预处理组成骨细胞的存活率明显高于对照组。结论：丹参对人成骨细胞缺血－再灌注有明显的保护作用。     

兔成骨细胞两种分离方法的比较

比较了两种分离兔骨外膜成骨细胞的方法。结果表明：原分离方法（先用０．１２５％胰蛋白酶消化３０ｍｉｎ,再用０．１％胶原酶消化２ｈ）对成骨细胞破坏严重,培养成活率仅为１２．５％（１／８）。而新的分离方法（先用０．１％胶原酶消化１ｈ,再用０．１２５％胰蛋白酶消化３ｍｉｎ）对成骨细胞破坏甚微,培养存活率可达８７．５％（７／８）。     

锌促进体外培养大鼠成骨细胞的增殖及分化

目的　研究锌对体外培养大鼠成骨细胞增殖和分化的影响。方法　从大鼠颅骨分离出成骨细胞,于 Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ 培养基中进行传代培养。实验设置４ 个组,分别为对照组和１０ μｍｏｌ／ Ｌ、２５ μｍｏｌ／ Ｌ及５０ μｍｏｌ／ Ｌ Ｚｎ２ ＋ ３ 个剂量组,采用３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 参入法确定成骨细胞在不同时点 Ｄ Ｎ Ａ 的合成状况,应用流式细胞仪技术分析细胞周期、３ Ｈ脯氨酸参入法测定胶原蛋白的合成;采用酶动力学和放免方法分别测定碱性磷酸酶活性和骨钙素含量。结果　３ 个锌剂量组细胞３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 掺入量在各个时点均明显高于对照组;２５ μｍｏｌ／ Ｌ 及５０ μｍｏｌ／ Ｌ Ｚｎ２ ＋ 可以促进成骨细胞从 Ｇ０／ Ｇ１ 期向 Ｓ期转化。３ 个锌剂量组胶原蛋白、骨钙素的合成量、碱性磷酸酶活性均高于对照组。结论　锌能够促进体外培养大鼠成骨细胞的增殖及分化。     

缺锌抑制体外培养大鼠成骨细胞的增殖及分化

为了研究缺锌对体外培养大鼠成骨细胞增殖和分化的影响,从大鼠颅骨分离出成骨细胞,并于ＤＭＥＭ培养基中进行传代培养。锌特异性络合剂ＴＰＥＮ络合掉培养基中的锌建立细胞体外培养的缺锌模型。采用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法确定成骨细胞在不同时点ＤＮＡ的合成状况,同时应用流式细胞仪进行细胞周期的分析;采用组织学方法观察细胞骨架的变化、３Ｈ－脯氨酸掺入法确定胶原蛋白的合成;采用酶动力学和放免方法分别测定碱性磷酸酶活性和骨钙素含量。结果表明,缺锌组成骨细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入量在各个时点明显低于对照组,细胞被阻滞于细胞周期中Ｇ２／Ｍ期,这与细胞骨架受损密切相关。缺锌组胶原蛋白合成、骨钙素含量及碱性磷酸酶活性明显低于对照组。但缺锌补锌组的各个指标与对照组相比无统计学差异。因此,缺锌能够抑制体外培养大鼠成骨细胞的增殖和分化。     

益骨胶囊对成骨细胞增殖影响的时效及量效关系研究

目的 :运用中药血清药理学方法 ,观察益骨胶囊含药血清对新生大鼠颅骨成骨细胞 (OB)体外增殖的影响 ,并探讨用于OB药效观察的益骨胶囊含药血清制备条件。方法 :雌性 12月龄SD大鼠 80只 ,随机分为生理盐水组、益骨胶囊低剂量 (11 6g/kg)、中剂量 (34 8g/kg)、高剂量 (10 4 4g/kg)组 ,每日灌胃一次 ,连续 12天 ,分别在灌胃后的 0 5h、1h、1 5h、2h采血 ,分离血清 ,用含不同浓度益骨胶囊的血清培养SD新生大鼠颅骨OB ,MTT法检测细胞增殖情况。结果 :末次灌胃后 1 5h采血组的吸收度 (A)值明显高于各组其它时间 (P <0 0 5 ) ;不同剂量各浓度的益骨胶囊含药血清对体外培养的OB增殖均有显著的促进作用 ,其中以高剂量组的稀释比为 2 5 %的血清浓度最佳。结论 :益骨胶囊含药血清对OB增殖具有明显的促进作用 ;益骨胶囊用于OB药效观察的大鼠含药血清制备条件以人等效剂量 9倍连续 12天灌胃、末次灌胃后 1 5h采血 ,血清添加浓度以 2 5 %为宜。     

OPG与RANKL系统及其临床应用前景

护骨素 (Osteoprotegerin,OPG)、细胞核因子_κB受体活化因子配基(ReceptoractivatorofNF_κBligand,RAN KL)、细胞核因子_κB受体活化因子 (ReceptoractivatorofNF_κB ,RANK)这3种因子是1997年—1999年分别由细胞生物学、免疫学、骨生物学和分子遗传学等领域的研究者从不同角度分别在纤维原细胞、脾细胞、T淋巴细胞、成骨细胞(OB)、基质细胞 (SC)、破骨细胞 (OC)和滤泡树状细胞等细胞中发现的[1,2]。1概述OPG是肿瘤坏死因子受体 (TNFR)家族成员 ,其cDNA编码一401个氨基酸的多肽原 ,包括21个氨基酸的信号肽 ,切除后留下成…